血清组分和单克隆抗体制备的纳米粒在制备药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及血清组分和单克隆抗体制备的纳米粒在制备药物中的用途。本发明专利技术以XIAP蛋白作为免疫原，通过免疫小鼠制备并获得了XIAP单克隆抗体，所述抗体本身具有较好的抑制癌细胞增殖的效果，并且将所述的抗体与本发明专利技术从血清中制备得到的人血白蛋白一起制备可XIAP的单克隆抗体介导的阿霉素白蛋白纳米粒，所述纳米粒具有较好的抑制肿瘤生长的效果。粒具有较好的抑制肿瘤生长的效果。

【技术实现步骤摘要】
血清组分和单克隆抗体制备的纳米粒在制备药物中的用途


[0001]本申请涉及生物领域，更具体的涉及血清组分和单克隆抗体制备的纳米粒在制备药物中的用途。

技术介绍

[0002]血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。每100ml人血清含有蛋白质6
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8g，其中主要是白蛋白和球蛋白。血清不会凝固。有免疫，维持酸碱平衡和渗透压的作用，血清蛋白质亦可储备供给机体蛋白质不足时的应用。
[0003]临床上也有注射血清用于疾病的治疗。比如首先注射血清的功效，主要是改善大脑血液循环，预防脑血栓形成，及时调节脑代谢产物，疏通和保护血管内膜和内皮细胞，防止内膜损伤，以及内皮细胞衰老的作用。其次血清注射的作用，主要是治疗，或辅助治疗脑血栓形成、脑出血、常见心脑血管疾病和脑梗死，尤其是辅助治疗脑出血，它能及时修复损伤和脑血管，进一步预防疾病，促进脑细胞恢复、脑血管重建，防止脑损伤再次发生。在癌症患者的治疗中，通过也会使用血清或者血清中的人血白蛋白进行治疗，提高癌症患者的治疗效果。在癌症晚期，由于营养不良以及肿瘤引起的全身性慢性炎症抑制血清白蛋白合成，导致患者低白蛋白血症的发生。合并低白蛋白血症的恶性肿瘤患者化疗前补充白蛋白不仅能降低化疗毒副作用，同时减轻化疗后全身炎性反应，使化疗患者明显获益。
[0004]血清中，最主要起到活性作用的是人血白蛋白。白蛋白是指在人体内含量最高(通常占血浆蛋白总含量的50％以上)，且含有585种氨基酸残基的一种单链多肽。它是血浆中存在的最小蛋白质之一，分子量约为66458。同时，白蛋白也是一种通用的大分子载体，有利于帮助溶解度有限的各种内源性化合物(包括脂肪酸和胆红素)，在全身循环中的运输。白蛋白还可与紫杉烷类、磺胺类、青霉素类和苯并二氮杂类等治疗剂结合，来影响药物的生物分布、生物活性和代谢。由于具备上述功能，在临床上白蛋白已被广泛证明是一种安全的生物材料，可用于设计药物输送系统。白蛋白作为药物载体，能够避免难溶性药物被血液清除，从而发挥靶向作用；还可减少抗肿瘤药物所产生的不良反应和毒副作用；同时，还能增加患者的顺从性，具有广阔的应用前景。
[0005]人血白蛋白作为抗肿瘤药物的载体与其他载体相比，具有如下优势：(1)生物相容性好。白蛋白是人体的内源性物质，不会给机体带来毒性反应，也不会引发自身免疫反应，或使机体产生变性、降解等一些不良反应。(2)稳定性好。白蛋白是具有特殊结构和独特性质的蛋白质，在一定的温度和pH范围内，会保持良好的稳定性。因此，对于大多数的外源性物质来说，白蛋白是一种理想的载体，可以提高外源性物质的稳定性。(3)载药性能好。白蛋白具有独特的空间结构，能够以物理包裹或化学键偶联的方式将药物包载。研究发现，白蛋白可以增加疏水性药物在血浆中的溶解度，并且对于易氧化药物具有较好的保护作用。(4)
具有靶向性。药代动力学研究表明，白蛋白不仅可以躲避网状内皮系统的识别与吞噬，被动靶向于肝、肾、骨髓等器官；还可以在白蛋白表面，通过以非共价键结合的方式，修饰各类具有靶向功能的物质(例如，对白蛋白表面具有活性赖氨酸中的氨基进行化学修饰)。因为在血管的内皮细胞和大部分的肿瘤细胞表面都有白蛋白受体，这些受体可以提高白蛋白药物在肿瘤细胞中的富集，进而实现白蛋白在体内主动靶向的目的。(5)体内半衰期时间较长。由于白蛋白在血液中带有负电荷，使其不易被巨噬细胞清除，这个特点为实现药物的长效循环提供了可能。因此，人血白蛋白所具备的这些优点，为其成为一种良好的药物载体奠定了一定的基础。
[0006]X连锁凋亡抑制蛋白(X
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linked inhibitor ofapoptosis protein,XIAP)是新发现的一个IAP家族中的主要成员，是IAP家族中最强的凋亡抑制因子，它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡。XIAP基因在大多数的肿瘤细胞株中过表达，其表达与肿瘤的进展、复发、预后以及肿瘤化疗的耐药密切相关。近年研究发现x染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)能够选择性抑制癌细胞凋亡的上游启动分子caspase
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9和下游效应分子caspase
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3，caspase
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7，使癌细胞抵抗凋亡并对化疗产生耐药。蒽贝素是从紫金牛科植物中提取的多酚类化合物，是一种XIAP的小分子抑制剂，能与XIAP蛋白分子中BIR3结构域结合，阻止XIAP分子与caspase
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9结合而诱导细胞凋亡。
[0007]基于XIAP在调控凋亡中的重要作用以及与肿瘤发生发展的密切关系，靶向XIAP已作为了抗癌治疗的一项策略。靶向XIAP抑制的细胞试验以及定向敲除XIAP的小鼠并没表现出有意义的病理变化，对小鼠以XIAP抑制剂处理其并未表现出毒性反应,从这些可见靶向XIAP成为了一项有吸引力的研究。而XIAP作为IAP家族的重要成员，已作为这方面研究的重点。对XIAP的抑制方法有反义RNA、siRNA和人工合成XIAP的小分子抑制剂。通过反义寡核苷酸和siRNA方法降解XIAP的mRNA，进而消除XIAP的表达，使得许多肿瘤细胞恢复了对化疗的敏感性。但是目前，针对XIAP抑制剂的研究还不够多，可用的XIAP抑制剂的类型也不够多，值得进一步的研究。

技术实现思路

[0008]本专利技术克服现有技术的缺陷，提供了一种特异性的XIAP抑制剂。
[0009]所述的XIAP抑制剂为特异性针对XIAP的单克隆抗体。
[0010]具体的，所述抗体的轻链可变区序列如SEQ ID No：1所示，其重链可变区的序列如SEQ ID NO：2所示。
[0011]进一步的，本专利技术还提供了XIAP的单克隆抗体介导的阿霉素白蛋白纳米粒。
[0012]进一步的，所述的纳米颗粒是通过如下方法制备获得：阿霉素与人血清白蛋白溶解到蒸馏水中,在室温下搅拌；调节pH值至9；乙醇以0.5mL/min的速度滴至已经孵化好的药物与白蛋白混合溶液中继续搅拌,向纳米粒溶液中滴加8％戊二醛溶液室温磁力搅拌,使纳米粒交联固化,制得固化纳米粒的溶液。将纳米粒溶液以15000r/min的转速高速离心倾去上清液加水至原体积,超声分散。洗涤3次,以去除制备中加入的有机溶剂，得到阿霉素白蛋白纳米粒。取阿霉素白蛋白纳米粒,加入NHS
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PEG3500
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Mal溶液(44mg溶于500μL pH8.0的磷酸盐缓冲液中)中,恒温磁力搅拌。18000离心10min弃去上清液后,再用双蒸水重新分散。取单抗缓冲液(适量单抗溶于pH8.0的磷酸盐缓冲液,单抗终浓度为1mg/mL)加入2
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亚氨基硫
烷盐酸缓冲液(6.9mg溶于50mLpH8.0的磷酸盐缓冲液中)中,恒温磁力搅拌。取前述制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性针对XIAP的单克隆抗体XIAP
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11A6，其特征在于所述抗体的轻链可变区和重链可变区序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。2.如权利要求1所述的单克隆抗体XIAP
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11A6在制备治疗胃癌的药物组合物中的用途。3.血清成分、阿霉素和单克隆抗体XIAP
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11A6的组合在制备治疗胃癌的药物中的用途，其中，所述的单克隆抗体XIAP
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11A6如权利要求1所示；血清成分是人血白蛋白；其中所述的人血白蛋白、阿霉素和单克隆抗体XIAP
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11A6是通过XIAP的单克隆抗体XIAP
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11A6介导的阿霉素白蛋白纳米粒，所述的纳米粒是通过如下方法制备：2mg阿霉素与15mg的人血清白蛋白溶解到1mL的蒸馏水中,为了使药物有效吸附到人血清白蛋白上,在室温下搅拌3h；调节pH值至9；4mL乙醇以0.5mL/min的速度滴至已经孵化好的药物与白蛋白混合溶液中继续搅拌,向纳米粒溶液中滴加10μL 8％戊二醛溶液室温磁力搅拌20h,使纳米...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶梦婷，马春旺，冯进校，
申请(专利权)人：山西奈北事生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：