一种TaqDNA聚合酶的单克隆抗体F2B2及其应用制造技术

本发明专利技术实施例提供一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F2B2，其重链可变区序列如SEQ ID NO:7所示；其轻链可变区序列如SEQ ID NO:8所示。所述单克隆抗体F2B2的扩增灵敏度高。所述单克隆抗体F2B2的扩增灵敏度高。所述单克隆抗体F2B2的扩增灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F2B2及其应用


[0001]本专利技术涉及一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F2B2及其应用，属于Taq DNA聚合酶


技术介绍

[0002]常规PCR技术因能够快速扩增任何已知的DNA片段而被广泛应用于分子生物学的各个领域。但常规PCR技术容易出现引物二聚体或错配引起的非特异性扩增等现象，造成实验结果的不准确性。热启动PCR能够很好的解决上述问题，是最常用的提高PCR特异性的方法。Taq DNA聚合酶抗体是抗Taq DNA聚合酶(简称Taq酶)的抗体，可在低温时结合于Taq DNA聚合酶，封闭其聚合酶活性，防止错配或引物二聚体引起非特异性扩增；在PCR预变性95℃加热时，抗体蛋白变性，释放DNA聚合酶活性，完成扩增反应，达到热启动的效果。
[0003]但是，现有的Taq酶抗体应用于热启动时，其扩增灵敏度较低，很难扩增出低浓度的样本，限制了其应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F2B2及其应用，可以有效解决上述问题。
[0005]本专利技术是这样实现的：
[0006]一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F2B2，其重链可变区序列如SEQ IDNO:7所示；其轻链可变区序列如SEQ ID NO:8所示。
[0007]作为进一步改进的，所述单克隆抗体F2B2的重链可变区序列的CDR1序列如SEQ ID NO:1所示，CDR2序列如SEQ ID NO:2所示，CDR3序列如SEQ ID NO:3所示。
[0008]作为进一步改进的，所述单克隆抗体F2B2的轻链可变区序列的CDR1序列如SEQ ID NO:4所示，CDR2序列如SEQ ID NO:5所示，CDR3序列如SEQ ID NO:6所示。
[0009]作为进一步改进的，所述单克隆抗体F2B2的重链序列如SEQ ID NO:9所示。
[0010]作为进一步改进的，所述单克隆抗体F2B2的轻链序列如SEQ ID NO:10所示。
[0011]一种降低Taq DNA聚合酶的非特异性扩增的方法，应用上述的单克隆抗体F2B2。
[0012]一种细胞，其能产生上述的单克隆抗体F2B2。
[0013]本专利技术的有益效果是：
[0014]本专利技术的单克隆抗体F2B2，用于聚合酶的热启动，相比野生Taq酶，其扩增灵敏度显著提升，能很好的扩增出低浓度15copies/反应的样本。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根
据这些附图获得其他相关的附图。
[0016]图1是本专利技术实施例2提供的Taq DNA聚合酶单克隆抗体聚合酶活性封闭检测。
[0017]图2是本专利技术实施例3提供的Taq DNA聚合酶抗体外切酶活性封闭检测结果。
[0018]图3是是本专利技术实施例4提供的Taq酶抗体的扩增效果图。
具体实施方式
[0019]为使本专利技术实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施方式中的附图，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本专利技术的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]实施例1
[0021]特异结合Taq DNA聚合酶单克隆抗体制备
[0022]1、免疫动物
[0023]取8
‑
12周龄的BALB/c小鼠，以100μg/只的含野生型Taq酶蛋白重组抗原与等量福氏完全佐剂充分混匀，注入小鼠腹腔内，每隔2周100μg/只的野生型Taq酶蛋白重组抗原与等量福氏不完全佐剂充分混匀，多次注入小鼠腹腔内加强免疫。经检测小鼠血清(间接ELISA法)滴度在1∶5000以上者可用于融合，融合前3天经小鼠腹腔内再次加强免疫，剂量为50μg/只。
[0024]2、饲养细胞的制备
[0025]以BALB/c鼠腹腔巨噬细胞作饲养细胞。在融合前1天，BALB/c鼠拉颈处死，75％酒精全身浸泡，超净台内，无菌操作下用剪刀剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用注射器腹腔注入RPMI 1640基础培养液5mL，反复冲洗，回收冲洗液，1000rpm，离心5分钟，留沉淀，用含HAT的RPMI 1640完全培养液中重悬，调整细胞浓度1
×
105个/mL，加入96孔板，150μL/孔，37℃，5％CO2培养过夜。
[0026]3、免疫脾细胞的制备
[0027]小鼠最后一次免疫三天后，在无菌条件下取出脾脏，置于平皿中，RPMI1640基础培养液冲洗一次，放于小烧杯的尼龙网上磨碎过滤，制成细胞悬液。离心，弃上清，RPMI 1640基础培养液重悬，如此重复三次，计数。
[0028]4、细胞融合
[0029](1)取40mL HAT培养液，15mL DMEM无血清培养液和1mL 50％PEG(M12000)分别置于37℃水浴中预温；
[0030](2)分别取小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0(2
‑5×
107个)、上述免疫脾细胞(108个)悬液加入50mL离心管中混匀，并加DMEM无血清培养液至40mL。离心10分钟，倒尽上清液，混匀；
[0031](3)将离心管置于37℃预温的水中，取0.7mL预温的50％PEG溶液，静置90秒钟。立即滴加37℃15mL预温的无血清培养液；
[0032](4)补加DMEM无血清培养液至40mL，离心10分钟，倒尽上清液。加40mL含15％～20％胎牛血清的HAT培养液。用吸管混匀，滴加到已含有饲养细胞的4块96孔细胞培养板的小孔中，每孔2滴，置37℃、7％CO2的培养箱中培养。
[0033]5、杂交瘤细胞的选择培养
[0034]在细胞融合后第1，3，5，7天用前述的HAT培养液换液培养，选择出真正的杂交细胞。
[0035]6、特异性抗体的检测及杂交瘤细胞克隆化
[0036]吸取每个培养孔的上清液，用间接ELISA法检测出培养液中含特异性识别Taq酶蛋白重组抗原的抗体的培养孔，筛选得到有较好反应性的抗体，命名为抗体F2B2。
[0037]经测序，该抗体的氨基酸序列如下：
[0038]重链CDR1序列：YYVF(SEQ ID NO:1)
[0039]重链CDR2序列：GNPDN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F2B2，其特征在于，其重链可变区序列如SEQ ID NO:7所示；其轻链可变区序列如SEQ ID NO:8所示。2.根据权利要求1所述的Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F2B2，其特征在于，其重链可变区序列的CDR1序列如SEQ ID NO:1所示，CDR2序列如SEQ ID NO:2所示，CDR3序列如SEQ ID NO:3所示。3.根据权利要求1所述的Taq DNA聚合酶的单克隆抗体F2B2，其特征在于，其轻链可变区序列的CDR1序列如SEQ ID NO:4所示，CDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄奋飞，沈杰鹏，范进华，杨萍萍，周志华，章永垒，
申请(专利权)人：厦门康基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：