白介素15受体α装甲CAR-T细胞在降低白介素15诱导的细胞毒性中的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种表达白介素15受体α和白介素15的装甲CAR

【技术实现步骤摘要】
白介素15受体
α
装甲CAR
‑
T细胞在降低白介素15诱导的细胞毒性中的用途


[0001]本专利技术涉及医学领域，特别是涉及一种表达白介素15受体α和白介素15的装甲CAR
‑
T细胞及其免疫治疗用途。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体(CAR)
‑
T细胞疗法是一种强大的针对血液癌症的过继性免疫疗法，而白细胞介素(IL)
‑
15是一种重要的免疫刺激剂，具有诱导长期持久性CAR
‑
T细胞的能力(Yang X,et al.Closely related T
‑
memory stem cells correlate with in
‑
vivo expansion of CAR.CD19
‑
T cells in patients and are preserved by IL
‑
7 and IL
‑
15.Blood.(2014),https://doi.org/10.1182/blood
‑
2014
‑
01
‑
552174)。然而，据报道，在CAR
‑
T治疗期间，较高的基线或峰值血清IL
‑
15水平尽管与更好的抗肿瘤反应相关，但也与更高的毒性率相关，所述毒性包括例如细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性和移植物抗宿主病(GVHD)。因此，本领域需要能够降低此类CAR
‑
T细胞的毒性但保持其抗肿瘤效应和在体内的长期持久性的方法。
[0003]专利技术概述
[0004]经过深入的研究，本专利技术人应用CD19特异性CAR
‑
T细胞，构建了同时装载了具有特定氨基酸修饰的优化IL
‑
15受体α(IL
‑
15Ra)和IL
‑
I5的装甲CAR
‑
T细胞(armored CAR
‑
T cell)。如本申请实施例所示，在细胞培养条件下，与CAR
‑
IL
‑
15T细胞相似，装载了优化IL
‑
15Ra的CAR
‑
IL
‑
15T细胞显示出增强的增殖能力和细胞活力，并保持了Tscm表型；同时与CAR
‑
IL
‑
15T细胞相比，装载了该IL
‑
15Ra的CAR
‑
IL
‑
15T细胞降低了IL
‑
15向细胞外环境的释放量。进一步，本专利技术人在小鼠模型中证实，与常规CAR
‑
T细胞和CAR
‑
IL
‑
15T细胞相比，装载了该IL
‑
15Ra的CAR
‑
IL
‑
15T细胞延长了小鼠的存活时间，具有优异的抗肿瘤活性；并同时相比于CAR
‑
IL
‑
15T细胞，在施用后导致降低的血清IL
‑
15水平和相应地的更低毒性。这些结果表明，包含优化IL
‑
15Ra的本专利技术装甲CAR
‑
T细胞在减少CAR
‑
T治疗过程中的不良事件和增强抗肿瘤能力方面发挥了重要作用。基于这些发现，本专利技术人由此建立了本专利技术。
[0005]因此，在第一方面，本专利技术提供了一种核酸组合，所述组合包含第一核酸分子、第二核酸分子和第三核酸分子，其中所述第一核酸分子包含编码嵌合抗原多肽(CAR)的多核苷酸，第二核酸分子包含编码IL
‑
15的多核苷酸，第三核酸分子包含编码优化IL15Ra的多核苷酸，其中所述优化IL15Ra包含在氨基酸位置202和203的双突变S202R和D203E，其中所述氨基酸位置根据SEQ ID NO:6编号。优选地，所述优化IL
‑
15Ra包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；或与之具有至少90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。再优选地，所述编码优化IL15Ra的多核苷酸包含SEQ ID NO:3所述序列的多核苷酸、或与之具有至少90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的多核苷酸。
[0006]在一些实施方案中，所述第一、第二和第三核酸分子中的两者或所有三者以功能性连接方式存在单个核酸构建体，例如病毒载体，如慢病毒载体上。在另一些实施方案中，
所述第一、第二和第三核酸分子分别存在于不同的核酸构建体，例如病毒载体，如慢病毒载体上。
[0007]在一个实施方案中，根据本专利技术的核酸组合为包含第一、第二和第三核酸分子的单个核酸构建体，其中，所述核酸构建体编码从N端到C端具有下式(I)所示结构的融合蛋白：
[0008]CAR
‑
(L1)
‑
E1
‑
(L2)
‑
E2
ꢀꢀꢀ
(I)
[0009]其中，
[0010]CAR表示嵌合抗原受体多肽，
[0011]L1和L2分别独立地表示连接肽(尤其是包含自剪接位点的连接肽)，
[0012]E1和E2互不相同，且彼此独立地选自IL
‑
15和优化IL
‑
15Ra，且
[0013]其中
“‑”
表示式(I)的所述各组分之间功能性连接。
[0014]在一个实施方案中，E1表示由第二核酸分子编码的IL
‑
15，且E2表示由第三核酸分子编码的优化IL
‑
15Ra。在另一个实施方案中，E2表示由第二核酸分子编码的IL
‑
15，且E1表示由第三核酸分子编码的优化IL
‑
15Ra。
[0015]在一些实施方案中，连接肽L1和L2相同；在另一些实施方案中，所述连接肽L1和L2不同。在一些实施方案中，L1和L2包含自剪接位点，例如选自：P2A、T2A、E2A或F2A的自剪接位点。在一个实施方案中，L1包含P2A位点(优选地，包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列)；L2包含T2A位点(优选地，包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列)。
[0016]在一个实施方案中，第一核酸分子包含编码CAR多肽的多核苷酸，其中所述CAR多肽从N端到C端包含：任选地信号肽(例如GM
‑
CSFRα信号肽)，特异性结合肿瘤抗原的胞外抗原结合结构域、任选地铰链区或间隔区、跨膜结构域、和胞质信号传导结构域，其中所述胞质信号传导结构域包含共刺激结构域和初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述特异性结合肿瘤抗原的抗原结合结构域为抗体或抗体片段，尤其是scFv。在一个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸组合，所述组合包含第一核酸分子、第二核酸分子和第三核酸分子，其中：
‑
所述第一核酸分子包含编码嵌合抗原多肽(CAR)的多核苷酸，
‑
所述第二核酸分子包含编码IL
‑
15的多核苷酸，
‑
所述第三核酸分子包含编码优化IL15Ra的多核苷酸，其中所述优化IL15Ra包含在氨基酸位置202和203的双突变S202R和D203E，其中所述氨基酸位置根据SEQ ID NO:6编号。2.根据权利要求1的核酸组合，其中所述优化IL
‑
15Ra包含双突变S202R和D203E，优选包含位置197
‑
204的基序YPQGHSDT，且包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；或与之具有至少90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；优选地，所述编码优化IL15Ra的多核苷酸包含SEQ ID NO:3所述序列的多核苷酸、或与之具有至少90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的多核苷酸。3.根据权利要求1
‑
2的核酸组合，其中，第一核酸分子包含编码CAR多肽的多核苷酸，其中所述CAR多肽从N端到C端包含：任选地信号肽，特异性结合肿瘤抗原的胞外抗原结合结构域，任选地铰链区或间隔区、跨膜结构域、和胞质信号传导结构域，且其中所述胞质信号传导结构域包含CD28的共刺激结构域和4
‑
1BB的共刺激结构域的组合以及CD3ζ初级信号传导结构域。4.根据权利要求1
‑
3的核酸组合，其中，所述CAR多肽包含：从N端到C端，抗肿瘤抗原(如CD19)的抗体或抗原结合片段，如scFv，CD28铰链区，CD28跨膜结构域，CD28共刺激结构域，4
‑
1BB共刺激结构域，和CD3ζ初级信号传导结构域，优选地，所述CAR多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，或与之具有至少90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或以上的同一性的氨基酸序列。5.根据权利要求1
‑
4的核酸组合，其中，第二核酸分子包含编码IL
‑
15的多核苷酸，且优选地，第二核酸分子包含编码SEQ ID NO:5或与之具有至少85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或以上同一性的氨基酸序列的多核苷酸，且更优选地，第二核酸分子包含SEQ ID NO:2的核苷酸序列，或与之具有至少85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或以上的同一性的核苷酸序列。6.根据权利要求1
‑
5的核酸组合，其中所述第一、第二和第三核酸分子中的两者或所有三者以功能性连接的方式存在于单个核酸构建体，例如病毒载体，如慢病毒载体上。7.根据权利要求1
‑
6的核酸组合，其中所述核酸组合为包含第一、第二和第三核酸分子的单个核酸构建体，其中，所述核酸构建体编码从N端到C端具有下式(I)所示结构的融合蛋白：CAR
‑
(L1)
‑
E1
‑
(L2)
‑
E2
ꢀꢀ
(I)其中，CAR表示嵌合抗原受体多肽，L1和L2分别独立地表示包含自剪接位点的连接肽，
E1和E2互不相同，且独立地选自IL
‑
15和优化IL
‑
15Ra，其中，
“‑”
表示式(I)的所述各组分之间功能性连接。8.根据权利要求7的核酸组合，其中E1表示由第二核酸分子编码的IL
‑
15，且E2表示由第三核酸分子编码的优化IL
‑
15Ra。9.根据权利要求7
‑
8的核酸组合，其中L1和L2互不相同，彼此独立地包含选自P2A、T2A、E2A或F2A的自剪接位点；优选地，L1包含P2A位点(优选地，包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列)；且L2包含T2A位点(优选地，包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列)。10.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟晓松，白玥，张莹，
申请(专利权)人：卡瑞济北京生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：