一种检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物及其应用，涉及生物技术领域。引物的序列如SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物及其应用。

技术介绍

[0002]青花菜(Brassica oleracea L.var.italica)又名西兰花、绿花菜，属十字花科芸薹属甘蓝种。青花菜具有很高的营养和保健价值，因其富含蛋白质、维生素及抗癌活性物质莱菔硫烷，莱菔硫烷具有抗癌功效、降低心脑血管疾病和高血压等患病风险，因此备受国内外消费者青睐。青花菜原产于地中海东部沿岸地区，上世纪80年代初传入我国，因其对土壤要求不太严格，栽培技术简单，目前在全国各地广泛种植，也是一种重要的出口创汇蔬菜。
[0003]我国青花菜栽培历史虽已超过30年，但我国青花菜育种工作起步较晚，自交不亲和系制种是杂种优势利用的重要途径之一。由于雄性不育技术的广泛应用，青花菜育种目标发生转变，自交不亲和系的材料选育转变为自交亲和系材料选育，然而育种家经过数年至十年分离固定获得的高世代优良材料基本上为自交不亲和系，尤其是作为母本的亲本材料基本上表现为强自交不亲和性，导致原种采种困难、采种量少，严重制约青花菜杂交优势的利用。因此开展青花菜自交不亲和性研究、克隆自交不亲和基因开发筛选亲和性好的青花菜材料对提高青花菜的结实性和育种效率具有重要的意义。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种检测青花菜强自交不亲和系2M的 SP11基因的引物，通过判断待测样本是否含青花菜强自交不亲和系 2M的SP11基因，从而判断其是否为强自交不亲和系。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]本专利技术青花菜强自交不亲和系2M中的芸薹属自交不亲和等位基因(S位点基因)为I类S单元型，具体为针对SP11基因设计的检测引物。该引物的扩增产物在1029bp，能够特异性实现青花菜强自交不亲和样本的检出。
[0008]一种检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物，引物的序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。
[0009]SEQ ID NO.1上游引物sp11F
‑
1276：
[0010]5’‑
TTTCTGCGAGTAAAAGAGAATC
‑3’
。
[0011]SEQ ID NO.2下游引物sp11R
‑
1277：
[0012]5’‑
CTATTTACAATCGCAAGAATAAGTACC
‑3’
。
[0013]PCR扩增产物的大小为1029bp。专利技术人发现采用上述检测引物能够特异性的对青花菜强自交不亲和性材料进行检出，对于筛选青花菜强自交不亲和性材料、筛选回交转育
改良材料具有重要意义。采用上述引物进行筛选青花菜强自交不亲和性材料，具有筛选方法简单，快捷的优势。
[0014]需要说明的是，本专利技术选择自育高世代优良自交系2M，取花蕾组织材料，送样进行全基因组重测序和转录组测序，获得材料的测序数据，通过转录组测序数据分析获得芸苔属SP11基因及其信息，对全基因组重测序数据进行序列比对分析，通过可视化软件在对应染色体位置进行SP11基因定位，获得SP11基因相关的拼接序列，设计特异性引物进行扩增，获得的PCR产物与T载体连接并送样测序验证，克隆获得自育高世代优良自交系的SP11基因序列全长1029bp。并由此开发出相应的检测引物。
[0015]本专利技术还提供了一种检测试剂盒，其包括上述的检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物。
[0016]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述试剂盒还包括PCR缓冲液、水、DNA聚合酶和dNTP。例如DNA聚合酶选自Taq酶。
[0017]在其他实施方式中，试剂盒包括Utaq PCR Mix，用于更高效准确的进行PCR扩增。
[0018]本专利技术还提供了一种检测试剂，其包括上述的检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物。
[0019]在本专利技术应用较佳的实施方式中，试剂还包括保护剂。保护剂包括不限于：二甲基亚砜、甘油、EDTA等。通过保护剂以延长引物的有效使用期。检测试剂的形态包括不限于：粉剂、悬浮剂、半乳剂、溶液等。
[0020]本专利技术还提供了一种检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物在制备检测试剂或检测试剂盒中的应用。
[0021]本专利技术还提供了一种筛选青花菜强自交不亲和性材料的方法，其包括如下步骤：
[0022]以上述的引物对待测样本的DNA进行扩增，选择PCR阳性样本即为青花菜强自交不亲和性材料。
[0023]PCR阳性样本的判断方式包括不限于：电泳检测、测序等方式。
[0024]在本专利技术应用较佳的实施方式中，扩增的条件包括：
[0025]94
‑
99℃预变性1
‑
10min；94
‑
95℃变性30s，58
‑
60℃退火30s， 72℃延伸60s，28
‑
30个循环；72℃延伸0
‑
10min。
[0026]在上述扩增条件下，能够高准确度地高特异性地实现目标样本中 SP11基因的检测。
[0027]在本专利技术应用较佳的实施方式中，扩增的条件包括：94℃预变性4min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸60s，28个循环；72℃延伸10min；4℃保存。
[0028]本专利技术还提供了一种检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物、检测试剂盒或检测试剂在筛选强自交不亲和青花菜材料、克隆自交不亲和基因或青花菜材料的自交不亲和性分类中的应用。
[0029]本专利技术具有以下有益效果：
[0030]青花菜强自交不亲和系2M中的芸薹属自交不亲和等位基因(S 位点基因)为I类S单元型，本专利技术针对SP11基因设计了特异性检测引物。该引物的扩增产物在1029bp，能够特异性实现青花菜强自交不亲和样本的检出。
[0031]专利技术人发现采用上述检测引物能够特异性的对青花菜强自交不亲和性材料进行
检出，对于筛选青花菜强自交不亲和性材料、筛选回交转育改良材料具有重要意义。采用上述引物进行筛选青花菜强自交不亲和性材料，具有筛选方法简单，快捷的优势。
附图说明
[0032]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0033]图1为引物用于青花菜自交系2M材料的SP11基因扩增电泳图；其中M为100bp DNA Ladder，2M材料3份DNA上样跑胶，从左至右引物顺序分别为：s1000F1
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物，其特征在于，所述引物的序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。2.一种检测试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1所述的检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物。3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR缓冲液、水、DNA聚合酶和dNTP。4.一种检测试剂，其特征在于，其包括权利要求1所述的检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物。5.根据权利要求4所述的检测试剂，其特征在于，所述试剂还包括保护剂。6.一种如权利要求1所述的检测青花菜强自交不亲和系2M的SP11基因的引物在制备检测试剂或检测试剂盒中的应用。7.一种筛选青花菜强自交不亲和性材料的方法，其特征在于，其包括如下步骤：以权利要求1所述的引物对待测样本的DNA进行扩增，选择PCR阳性样本即为青花菜强自交不亲和性材料。8.根据权利要求7所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书五页序列表电子公布附图一页，
申请(专利权)人：浙江美之奥种业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：