一种基于CDs@ZIF-8的无酶荧光免疫分析方法技术

本发明专利技术公开了一种基于CDs@ZIF

【技术实现步骤摘要】
一种基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法


[0001]本专利技术属于酶联免疫分析
，具体涉及基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法。

技术介绍

[0002]碳基纳米材料因其低成本、环保的合成方式而备受研究人员的关注。其中，碳点(CDs)表现出优异的过氧化物酶样活性，因其成本相对较低、制备工艺简单温和、生物相容性好、光学性能优异、毒性较低而受到广泛关注。此类材料已广泛应用于离子检测、生物成像、传感、防伪、催化、超级电容器等领域。
[0003]沸石咪唑酯骨架结构材料(ZIFs)是一类金属有机骨架材料，ZIF
‑
8是ZIFs材料中最具有代表性的一种，具有较高的比表面积和较好的热稳定性和化学稳定性。因而现有技术提出用ZIF
‑
8负载催化剂。
[0004]邻苯二甲酸酯是一种化合物，用于不同材料的添加剂，使其更灵活。许多种类的邻苯二甲酸酯已经被开发出来，人类接触这些化学物质的风险很高。邻苯二甲酸二丁酯(DBP)是一种邻苯二甲酸酯，广泛用作儿童玩具、医疗器械、营养补充剂和各种包装的增塑剂。已有研究表明，DBP具有发育和生殖毒性，如减少雌激素与特定受体的结合和抑制雌激素的转录活性。目前，DBP的检测方法中，以气相色谱和液相色谱等仪器方法为主。这些方法在灵敏度、选择性和重现性方面具有不可否认的优势，但需要长时间的样品制备，以及训练有素的专家使用特殊的昂贵设备工作。然而，日常的污染监测需要有足够的灵敏度和可靠性的快速和有效的分析方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题就在于：针对现有技术存在的技术问题，本专利技术提供一种基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法，构建了一种新型免疫分析方法，提高了DBP的检测限。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：
[0007]一种基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法，包括以下步骤：
[0008]步骤S1，制备复合材料CDs@ZIF
‑
8；
[0009]步骤S2，将CDs@ZIF
‑
8溶于PBS缓冲溶液中，搅拌加入Ab2，得到CDs@ZIF
‑
8@Ab
2；
[0010]步骤S3，取单克隆一抗溶液移至孔板中孵育；
[0011]步骤S4，每孔用PBS洗涤后，在孔中加入牛血清白蛋白以阻断孔表面的非特异性结合位点；孵育后，用PBS去除游离的牛血清白蛋白；
[0012]步骤S5，将含有不同DBP浓度的溶液移至孔中孵育；
[0013]步骤S6，PBS去除游离DBP后，加入CDs@ZIF
‑
8@Ab2孵育；
[0014]步骤S7，冲洗后加入醋酸缓冲溶液水解释放MOF内部的CDs。
[0015]作为上述技术方案的进一步改进为：
[0016]优选地，所述步骤S1中，复合材料CDs@ZIF
‑
8的制备方法，具体包括以下步骤：
[0017]S1
‑
1，碳量子点和六水合硝酸锌溶于甲醇形成溶液a，2
‑
甲基咪唑溶于甲醇形成溶液b；
[0018]S1
‑
2，在搅拌情况下将溶液a加入溶液b；
[0019]S1
‑
3，溶液进行离心处理，除去上清液，将沉淀清洗后取固相真空干燥，得到复合材料CDs@ZIF
‑
8。
[0020]优选地，所述步骤S1
‑
1中，碳量子点的浓度为1mg/mL ，体积为1 mL；六水合硝酸锌的质量为3~5g；甲醇的体积为150 mL；2
‑
甲基咪唑的质量为4.8g。
[0021]优选地，所述步骤S1
‑
3中，采用甲醇对沉淀进行离心清洗；清洗后取固相真空干燥，干燥的温度为70～75 ℃，时间为24～26 h，得到复合材料CDs@ZIF
‑
8。
[0022]优选地，所述步骤S1中还包括对复合材料CDs@ZIF
‑
8稳定性的查验，取CDs@ZIF
‑
8溶于不同pH的溶液中，反应后记录荧光变化。
[0023]优选地，所述步骤S2中， CDs@ZIF
‑
8浓度为1～3mg/mL，体积为1～3 mL，Ab2的浓度为2～4μg/mL，体积为4～6μL。
[0024]优选地，所述步骤S4中，牛血清白蛋白的浓度为1%。
[0025]优选地，所述步骤S5中， DBP的浓度为1~50 ng/mL。
[0026]优选地，所述步骤S7中，醋酸缓冲溶液的pH为5。
[0027]本专利技术提供的基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法，与现有技术相比有以下优点：
[0028]本专利技术的基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法，可以简单有效地将CDs封装到ZIF
‑
8中，制备CDs@ZIF
‑
8纳米复合材料，而无需繁琐的合成和纯化过程。此外，ZIF
‑
8良好的生物相容性和带正电荷的ZIF
‑
8使其能够通过静电粘附锚定抗体，从而使检测抗体(Ab2)容易偶联到ZIF
‑
8载体表面，而不需要额外的功能化。同时，由于ZIF
‑
8具有较高的比表面积和高负载能力，可以负载大量的CDs，实现对信号的放大，提高了分析方法的灵敏度。本专利技术的分析方法具有较宽的动态范围和较高的灵敏度，检测限为2.78 ng/mL，比传统ELISA低3.39倍。本专利技术这种经济高效且稳定的荧光免疫分析方法为多种其他环境污染物的灵敏检测提供了通用性。
附图说明
[0029]图1是本专利技术实施例1中复合材料CDs@ZIF
‑
8的TEM图。
[0030]图2是本专利技术实施例1中复合材料CDs@ZIF
‑
8的SEM图。
[0031]图3是本专利技术实施例1中CDs@ZIF
‑
8在不同pH下的荧光强度图。
[0032]图4是本专利技术实施例1中CDs@ZIF
‑
8和CDs@ZIF
‑
8@Ab2复合材料的Zeta电位图。
[0033]图5是本专利技术实施例1无酶免疫分析方法的标准曲线。
具体实施方式
[0034]以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。
[0035]本专利技术提供了一种基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法，包括以下步骤：
[0036]步骤S1，复合材料CDs@ZIF
‑
8的制备方法，S1
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1，制备复合材料CDs@ZIF
‑
8；步骤S2，将CDs@ZIF
‑
8溶于PBS缓冲溶液中，搅拌加入Ab2，得到CDs@ZIF
‑
8@Ab2；步骤S3，取单克隆一抗溶液移至孔板中孵育；步骤S4，每孔用PBS洗涤后，在孔中加入牛血清白蛋白以阻断孔表面的非特异性结合位点；孵育后，用PBS去除游离的牛血清白蛋白；步骤S5，将含有不同DBP浓度的溶液移至孔中孵育；步骤S6，PBS去除游离DBP后，加入CDs@ZIF
‑
8@Ab2孵育；步骤S7，冲洗后加入醋酸缓冲溶液水解释放MOF内部的CDs。2.根据权利要求1所述的一种基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法，其特征在于，所述步骤S1中，复合材料CDs@ZIF
‑
8的制备方法，具体包括以下步骤：S1
‑
1，碳量子点和六水合硝酸锌溶于甲醇形成溶液a，2
‑
甲基咪唑溶于甲醇形成溶液b；S1
‑
2，在搅拌情况下将溶液a加入溶液b；S1
‑
3，溶液进行离心处理，除去上清液，将沉淀清洗后取固相真空干燥，得到复合材料CDs@ZIF
‑
8。3.根据权利要求2所述的一种基于CDs@ZIF
‑
8的无酶荧光免疫分析方法，其特征在于，所述步骤S1
‑
1中，碳量子点的浓度为1mg/mL ，体积为1 mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋旭，姚南南，孟云翔，陈新瑶，
申请(专利权)人：江苏先丰纳米材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：