间充质干细胞细胞碎片在免疫调节中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种间充质干细胞细胞碎片在免疫调节中的应用，涉及干细胞的技术领域。将间充质干细胞细胞碎片应用于免疫调节，免疫调节作用包括抑制Th1细胞和Th17细胞，抑制免疫细胞分泌TNF

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞细胞碎片在免疫调节中的应用


[0001]本专利技术涉及干细胞
，尤其是涉及一种间充质干细胞细胞碎片在免疫调节中的应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的成体细胞，其来源丰富，如骨髓、脂肪、牙髓、胎盘、脐带等均能分离得到。目前大量的研究表明间充质干细胞具有免疫调节作用，临床研究已将其用于治疗移植排斥反应、自身免疫性疾病，其主要机制是间充质干细胞被募集到受损组织，通过旁分泌作用分泌细胞因子，改善微环境，促进受损器官组织结构功能的修复。
[0003]目前大量的研究报道间充质干细胞发挥免疫调节作用主要表现其可以通过对DC细胞、NK细胞、B细胞、T细胞、调节性T细胞等免疫细胞的影响来发挥免疫调节作用，其中炎症因子IFN
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γ、TNF
‑
α等因子在间充质干细胞发挥免疫调节的过程中起着重要作用。目前针对间充质干细胞对免疫细胞的体外免疫抑制效应包括抑制T细胞的增殖以及抑制NK细胞分泌TNF
‑
α等，针对发挥免疫抑制效应的机制目前有研究报道人脐带间充质干细胞是通过可溶性因子前列环素E2(PGE2)来实现的。
[0004]在研究间充质干细胞免疫调节作用的机制过程中研究者还发现其分泌的细胞因子、外泌体具有类似功能。与单纯应用间充质干细胞相比，具有稳定性好、方便保存、无免疫原性的特点，更好弥补移植应用的不足。在提取外泌体或细胞因子过程中，首先会低速去除间充质干细胞培养上清中的细胞碎片，作为一种废弃物，目前暂无其功能研究的报道，这些弃掉的细胞碎片是否也具有与完整间充质干细胞相似的免疫调节作用以及作用机制更是无人知晓。因此，如何利用这些弃掉的细胞碎片，以实现对间充质干细胞资源的充分利用，是目前有待解决的问题。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供一种间充质干细胞细胞碎片在非诊断和治疗目的的免疫调节或制备免疫调节制剂中的应用，以缓解现有技术存在的对间充质干细胞细胞碎片资源缺乏有效利用手段的问题。
[0007]本专利技术的第二目的在于提供一种免疫调节制剂。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0009]本专利技术提供了一种间充质干细胞细胞碎片在非诊断和治疗目的的免疫调节或制备免疫调节制剂中的应用。
[0010]优选地，所述间充质干细胞包括脐带间充质干细胞。
[0011]优选地，所述脐带间充质干细胞为P3～P8代脐带间充质干细胞。
[0012]优选地，所述免疫调节包括调节DC细胞、NK细胞、B细胞和T细胞中的至少一种；
[0013]优选地，所述免疫调节包括调节调节性T细胞；
[0014]优选地，所述免疫调节包括抑制Th1细胞和Th17细胞；
[0015]优选地，所述免疫调节包括抑制免疫细胞分泌TNF
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α。
[0016]优选地，所述间充质干细胞细胞碎片的制备方法包括：收集间充质干细胞培养上清，4000～8000g后弃上清，得到所述间充质干细胞细胞碎片。
[0017]优选地，所述间充质干细胞细胞碎片的制备方法包括：将间充质干细胞反复冻融，4000～8000g离心后弃上清，得到所述间充质干细胞细胞碎片；
[0018]优选地，先将间充质干细胞重悬为1～5
×
106cells/ml的细胞悬液，再反复冻融；
[0019]优选地，所述反复冻融包括经液氮速冻和30～40℃水浴复融，重复2～4次；
[0020]优选地，所述反复冻融包括经液氮速冻和37℃水浴复融，重复3次；
[0021]优选地，4000～8000g离心5～10min后弃上清，得到所述间充质干细胞细胞碎片。
[0022]优选地，所述间充质干细胞细胞碎片的制备方法包括：将间充质干细胞超声破碎，4000～8000g离心后弃上清，得到所述间充质干细胞细胞碎片；
[0023]优选地，先将间充质干细胞重悬为1～5
×
106cells/ml的细胞悬液，再超声破碎；
[0024]优选地，所述超声破碎的条件为超声清洗机30～50KHz频率超声破碎5～10min；
[0025]优选地，4000～8000g离心5～10min后弃上清，得到所述间充质干细胞细胞碎片。
[0026]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种免疫调节制剂，该免疫调节制剂包含间充质干细胞细胞碎片，所述间充质干细胞细胞碎片采用上述制备方法制备得到。
[0027]优选地，所述间充质干细胞包括脐带间充质干细胞。
[0028]优选地，所述脐带间充质干细胞为P3～P8代间充质干细胞。
[0029]优选地，所述免疫调节制剂包括间充质干细胞细胞碎片的悬浮液。
[0030]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0031]本专利技术通过实验发现，将间充质干细胞细胞碎片作用于人外周血淋巴细胞中，能够体外抑制Th1细胞和Th17细胞，以及抑制人外周血淋巴细胞分泌TNF
‑
α。并且，间充质干细胞细胞碎片中的PEG2和HGF的含量远低于间充质干细胞培养上清和细胞内容物中的PEG2和HGF的含量；同时，将间充质干细胞细胞碎片作用于人外周血淋巴细胞后，共培养后上清中PEG2和HGF的含量也远低于间充质干细胞与人外周血淋巴细胞共培养后培养基上清中PEG2和HGF的含量。因此，本专利技术发现，间充质干细胞细胞碎片以不同于间充质干细胞以及间充质干细胞培养上清的作用机制对免疫细胞进行调节。
[0032]基于上述发现，本专利技术提供了一种间充质干细胞细胞碎片在非诊断和治疗目的的免疫调节或制备免疫调节制剂中的应用。实验证实，间充质干细胞细胞碎片对人外周血淋巴细胞中Th1和Th17的抑制作用优于完整的间充质干细胞细胞；并且，间充质干细胞细胞碎片对人外周血淋巴细胞分泌TNF
‑
α的抑制作用也优于完整的间充质干细胞。本专利技术提供的间充质干细胞细胞碎片在非诊断和治疗目的的免疫调节或制备免疫调节制剂中的应用为后续免疫方面的疾病的治疗提供了新的治疗手段与技术支持，并且也实现了充分利用间充质干细胞资源。
附图说明
[0033]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体
实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0034]图1为实施例1提供的细胞碎片悬液光镜照片，图中箭头所示即为细胞碎片；
[0035]图2和图3为hUCMSC碎片悬液
‑
1、hUCMSC碎片悬液
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2、hUCMSC内溶物悬液、去除细胞碎片的hUCMSC培养基上清中PEG2和HGF的含量差异情况；
[0036]图4和图5为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.间充质干细胞细胞碎片在非诊断和治疗目的的免疫调节或制备免疫调节制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞包括脐带间充质干细胞；优选地，所述脐带间充质干细胞为P3～P8代脐带间充质干细胞。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述免疫调节包括调节DC细胞、NK细胞、B细胞和T细胞中的至少一种；优选地，所述免疫调节包括调节调节性T细胞；优选地，所述免疫调节包括抑制Th1细胞和Th17细胞。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述免疫调节包括抑制免疫细胞分泌TNF
‑
α。5.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞细胞碎片的制备方法包括：收集间充质干细胞培养上清，4000～8000g后弃上清，得到所述间充质干细胞细胞碎片。6.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞细胞碎片的制备方法包括：将间充质干细胞反复冻融，4000～8000g离心后弃上清，得到所述间充质干细胞细胞碎片；优选地，先将间充质干细胞重悬为1～5
×
106cells/ml的细胞悬液，再反复冻融；优选地，所述反复冻融包括经液氮速...

【专利技术属性】
技术研发人员：巫飞飞，徐莎莎，潘若浪，潘欣，戴玲华，
申请(专利权)人：杭州易文赛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：