一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA、引物对及其应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物技术领域，特别是涉及一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA、引物对及其应用。本发明专利技术提供了一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA，所述dsRNA包括dsCSP3、dsCSP5、dsOBP14、dsOBP28、dsOR1和dsSNMP1中的一种或多种。本发明专利技术提供的dsRNA可以高效沉默云杉花墨天牛的嗅觉基因，能够导致云杉花墨天牛嗅觉识别能力下降，影响成虫交配，最终达到防治的效果，本发明专利技术为防治云杉花墨天牛提供了新的有效途径。本发明专利技术提出可利用嗅觉基因的沉默技术来防治松材线虫重要媒介昆虫云杉花墨天牛，为绿色防治林业害虫提供了一个新的思路和技术。和技术。和技术。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA、引物对及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物
，特别是涉及一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA、引物对及其应用。

技术介绍

[0002]松材线虫Bursaphelenchus xylophilus在全球及我国的森林资源造成了严重破坏了许多国家的松林(Nickle,W.R.(1970).A taxonomic review of the genera of the aphelenchoidea(fuchs,1937)thorne,1949(nematoda:tylenchida).Journal of nematology 2(4),375
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392.)，松材线虫的传播与其昆虫媒介密切相关(张建军,张润志,陈京元.松材线虫媒介昆虫种类及其扩散能力[J].浙江林学院学报,2007,24(3):350
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6.)。云杉花墨天牛Monochamus saltuarius(鞘翅目：天牛科)是中国东北部一种新记录的媒介，是松材线虫传入北方地区的最重要媒介昆虫，对我国东北地区的松林造成严重威胁。
[0003]RNA干扰(RNAi)是一种高度保守的细胞机制，通过内源性或外源性小RNA诱导RNA降解(Neumeier,J.,and Meister,G.(2021).siRNA Specificity:RNAi Mechanisms and Strategies to Reduce Off
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Target Effects.Frontiers in Plant Science 11,526455.)。RNA干扰技术具有高度特异性，对作物、人类和动物无害，具有很大的应用潜力。该技术已成为开发新的森林害虫管理方法的重要选择。
[0004]靶基因筛选是将RNAi用作害虫防治技术的先决条件(Rodrigues,T.B.,Rieske,L.K.,J Duan,J.,Mogilicherla,K.,and Palli,S.R.(2017).Development of RNAi method for screening candidate genes to control emerald ash borer,Agrilus planipennis.Scientific reports 7(1),7379
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7379.doi:10.1038/s41598
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x.)。云杉花墨天牛生命周期的大部分阶段生活在寄主树木的韧皮部和形成层区域，这种隐藏的生活史使其种群比许多农业害虫更难控制。因此，云杉花墨天牛的成体阶段是唯一一个在寄主外的自由阶段，对其控制至关重要。化学感觉系统，特别是嗅觉系统在云杉花墨天牛成虫阶段的取食、交配和产卵过程中起着重要作用。因此，嗅觉识别相关基因是云杉花墨天牛成虫阶段RNA干扰的良好候选靶基因，但是云杉花墨天牛嗅觉蛋白相关的研究还较少。有必要在云杉花墨天牛中开展基于嗅觉及嗅觉蛋白的研究，并用于其防治。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA、引物对及其应用。本专利技术提供的dsRNA可以高效的沉默云杉花墨天牛的嗅觉基因，能够导致云杉花墨天牛嗅觉识别能力下降，影响成虫交配，最终达到防治的效果。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA，所述dsRNA包括dsCSP3、dsCSP5、dsOBP14、dsOBP28、dsOR1和dsSNMP1中的一种或多种；所述dsCSP3的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述dsCSP5的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所
示；所述dsOBP14的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述dsOBP28的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述dsOR1的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述dsSNMP1的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
[0008]本专利技术还提供了一种扩增上述方案所述dsRNA的引物组，所述引物组包括引物对1～6中的一种或多种；引物对1的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；引物对1的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；引物对2的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；引物对2的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；引物对3的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示；引物对3的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；引物对4的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示；引物对4的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示；引物对5的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示；引物对5的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.16所示；引物对6的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.17所示；引物对6的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.18所示。
[0009]本专利技术还提供了上述方案所述dsRNA的制备方法，包括以下步骤：
[0010]以云杉花墨天牛的cDNA为模板，利用上述方案所述的引物组进行PCR扩增，得到PCR产物；以所述PCR产物为模板，采用dsRNA合成试剂盒制备得到所述dsRNA。
[0011]本专利技术还提供了上述方案所述的dsRNA或上述方案所述的引物组或利用上述方案所述制备方法得到的dsRNA在防治云杉花墨天牛中的应用。
[0012]本专利技术还提供了上述方案所述的dsRNA或上述方案所述的引物组或利用上述方案所述制备方法得到的dsRNA在制备防治云杉花墨天牛的产品中的应用。
[0013]本专利技术还提供了上述方案所述的dsRNA或上述方案所述的引物组或利用上述方案所述制备方法得到的dsRNA在降低云杉花墨天牛嗅觉识别能力中的应用。
[0014]本专利技术还提供了上述方案所述的dsRNA或上述方案所述的引物组或利用上述方案所述制备方法得到的dsRNA在制备降低云杉花墨天牛嗅觉识别能力的产品中的应用。
[0015]本专利技术还提供了一种防治云杉花墨天牛的制剂，所述制剂包括上述方案所述的dsRNA。
[0016]本专利技术还提供了一种防治云杉花墨天牛的方法，包括：将上述方案所述的dsRNA或利用上述方案所述制备方法得到的dsRNA导入云杉花墨天牛体内。
[0017]优选的，所述导入的方法包括注射。
[0018]有益效果：
[0019]本专利技术提供了一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA，所述dsRNA包括dsCSP3、dsCSP5、dsOBP14、dsOBP28、dsOR1和dsSNMP1中的一种或多种；所述dsCSP3的其中一条链的核苷酸序列如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向云杉花墨天牛嗅觉基因的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA包括dsCSP3、dsCSP5、dsOBP14、dsOBP28、dsOR1和dsSNMP1中的一种或多种；所述dsCSP3的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述dsCSP5的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述dsOBP14的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述dsOBP28的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述dsOR1的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述dsSNMP1的其中一条链的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。2.一种扩增权利要求1所述dsRNA的引物组，其特征在于，所述引物组包括引物对1～6中的一种或多种；引物对1的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；引物对1的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；引物对2的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；引物对2的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；引物对3的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示；引物对3的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；引物对4的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示；引物对4的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示；引物对5的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示；引...

【专利技术属性】
技术研发人员：张苏芳，张荣，张珣，樊智智，张真，孔祥波，刘福，方加兴，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所，
类型：发明
国别省市：