一种CD16抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种抗人CD16的抗体，由轻链和重链组成，所述的轻链和重链为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，同时提供了编码上述抗体的核酸分子、含有上述核酸的载体、上述载体转化的宿主细胞及其应用。本发明专利技术还提供了一种使用荧光染料标记该抗体的方法，同时公布了一种检测前述荧光染料标记抗体的方法。本发明专利技术提供的抗体为高表达序列，表达量高且杂质少，易纯化收集得到，降低纯化收集成本，有利于大规模生产及应用。应用。应用。

【技术实现步骤摘要】
一种CD16抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种CD16抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]CD16(Cluster of differenciation antigen
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16)也称“FcγRIII”，为分子量50000
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70000的糖蛋白，是Fc受体家族的一员。最初作为在机体先天性免疫系统(自然杀伤细胞、单核细胞和巨噬细胞等)表达的白细胞分化抗原分子，以单核巨噬细胞的一种分化标志提出。CD16结合抗体免疫球蛋白Fc部分，进而激活NK细胞，促进免疫系统的保护功能。FcγRIII有FcγRⅢA和FcγRⅢB两种异型，为穿膜结构，主要分布于巨噬细胞、NK细胞和嗜酸性粒细胞等免疫细胞，巨噬细胞表达高水平FcγRⅢA，而单核细胞表达水平较低。FcγRⅢA与二硫键连接的CD3ζ或FcεRⅠγ链双体相关，巨噬细胞上FcγRⅢA与CD3复合体γ链相关，NK/LGL上FcγRⅢA则与ζ链相关。TGF
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β促进培养的单核细胞表达FcγRⅢA。FcγRⅢB，通过GPI“锚”在中性粒细胞表面，每个人中性粒细胞表达10万～20万血液中可溶性的FcγRⅢ主要来自这种形式，中性粒细胞激活剂短时间处理后可明显降低FcγRⅢB的表达水平，可能与通过激活内源性蛋白酶切除GPI连接分子有关。
[0003]CD16是淋巴系统中与单核细胞和自然杀伤(NK)细胞相关的生物标记物。免疫组化检测CD16可用于从诸如粘膜和皮肤γ
‑r/>δT细胞淋巴瘤等外周T细胞淋巴瘤中鉴别诊断肝脾的γ
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δT细胞淋巴瘤和γ
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δT细胞大颗粒淋巴细胞白血病。据报道，约58％的肝脾的γ
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δT细胞淋巴瘤和86％的γ
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δT细胞大颗粒淋巴细胞白血病CD16有表达，而皮肤和粘膜γ
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δT细胞淋巴瘤不表达CD16。该抗体也能用于NK细胞在自身免疫、肿瘤和感染性疾病的相关研究。
[0004]中国专利技术专利CN201611041756.6公开了能特异性结合CD16的全人源单域抗体及其抗原结合片段。此单域抗体是由存在于抗体重链基因可变区中的互补决定区(CDR)特异性基因序列决定的，并在原核和真核细胞中获得有效表达的特异性结合CD16的抗体。利用此抗体CDR区或部分或全基因，可在原核和真核细胞及任何表达系统中改造和生产不同形式的基因工程抗体，可用于制备在临床上诊断或治疗相关疾病的制剂。
[0005]传统的科研，诊断检测抗体都是通过动物杂交瘤的方式制备，在制备这些抗体时，由于杂交瘤不稳定，抗体基因容易丢失。此外，传统的杂交瘤制备技术不会对目标抗体的基因序列及蛋白序列进行鉴定，不利于对目标抗体后续的生产，制备及研发工作。
[0006]本专利技术经过逆向技术以及蛋白测序，获得了一种序列结果明确CD16抗体，蛋白测序后设计DNA序列，通过构建CHO细胞重组表达该抗体。本专利技术首次公布了所述序列的抗人CD16抗体的蛋白序列，对该蛋白序列一致的抗体及相关衍生抗体请求保护。
[0007]此外，本专利技术还公布了前述稳转CHO细胞株所产抗人CD16抗体，命名克隆号为HCD16
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02(通俗命名Rec.3G8)及使用荧光染料标记该抗体的方法，同时公布了一种使用流式细胞仪检测前述荧光染料标记抗体的方法。

技术实现思路

[0008]本专利技术的术语和声明：
[0009]1、如本文所用，冠词"一个"、"一种"和"所述"：除非以其它方式明确地限定到一个(种)对象，否则包括复数的对象。
[0010]2、如本文所用，数值范围：除非以其他方式明确指出，本文中公开的所有范围或比率将会被理解为包括其中包含的任何和所有的子范围或子比率。例如，声明的1至30的范围或比率应当被认为包含在最小值1和最大值30之间，并且包括断端点在内的任何子范围或子比率、整数、小数或由整数或小数构成的子范围或子比率。
[0011]3、如本文所用，术语“氨基酸”：包含天然氨基酸、合成氨基酸、以及以类似于天然氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸在本文中可以由其通常已知的三字母符号或由IUPAC
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IUB生物化学命名法委员会(Biochemical Nomenclature Commission)所推荐的单字母符号来提及。
[0012]4、如本文所用，术语“抗体”：指特异性结合和识别抗原(例如，CD16)的包括免疫球蛋白基因的构架区的多肽或其片段。术语抗体的使用意指包含全抗体和其抗原结合片段。术语抗体包含单特异性抗体、双特异性抗体和多特异性抗体，只要其表现所期望的生物活性或功能即可。
[0013]5、如本文所用，术语“全长抗体”：“完整抗体”和“全抗体”可与之互换使用，指基本上完整形式的抗体，与抗体片段不同。具体而言，完整抗体包括那些具有重链和轻链(包括Fc区)的。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。在有些情况中，完整抗体可具有一项或多项效应器功能。
[0014]6、如本文所用，术语“单克隆抗体”：指从实质上均质抗体的群体获得的抗体，即构成所述群体的个别抗体除了可以少量存在的可能天然存在的突变之外是相同的。单克隆抗体针对单一抗原位点具高度特异性。此外，相比于通常包含针对不同决定子(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定子。修饰语“单克隆”指示如从实质上均质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。
[0015]7、如本文所用，术语“决定簇互补区”：本文中又称互补决定区、高变区。本文中公开的决定簇互补区指抗体的重链或轻链可变区内的抗原结合点，即抗体中引起抗原结合的氨基酸残基。轻链和重链的决定簇互补区共同组成抗体的抗原结合部位。通常而言，抗体的轻链或重链的通常包含3个决定簇互补区。本文中的决定簇互补区指轻链的决定簇互补区时，简称为LCDR，并以数字指代3个不同的决定簇互补区，例如LCDR1、LCDR2、LCDR3。本文中的决定簇互补区指重链的决定簇互补区时，简称为HCDR，并以数字指代3个不同的决定簇互补区，例如HCDR1、HCDR2、HCDR3。
[0016]8、如本文所用，术语“可变区”：指抗体的轻链和重链靠近N端氨基酸序列变化较大的区域。
[0017]9、如本文所用，术语“Fc区”：用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和变异Fc区。虽然免疫球蛋白重链Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常定义为自其Cys226或Pro230位置的氨基酸残基至羧基末端的区段。
[0018]10、在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。在多个从属权利要求的情况下，仅仅在替代方案中使用“或”引用一个以上的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人CD16抗体，其特征在于，所述的抗人CD16抗体包括：(1)含有序列如SEQ ID NO:1所示的轻链，或者与SEQ ID NO:1至少具有85％的序列相似性的任意一个或多个氨基酸序列；(2)含有序列如SEQ ID NO:2所示的重链，或者与SEQ ID NO:2至少具有85％的序列相似性的任意一个或多个氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗人CD16抗体，其特征在于，所述的抗人CD16抗体为单克隆抗体。3.根据权利要求1所述的抗人CD16抗体，其特征在于，所述的抗人CD16抗体为鼠源化抗体。4.一种核酸分子，其特征在于，所述的核酸分子编码权利要求1
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3任一项所述的抗人CD16抗体的氨基酸序列。5.一种生物学表达载体，其特征在于，所述的生物学表达载体包含权利要求4所述的核酸分子。6.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包含权利要求4所述的核酸分子和/或权利要求5所述的生物学表达载体。7.根据权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为CHO细胞，所述CHO细胞的保藏信息为：保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期：2022年9月6日，保藏编号：CCTCC No：C2022264，分...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洋，张娅，褚建达，施嘉敏，褚冰儿，赵鑫萍，徐飞，
申请(专利权)人：浙江正熙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：