一种抗NKG2A单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，提供了一种抗NKG2A单克隆抗体，HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示；HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示；HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示；LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示；LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No:5所示；LCDR3的氨基酸序列如SEQ IDNo:6所示。本发明专利技术通过作用于免疫细胞上的NKG2A抑制性受体，解除NKG2A信号通路对免疫细胞的抑制作用，增强NK细胞、T细胞等的活性，激活NK细胞等对肿瘤的杀伤，该抗体是促进抗肿瘤免疫的新型检查点抑制剂，用于制备治疗癌症或免疫疾病药物。治疗癌症或免疫疾病药物。治疗癌症或免疫疾病药物。

【技术实现步骤摘要】
一种抗NKG2A单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种抗NKG2A单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]随着生物医药技术的不断应用和发展，免疫疗法在癌症治疗领域取得了重大突破，例如抗PD
‑
1/PD
‑
L1抗体的研发和CAR
‑
T技术在内的免疫疗法，这种免疫疗法的重点是利用患者体内的适应性免疫系统，最主要的是利用CD8+T对肿瘤细胞造成杀伤。但是，通过大量的研究发现，抗PD
‑
1/PD
‑
L1抗体只对20
‑
30％的癌症病人有效，而CAR
‑
T技术对实体瘤的疗效还不够理想，同时，越来越多的研究数据表明，很多癌症都能发展出多种策略来逃避CD8+T细胞的识别，因而需要开发针对癌症的新免疫治疗手段。
[0003]近年来，NK细胞为抗癌治疗带来了新希望，NK细胞是与T、B淋巴细胞不同的大颗粒淋巴细胞，具有识别并杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞，同时能够产生免疫调节性细胞因子两大主要功能，是人体抗感染和防止癌症发展的重要免疫调节细胞。NK细胞表面多种受体蛋白参与NK细胞活性状态的调控，这些受体蛋白大致分为两类：杀伤细胞活化受体(KAR)和杀伤细胞抑制受体(KIR)。正常生理情况下，杀伤细胞活化受体与自身细胞上多糖类抗原结合产生活化信号；而杀伤细胞抑制受体与MHC
‑
I类分子结合，生成占主导地位的抑制信号，以保证自身组织细胞不被杀伤。当MHC
‑
I类分子发生突变或减少缺失时，其与杀伤细胞抑制受体的结合受到影响，从而不能生成抑制性信号，此时，NK细胞被活化而产生杀伤效应；NK细胞也可以通过肿瘤细胞过表达表面抗原与杀伤细胞活化受体结合而激活(此时活化信号超过抑制信号)；此外，NK细胞还可以通过ADCC作用识别并杀伤被抗体依附的肿瘤细胞。
[0004]NKG2A是C型凝集素超家族的成员，它与CD94以异源二聚体的形式组成抑制性受体，表达于约一半的外周血NK细胞、部分CD8+αβT细胞、NKT细胞及γδT细胞上。非经典HLA
‑Ⅰ
类分子(人类的HLA
‑
E或者小鼠的Qa
‑
1分子)是NKG2A
‑
CD94的主要配体，其常常在肿瘤细胞上异常高表达。NKG2A
‑
CD94受体与其配体的结合，能抑制NK细胞和T细胞的抑瘤作用，NKG2A的胞内部分含有酪氨酸抑制基序(ITIM)，NKG2A
‑
CD94受体与配体结合后，磷酸化的ITIM能聚集酪氨酸磷酸酶(SHP
‑
1)，而SHP
‑
1能向NK细胞和T细胞传递抑制性信号。肿瘤浸润的NK细胞和T细胞上NKG2A的高表达和肿瘤细胞上HLA
‑
E的高表达，都与较差的癌症预后正相关，因此，NKG2A/HLA
‑
E成了新的肿瘤治疗的免疫检查点而备受关注，目前，针对NKG2A这个靶标，仍没有药品上市，为此，为了能够满足癌症患者的用药需求，急需研发一种亲和力更高、药效更强的抗NKG2A单克隆抗体及其应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术通过对免疫文库的筛选，得到了一种能够与NKG2A选择性特异结合，而不与其他NKG2家族蛋白结合的抗NKG2A单克隆抗体。
[0006]本专利技术具体技术方案如下：
[0007]本专利技术提供了一种抗NKG2A单克隆抗体，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链
可变区包括3个分别用HCDR1、HCDR2和HCDR3表示的重链互补决定区，所述轻链可变区包括3个分别用LCDR1、LCDR2和LCDR3表示的轻链互补决定区，所述重链互补决定区HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示；所述重链互补决定区HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示；所述重链互补决定区HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示；所述轻链互补决定区LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示；所述轻链互补决定区LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No:5所示；所述轻链互补决定区LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No:6所示。
[0008]进一步的，所述单克隆抗体为鼠源抗体分子，所述鼠源抗体分子的所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:7所示，所述鼠源抗体分子的所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:8所示。
[0009]进一步的，所述鼠源抗体分子还包括选自鼠的IgG1型、IgG2a型、IgG2b型或IgG3型的重链恒定区和鼠C
k
型的轻链恒定区；其中，所述IgG1型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:10所示，所述IgG2a型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:11所示，所述IgG2b型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:12所示，所述IgG3型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:13所示；所述鼠C
k
型的轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:9所示。
[0010]进一步的，所述单克隆抗体或其抗原结合片段为嵌合抗体分子，所述嵌合抗体分子包括所述鼠源抗体分子的重链可变区、所述鼠源抗体分子的轻链可变区和人源抗体恒定区。
[0011]进一步的，所述单克隆抗体为人源化抗体分子，所述人源化抗体分子选自以下任意一种：
[0012]HA
‑
1：所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:14所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:15所示；
[0013]HA
‑
2：所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:16所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:17所示。
[0014]进一步的，所述人源化抗体分子还包括人源抗体恒定区。
[0015]进一步的，所述人源抗体恒定区包括选自人的IgG1型或IgG4型的重链恒定区和人C
k
型的轻链恒定区，所述IgG1型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ IDNo:18所示，所述IgG4型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:19所示，所述人C
k
型的轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:20所示。
[0016]本专利技术还提供了一种多核苷酸分子，所述多核苷酸分子编码所述的抗NKG2A单克隆抗体。
[0017]本专利技术进一步提供了一种重组DNA表达载体，所述重组DNA表达载体包含上述所述的多核苷酸分子。
[0018]本专利技术还提供了一种转染所述的重组DNA表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；
[0019]优选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为HEK293细胞、CHO细胞或NS0细胞。
[0020]本专利技术还提供了一种药物，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗NKG2A单克隆抗体，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括3个分别用HCDR1、HCDR2和HCDR3表示的重链互补决定区，所述轻链可变区包括3个分别用LCDR1、LCDR2和LCDR3表示的轻链互补决定区，所述重链互补决定区HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示；所述重链互补决定区HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示；所述重链互补决定区HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示；所述轻链互补决定区LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示；所述轻链互补决定区LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No:5所示；所述轻链互补决定区LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No:6所示。2.如权利要求1所述的抗NKG2A单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为鼠源抗体分子，所述鼠源抗体分子的所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:7所示，所述鼠源抗体分子的所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:8所示。3.如权利要求2所述的抗NKG2A单克隆抗体，其特征在于，所述鼠源抗体分子还包括选自鼠的IgG1型、IgG2a型、IgG2b型或IgG3型的重链恒定区和鼠C
k
型的轻链恒定区；其中，所述IgG1型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:10所示，所述IgG2a型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:11所示，所述IgG2b型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:12所示，所述IgG3型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:13所示；所述鼠C
k
型的轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:9所示。4.如权利要求2所述的抗NKG2A单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段为嵌合抗体分子，所述嵌合抗体分子包括所述鼠源抗体分子的重链可变区、所述鼠源抗体分子的轻链可变区和人源抗体恒定区。5.如权利要求2所述的抗NKG2A单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为人源化抗体分子，所述人源化抗体分子选自以下任意一种：HA
‑
1：所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:14所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:15所示；HA
‑
2：所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:16所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:17所示。6.如权利要求5所述的抗NKG2A单克隆抗体，其特征在于，所述人源化抗体分子还包括人源抗体恒定区。7.如权利要求4或6所述的抗NKG2A单克隆抗体，其特征在于，所述人源抗体恒定区包括选自人的IgG1型或IgG4型的重链恒定区和人C
k
型的轻链恒定区，所述IgG1型的重链恒定区氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：白义，
申请(专利权)人：北京精益泰翔技术发展有限公司，
类型：发明
国别省市：