一种茅栗体细胞胚再生体系的建立方法技术

本发明专利技术涉及植物组织培养领域，具体而言，涉及一种茅栗体细胞胚再生体系的建立方法。所述的茅栗体细胞胚再生体系的建立方法，包括以下步骤：将茅栗的幼胚胚尖接种至诱导培养基中进行第一培养，得到胚性愈伤组织；将所述胚性愈伤组织转移至发育培养基中进行第二培养，得到成熟的子叶胚；将所述成熟的子叶胚转移至萌发培养基中进行第三培养；所述诱导培养基中，2,4

【技术实现步骤摘要】
一种茅栗体细胞胚再生体系的建立方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养领域，具体而言，涉及一种茅栗体细胞胚再生体系的建立方法。

技术介绍

[0002]茅栗(Castanea seguinii Dode)是起源于我国的重要壳斗科栗属植物，树冠矮小，常用作板栗的砧木。5
‑
7月开花，9
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11月结果，分布于中国大别山以南、五岭南坡以北各地。茅栗的果实中富含淀粉、糖类、蛋白质、脂肪、多种维生素和矿物质，风味隽美，香甜可口，具有较丰富的营养价值。其次，茅栗的根具有重要的药用价值，具有安神，消食健胃，清热解毒的功效，可以用于失眠，消化不良，肺结核，肺炎，丹毒，疮毒等症状。
[0003]植物体细胞胚发生是指从体细胞组织获得胚胎的体外培养方法，是一种可以用于各种植物相关学科的生物技术工具。目前，植物组织培养再生植株的主要方式之一就是通过体细胞胚发生途径。这一途径对植物细胞的分化、发育、全能性表达、品种改良、突变体筛选等方面的研究提供了良好的实验体系，在理论和实际应用中都具有重大的意义。目前茅栗的再生体系尚未建立。
[0004]茅栗作为板栗的近缘种再生能力强，同时茅栗的童期短，当年开花当年结果。因此建立茅栗的再生体系，可以弥补板栗在种质改良中遇到的瓶颈，加快板栗育种进程。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个方面，涉及一种茅栗体细胞胚再生体系的建立方法，包括以下步骤：
[0007]将茅栗的幼胚胚尖接种至诱导培养基中进行第一培养，得到胚性愈伤组织；将所述胚性愈伤组织转移至发育培养基中进行第二培养，得到成熟的子叶胚；将所述成熟的子叶胚转移至萌发培养基中进行第三培养；
[0008]所述诱导培养基中，2,4
‑
D的浓度为0.9～3.6μM，6
‑
BA的浓度为0.55～2.2μM。
[0009]板栗的再生体系中萌发率低，约为2％，或者不萌发，且在育种过程中存在童期长等问题。而茅栗作为板栗的近缘种再生能力强，同时茅栗的童期短，当年开花当年结果。因此建立茅栗的再生体系，可以弥补板栗在种质改良中遇到的瓶颈，加快板栗育种进程。
[0010]本专利技术以茅栗未成熟子叶胚的胚尖为试验材料，进行体细胞胚的诱导、发育、成熟与萌发，从而建立茅栗的体细胞胚再生体系，为品种改良和种质创新提供重要的平台。所述茅栗体细胞胚再生体系的建立方法，成功获得了茅栗体细胞胚再生体系，茅栗子叶胚萌发率在9％左右。
[0011]优选地，所述诱导培养基包括以下组分：木本植物培养基2.0～2.5g
·
L
‑1(例如2.0g
·
L
‑1、2.1g
·
L
‑1、2.2g
·
L
‑1、2.3g
·
L
‑1、2.4g
·
L
‑1或2.5g
·
L
‑1)、NN维生素1
×
109～2
×
109mg
·
L
‑1、水解酪蛋白0.8～1.2g
·
L
‑1(例如0.8g
·
L
‑1、0.9g
·
L
‑1、1.0g
·
L
‑1、1.1g
·
L
‑1或1.2g
·
L
‑1)、2,4
‑
D 0.9～3.6μM(例如0.9μM、1.1μM、1.3μM、1.5μM、1.7μM、1.9μM、2.1μM、2.3μ
M、2.5μM、2.7μM、2.9μM、3.1μM、3.3μM或3.6μM)、6
‑
BA0.55～2.2μM(例如0.55μM、0.7μM、0.9μM、1.1μM、1.3μM、1.5μM、1.7μM、1.9μM或2.2μM)、蔗糖28～32g
·
L
‑1(例如28g
·
L
‑1、29g
·
L
‑1、30g
·
L
‑1、31g
·
L
‑1或32g
·
L
‑1)和植物凝胶2.8～3.2g
·
L
‑1(例如2.8g
·
L
‑1、2.9g
·
L
‑1、3.0g
·
L
‑1、3.1g
·
L
‑1或3.2g
·
L
‑1)。
[0012]诱导培养基中2,4
‑
D和6
‑
BA的浓度直接影响了，胚性愈伤组织是否会出现褐化，增殖是否正常，对于后期萌发率也产生了影响，因此，诱导培养基中2,4
‑
D和6
‑
BA的浓度成为，能否成功建立茅栗体细胞胚再生体系的关键技术。
[0013]优选地，所述发育培养基包括以下组分：木本植物培养基2.0～2.5g
·
L
‑1、NN维生素1
×
109～2
×
109、水解酪蛋白0.8～1.2g
·
L
‑1、谷氨酰胺0.3～0.7g
·
L
‑1、蔗糖58～62g
·
L
‑1和植物凝胶3.3～3.7g
·
L
‑1。
[0014]优选地，所述萌发培养基包括以下组分：木本植物培养基2.0～2.5g
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L
‑1(例如2.0g
·
L
‑1、2.1g
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L
‑1、2.2g
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L
‑1、2.3g
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L
‑1、2.4g
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L
‑1或2.5g
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L
‑1)、NN维生素1
×
109～2
×
109mg
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L
‑1、吗啡乙磺酸0.2～0.8g
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L
‑1(例如0.2g
·
L
‑1、0.4g
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L
‑1、0.6g
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L
‑1或0.8g
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L
‑1)、聚乙烯吡咯烷酮0.2～0.8g
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L
‑1(例如0.2g
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L
‑1、0.4g
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L
‑1、0.6g
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L
‑1或0.8g
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L
‑1)、蔗糖28～32g
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L
‑1(例如28g
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L
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种茅栗体细胞胚再生体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：将茅栗的幼胚胚尖接种至诱导培养基中进行第一培养，得到胚性愈伤组织；将所述胚性愈伤组织转移至发育培养基中进行第二培养，得到成熟的子叶胚；将所述成熟的子叶胚转移至萌发培养基中进行第三培养；所述诱导培养基中，2,4
‑
D的浓度为0.9～3.6μM，6
‑
BA的浓度为0.55～2.2μM。2.根据权利要求1所述的茅栗体细胞胚再生体系的建立方法，其特征在于，所述诱导培养基包括以下组分：木本植物培养基2.0～2.5g
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L
‑1、NN维生素1
×
109～2
×
109mg
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L
‑1、水解酪蛋白0.8～1.2g
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L
‑1、2,4
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D 0.9～3.6μM、6
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BA 0.55～2.2μM、蔗糖28～32g
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L
‑1和植物凝胶2.8～3.2g
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‑1。3.根据权利要求1所述的茅栗体细胞胚再生体系的建立方法，其特征在于，所述发育培养基包括以下组分：木本植物培养基2.0～2.5g
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L
‑1、NN维生素1
×
109～2
×
109、水解酪蛋白0.8～1.2g
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L
‑1、谷氨酰胺0.3～0.7g
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L
‑1、蔗糖58～62g
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L
‑1和植物凝胶3.3～3.7g
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‑1。4.根据权利要求1所述的茅栗体细胞胚再生体系的建立方法，其特征在于，所述萌发培养基包括以下组分：木本植物...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹庆芹，孙芝林，刘冰，张卿，房克凤，秦岭，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：