一种建立羽扇豆再生体系的方法技术

本发明专利技术提供了一种建立羽扇豆再生体系的方法，属于植物组织培养技术领域。本发明专利技术包括以下步骤：以羽扇豆种子为外植体，培育成无菌苗；以无菌苗下胚轴、茎段或复叶叶柄为材料，经愈伤组织诱导

【技术实现步骤摘要】
一种建立羽扇豆再生体系的方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养
，尤其涉及一种建立羽扇豆再生体系的方法。

技术介绍

[0002]羽扇豆(Lupinus micranthus Guss.)，蝶形花科羽扇豆属植物，一年生草本，原产地中海区域。羽扇豆具掌状复叶，小叶5
‑
8枚；小叶倒卵形、倒披针形至匙形，总状花序顶生，花序挺拔、丰硕，花色艳丽多彩，有白、红、蓝、紫等多种花色，且花期长，可用于片植或在带状花坛群体配植，同时也是切花生产的好材料；因其根系具有固氮的功能，在茶园中广泛种植。同时，羽扇豆中所含的羽扇豆醇能抑制多种癌细胞的增殖，诱导其凋亡；其种子的提取物对慢性湿疹也具有良好的治疗效果。综上可知，羽扇豆是一种集观赏、药用、经济价值于一体的植物，在园林观赏、饲料加工、食品开发、绿肥应用和药用等方面均展现出较好的利用前景。
[0003]羽扇豆作为一年生草本植物，通常以种子繁殖的方式进行种植、繁殖，长期的自花授粉必然会导致种质退化。在无性繁殖方式中，组织培养以其超高的繁殖系数和已获得高品质的种苗最受青睐。吕晋慧(2009)和王小玲等(2008)分别对羽扇豆属矮生羽扇豆(L.polyphyllus)品种
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Gallery
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Minaretie
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Russell Prize
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的组培快繁技术进行了研究：以无菌种子苗的根茎和茎尖为外植体，以MS为基本培养基，添加一定浓度的6<br/>‑
BA和NAA，可诱导其产生丛生芽，增殖系数最高可达14.8倍；韩丹女等(2007)以三色羽扇豆(L.hartwegii)叶柄为外植体，以MS为基本培养基，添加一定浓度的6
‑
BA和2,4
‑
D，建立了其再生体系。
[0004]而基于羽扇豆自身植物特性，已有的羽扇豆属组培快繁技术并不适用。因此，迅速建立羽扇豆再生体系，以获得大量丛生芽，进而获得一致性好、健壮的植株，为羽扇豆的规模化栽培和园林造景具有重要意义。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种建立羽扇豆(Lupinus micranthus Guss.)再生体系的方法，以羽扇豆种子作为外植体进行组织培养，并调控培养基成分，其诱导率、增殖率高，褐化率低，生根性状好，可获得大批量一致性好、健壮的种苗植株。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]一种建立羽扇豆再生体系的方法，包括以下步骤：
[0008]以羽扇豆种子为外植体，培育成无菌苗；以无菌苗下胚轴、茎段或复叶叶柄为材料，经愈伤组织诱导
‑
增殖培养、分化培养、壮芽培养、生根培养获得再生种苗；
[0009]所述愈伤组织诱导
‑
增殖培养，以B5为基本培养基，添加蔗糖28
‑
32g/L，琼脂6.5
‑
7.0g/L，KT 1.0
‑
2.0mg/L，2,4
‑
D 0.5
‑
1.0mg/L，碳纳米管1.0
‑
2.0mg/L；
[0010]所述分化培养，以B5为基本培养基，添加蔗糖28
‑
32g/L，琼脂6.5
‑
7.0g/L，NAA 1.0
‑
1.5mg/L，碳纳米管0.5
‑
1.5mg/L；
[0011]所述壮芽培养，以B5为基本培养基，添加蔗糖38
‑
42g/L，琼脂6.5
‑
7.0g/L，6
‑
BA0.3
‑
0.8mg/L，NAA 0.1
‑
0.5mg/L，碳纳米管2.0
‑
5.0mg/L；
[0012]所述生根培养，以MS为基本培养基，添加蔗糖28
‑
32g/L，琼脂6.5
‑
7.0g/L，IBA 1.5
‑
2.5mg/L，碳纳米管0.1
‑
1.0mg/L。
[0013]优选的是，所述种子培育成无菌苗，以MS、1/2MS、1/3MS或1/4MS为基本培养基，添加琼脂6.5
‑
7.0g/L，pH 5.75
‑
5.85。
[0014]优选的是，所述种子进行消毒，包括75％的酒精消毒30
‑
45s，无菌水冲洗2
‑
3次；0.1％HgCl2消毒40
‑
45min，无菌水冲洗4
‑
5次。
[0015]优选的是，所述下胚轴、茎段或复叶叶柄切成1.0
‑
2.0cm，进行愈伤组织诱导
‑
增殖培养。
[0016]优选的是，所述愈伤组织诱导
‑
增殖培养，培养基中还添加有活性炭1.0
‑
3.0g/L，酪蛋白水解物0.5
‑
1.5g/L，谷氨酰胺1.0
‑
3.0mg/L。
[0017]优选的是，所述愈伤组织诱导
‑
增殖培养、分化培养、壮芽培养、生根培养阶段，温度25
±
1℃，光照强度100
‑
300μmol
·
m
‑2·
s
‑1，光照14
‑
18h/d。
[0018]优选的是，还包括获得再生种苗后，进行室内炼苗、移栽。
[0019]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0020]本专利技术提供了一种建立羽扇豆再生体系的方法，以羽扇豆种子作为外植体，容易无菌化，避免了成株羽扇豆密被绒毛诱导率低、易污染的问题，也利于种质保存及新品种的推广应用。
[0021]以培育得到的无菌苗的下胚轴、茎段或复叶叶柄作为繁殖材料进行诱导培养，诱导率高，接近100％。
[0022]在愈伤组织诱导
‑
增殖培养、分化培养、壮芽培养阶段以B5作为基本培养基，降低了组织培养过程中的褐化率。
[0023]通过调整愈伤组织诱导
‑
增殖培养、分化培养、壮芽培养、生根培养阶段培养基添加的外源激素种类与浓度，提升了诱导率、分化率，可获得大量丛生芽，生根率达到85％以上。
[0024]本专利技术通过羽扇豆再生体系的建立，获得大量丛生芽，进而获得一致性好、健壮的植株，确保观赏效果、药材的质量和营养价值，为羽扇豆的规模化栽培提供技术支撑。
附图说明
[0025]图1：种子接种及无菌苗的获取；
[0026]图2：愈伤组织诱导培养阶段；
[0027]图3：愈伤组织增殖培养阶段；
[0028]图4：愈伤组织的褐化修复；
[0029]图5：愈伤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种建立羽扇豆再生体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：以羽扇豆种子为外植体，培育成无菌苗；以无菌苗下胚轴、茎段或复叶叶柄为材料，经愈伤组织诱导
‑
增殖培养、分化培养、壮芽培养、生根培养获得再生种苗；所述愈伤组织诱导
‑
增殖培养，以B5为基本培养基，添加蔗糖28
‑
32g/L，琼脂6.5
‑
7.0g/L，KT 1.0
‑
2.0mg/L，2,4
‑
D 0.5
‑
1.0mg/L，碳纳米管1.0
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2.0mg/L；所述分化培养，以B5为基本培养基，添加蔗糖28
‑
32g/L，琼脂6.5
‑
7.0g/L，NAA 1.0
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1.5mg/L，碳纳米管0.5
‑
1.5mg/L；所述壮芽培养，以B5为基本培养基，添加蔗糖38
‑
42g/L，琼脂6.5
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7.0g/L，6
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BA0.3
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0.8mg/L，NAA 0.1
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0.5mg/L，碳纳米管2.0
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5.0mg/L；所述生根培养，以MS为基本培养基，添加蔗糖28
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32g/L，琼脂6.5
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7.0g/L，IBA 1.5
‑
2.5mg/L，碳纳米管0.1
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1.0mg/L。2.根据权利要求1所述的建立羽扇豆再生...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾永华，李冬玲，全大治，高福洪，廖盼华，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：