滑膜来源间充质干细胞的制造方法及关节治疗用细胞制剂的制造方法技术

本发明专利技术的课题在于提供一种提高增殖效率以能够由滑膜组织获得充分量的滑膜来源间充质干细胞的滑膜来源间充质干细胞的制造方法、利用上述滑膜来源间充质干细胞的制造方法的关节治疗用细胞制剂的制造方法、滑膜来源间充质干细胞及关节治疗用细胞制剂。根据本发明专利技术，可提供一种由滑膜组织制造滑膜来源间充质干细胞的方法，上述方法包括：不经过滑膜组织的消毒工序而用含有1种以上胶原蛋白酶及1种以上中性蛋白酶的混合酶将滑膜组织处理2小时以上。上。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】滑膜来源间充质干细胞的制造方法及关节治疗用细胞制剂的制造方法


[0001]本专利技术涉及一种制造滑膜来源间充质干细胞的方法，该方法包括不经过滑膜组织的消毒工序而用酶对滑膜组织处理规定时间。本专利技术还涉及一种利用上述方法的关节治疗用细胞制剂的制造方法。

技术介绍

[0002]在整形外科领域中，关节软骨损伤或半月板损伤作为日常诊疗行为的对象频繁可见，被广泛认为是多数患者所具有的疾病。当发生关节软骨损伤或半月板损伤的情况下，会引起关节痛、运动范围的减少、关节水肿及运动障碍等。患有外伤引起的关节软骨损伤或半月板损伤的患者通常接受整形外科医生的治疗。对软骨损伤或半月板损伤的外科治疗目的在于去除成为关节进一步恶化的要因的破片以使患部关节的功能恢复。然而，众所周知，软骨及半月板组织很难自我再生。
[0003]另一方面，近年来随着再生医疗技术的进歩，能够修复软骨或半月板的细胞治疗兴盛起来。其中，间充质干细胞(mesenchymal stem cell：MSC)可期待成为有用的细胞治疗的细胞源。间充质干细胞能够从各种体组织采集，报告有能够从骨髄组织(非专利文献1)、脂肪组织(非专利文献2)、肌肉组织(非专利文献3)、滑膜组织(非专利文献4)、骨膜组织(非专利文献5)等分离。尤其，报告有与源自骨髄等各间叶组织的间充质干细胞相比，滑膜来源间充质干细胞具有高的增殖能力及软骨形成能力(非专利文献6)。并且，在日本专利第5928961号公报及日本专利第5656183号公报中公开有使用滑膜来源间充质干细胞治疗关节软骨损伤或半月板损伤的方法。
[0004]现有技术文献
[0005]非专利文献
[0006]非专利文献1：Prockop,D.J.,1997,Science.276:71
‑4[0007]非专利文献2：Zuk,P.A.et al.,2002,Mol Biol Cell.13:4279
‑
95
[0008]非专利文献3：Cao et al.,2003,Nat Cell Biol.5:640
‑6[0009]非专利文献4：De Bari,C.et al.,2001,Arthritis Rheum.44:1928
‑
42
[0010]非专利文献5：Fukumoto,T.et al.,2003,OsteoarthritisCartilage.11:55
‑
64
[0011]非专利文献6：Sakaguchi,et al,2005,Arthritis Rhum.52:2521
‑9[0012]专利文献
[0013]专利文献1：日本特许专利第5928961号公报
[0014]专利文献2：日本特许专利第5656183号公报

技术实现思路

[0015]专利技术要解决的技术课题
[0016]专利文献1及2中，公开有使用滑膜来源间充质干细胞的治疗。另一方面，在实际上
制造细胞的过程中，明显存在以上述中所公开的制造法有时无法实现供于自我治疗的充分的细胞产量的课题。
[0017]本专利技术的课题在于提供一种提高增殖效率以能够由滑膜组织获得充分量的滑膜来源间充质干细胞的滑膜来源间充质干细胞的制造方法。本专利技术的课题还在于提供一种利用上述滑膜来源间充质干细胞的制造方法的关节治疗用细胞制剂的制造方法。本专利技术的课题还在于提供一种滑膜来源间充质干细胞及关节治疗用细胞制剂。
[0018]用于解决技术课题的手段
[0019]本专利技术人为了解决上述课题而进行深入研究的结果，借由不经过消毒工序而赋予对滑膜组织进行一定时间以上酶处理的工序，能够制造可供于治疗的细胞量，并且成功地提高了增殖倍率。从杀菌、灭菌的观点考虑，滑膜组织经过消毒工序之后使用为常识。不经过消毒工序而实施长时间的酶处理，会产生导致源自制造工序的杂质(细菌、内毒素等)增加等不良影响，估计其结果制造出来的细胞会减少，因此会考虑尽量避免。实际上，当经过消毒工序之后将酶处理时间从1小时1分钟变更为1.5小时的情况下，细胞产量大量减少。另一方面，发现借由进行通常未想到的、即特意去除消毒工序，出乎预料地可增加细胞产量，增殖倍率也显著提高。本专利技术人借由延长酶处理时间及省略消毒工序这2个途径，首次发现了可获得大幅提高增殖倍率的效果。本专利技术根据上述发现而完成。
[0020]即、根据本专利技术可提供以下专利技术。
[0021]＜1＞一种由滑膜组织制造滑膜来源间充质干细胞的制造方法，所述方法包括：
[0022]不经过滑膜组织的消毒步骤，用含有一种以上胶原蛋白酶和一种以上中性蛋白酶的混合酶将滑膜组织处理2小时以上。
[0023]＜2＞根据＜1＞所述的方法，其中，
[0024]混合酶为Liberase(注册商标)。
[0025]＜3＞根据＜1＞或＜2＞所述的方法，其中，
[0026]酶处理中的酶浓度为0.01mg/ml～10mg/ml。
[0027]＜4＞根据＜1＞至＜3＞中任一项所述的方法，其中，
[0028]滑膜组织源自人。
[0029]＜5＞根据＜1＞至＜4＞中任一项所述的方法，其中，
[0030]滑膜组织为源自单一供体的滑膜组织。
[0031]＜6＞根据＜1＞至＜5＞中任一项所述的方法，其中，
[0032]滑膜采集对象与滑膜来源间充质干细胞的移植对象为同一对象。
[0033]＜7＞根据＜1＞至＜6＞中任一项所述的方法，其中，
[0034]滑膜组织与酶的质量比例为1000:1～10:1。
[0035]＜8＞根据＜1＞至＜7＞中任一项所述的方法，该方法包括：将经酶处理后的滑膜来源间充质干细胞培养10天以上，由此使滑膜来源间充质干细胞增殖。
[0036]＜9＞根据＜8＞所述的方法，其中，
[0037]在不更换培养基的情况下进行上述10天以上的培养。
[0038]＜10＞根据＜8＞或＜9＞所述的方法，其中，
[0039]在含有自体血清的培养基中进行上述10天以上的培养。
[0040]＜11＞根据＜8＞至＜10＞中任一项所述的方法，其中，
[0041]以100细胞/cm2以上且5000细胞/cm2以下的细胞数量播种经酶处理后的滑膜来源间充质干细胞，并且培养10天以上。
[0042]＜12＞根据＜8＞至＜11＞中任一项所述的方法，其中，
[0043]上述10天以上的培养中的增殖倍率为3倍以上且50倍以下。
[0044]＜13＞根据＜1＞至＜12＞中任一项所述的方法，其中，
[0045]不与除了滑膜来源间充质干细胞以外的其他细胞共培养而制造滑膜来源间充质干细胞。
[0046]＜14＞一种关节治疗用细胞制剂的制造方法，该方法包括：
[0047]借由＜1＞至＜13＞中任一项所述的方法制造滑膜来源间充质干细胞；及
[0048]使用所述滑膜来源间充质干细胞来制造关节治疗用细胞制剂。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种由滑膜组织制造滑膜来源间充质干细胞的制造方法，所述方法包括：不经过滑膜组织的消毒步骤，用含有一种以上胶原蛋白酶和一种以上中性蛋白酶的混合酶将滑膜组织处理2小时以上。2.根据权利要求1所述的方法，其中，混合酶为Liberase，Liberase为注册商标。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，酶处理中的酶浓度为0.01mg/ml～10mg/ml。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，滑膜组织源自人。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，滑膜组织为源自单一供体的滑膜组织。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，滑膜采集对象与滑膜来源间充质干细胞的移植对象为同一对象。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，滑膜组织与酶的质量比例为1000:1～10:1。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，所述方法包括：将经酶处理后的滑膜来源间充质干细胞培养10天以上，由此使滑膜来源间充质干细胞增殖。9.根据权利要求8所述的方法，其中，在不更换培养基的情况下进行所述10天以上的培养。10...

【专利技术属性】
技术研发人员：关矢一郎，水野满，片野尚子，大关信武，中村健太郎，吉田智美，
申请(专利权)人：国立大学法人东京医科齿科大学，
类型：发明
国别省市：