普通拟杆菌及其组合物在辅助癌症免疫治疗中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种肠道菌，具体为普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)菌株，保藏号CGMCC No.22924及其在预防肿瘤和辅助肿瘤免疫治疗中的应用。所述菌能够与基于抗PD

【技术实现步骤摘要】
普通拟杆菌及其组合物在辅助癌症免疫治疗中的应用


[0001]本专利技术涉及具有提高免疫应答作用的普通拟杆菌，及其在癌症的免疫治疗领域的应用。具体而言，涉及该菌、含有其的药物组合物在抗PD1相关的癌症免疫治疗中的应用及提高群体肿瘤免疫治疗响应率的方法。

技术介绍

[0002]已知程序性死亡受体1(PD
‑
1)是一种主要表达于活化的CD4和CD8T细胞、B细胞、单核细胞、NK细胞和树突状细胞表面的免疫抑制分子，通过抑制T细胞炎症活动促进免疫耐受。肿瘤细胞通过上调PD
‑
1的配体PD
‑
L1，促进T细胞耗竭，进而实现免疫逃逸。
[0003]近年来，针对程序性死亡1(PD
‑
1)及其配体(PD
‑
L1)的抑制剂由于在晚期恶性肿瘤中具有显著的临床效果而受到了广泛关注，并获得2018年诺贝尔生理学及医学奖。通过阻断CTLA
‑
4和PD
‑
1这样的治疗方法称为免疫检查点阻断(immune checkpoint blockade，ICB)。然而，对ICB的治疗而言其抗癌效果目前仅局限于15％
‑
30％的癌症患者，也就是说仍有很大比例的患者对ICB治疗是不响应的。
[0004]菌的存在与ICB的疗效具有联系。在利用小鼠的临床前研究中发现，与无特定病原体(SFP)小鼠相比，在无菌(GF)荷瘤小鼠中使用ICB对肿瘤无显著疗效。与此类似，对SPF小鼠进行抗生素处理时ICB的疗效被显著抑制，此外，Matson等人通过对42名转移性黑色素瘤患者的ICB前的粪便进行了16sRNA测序分析发现，在PD
‑
1响应患者体内长双歧杆菌为富集。这些结果表明，某些特定的肠道微生物类群可以通过与宿主免疫系统的相互作用调节(特别是协同，增强)抗PD1治疗的效果。
[0005]因此，特定的能增强抗PD1治疗疗效的菌株对在更广泛的人群中实施癌症的ICB治疗可能是至关重要的，并在肿瘤的治疗的领域具有广泛的应用前景。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种肠道菌，其能够通过增强CD8T细胞的效应因子分泌能力，从而增加免疫检查点阻断疗法(ICB)的疗效，达到改善肿瘤患者生存期的目的。
[0007]因此，专利技术人首先建立包含了人肠道微生物的主要类群的肠道菌库，通过培养上清液的IFN
‑
γ+CD8T细胞刺激试验的体外筛选，筛选到了能提高机体免疫应答的拟杆菌(Bacteroides vulgatus)(在本专利技术中为编号347)，该菌株于2021年7月19日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为22924。该菌株能在GAM肉汤中厌氧培养，在BBE平板上长出灰白色菌落。其16sRNA序列示于SEQ ID No:1中。
[0008]在体外筛选中，该菌株来源的代谢物能够显著增强CD8T细胞IFN
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g分泌情况。在体外杀伤实验中，该菌株来源代谢物能提高CD8T细胞IFN
‑
γ分泌能力以及IFN
‑
γ阳性的CD8T细胞中，PD
‑
1阳性和TNF
‑
α阳性细胞占的比例。
[0009]所述普通拟杆菌能够减少荷瘤小鼠的肿瘤体积，提高抗肿瘤免疫治疗响应率，在受试者体内定植，有望增强基于抗
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PD
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1的肿瘤治疗效果。
[0010]本专利技术提供普通拟杆菌，所述菌株的保藏号为(CGMCC:22924)。
[0011]本专利技术包括以下内容。
[0012]1.普通拟杆菌，其为自人肠道微生物分离的普通拟杆菌，保藏号为CGMCC:22924，保藏日期为2021年07月19日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，或
[0013]普通拟杆菌，其与普通拟杆菌CGMCC22924相比，在基因组或16SRNA的核苷酸序列中具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％的序列同一性，或具有与所述核苷酸序列编码的氨基酸序列相比有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列。
[0014]2.项1所述的普通拟杆菌在制备用于预防肿瘤产生或治疗肿瘤的药物中的用途，其中，当所述药物用于治疗肿瘤时优选与其他抗癌治疗联合施用而增强抗癌效果。
[0015]3.根据项2所述的用途，其中所述其他抗癌治疗为包括抗PD
‑
1治疗剂(优选为抗PD
‑
1的抗体和/或PD
‑
L1抑制剂)，或除了抗PD
‑
1抗体以外的其他抗体药物。
[0016]4.根据项3或4所述的用途，其中，所述肿瘤为实体瘤(优选为选自由胃癌、食管癌、结肠癌、直肠癌、黑色素瘤组成的组中的一种或多种，更优选为结肠癌)。
[0017]5.项1所述的普通拟杆菌在制备提高生物体(优选为哺乳动物，更优选为人)的免疫应答(优选为提高T细胞中CD8阳性T细胞的比率)的药物中的用途。
[0018]6.药物组合物，其特征在于，包含根据项1所述的普通拟杆菌、或所述普通拟杆菌的培养物或其加工物，和/或药学上可接受的载体。
[0019]7.根据项6所述的药物组合物，其中，还包括抗PD
‑
1治疗剂(优选为抗PD
‑
1的抗体或PD
‑
L1抑制剂)，或除了抗PD
‑
1抗体以外的其他抗体药物。
[0020]8.根据项6或7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型选自由片剂、颗粒剂、胶囊剂、悬液、冻干制剂组成的组。
[0021]9.提高生物体免疫应答的方法，包括对生物体施用项1所述的普通拟杆菌，或所述普通拟杆菌的培养物或其加工物，或项6所述的药物组合物。
[0022]10.检查普通拟杆菌是否在生物体中定植的方法，包括从生物体的粪便或肠道提取物中提取细菌16sRNA，并以其为模板，使用具有如SEQ ID No:4所示的序列的上游引物和具有如SEQ ID No:5所示的序列的下游引物进行PCR。
[0023]作为本专利技术的普通拟杆菌能够应用的肿瘤包括实体瘤，可列举但不限于胃癌、食管癌、结肠癌、直肠癌、黑色素瘤。
[0024]本专利技术所述抗PD
‑
1治疗剂指通过阻止或抑制PD
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1工作而发挥作用，使PD
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1下游的信号阻止或抑制的物质，可以为抗PD
‑
1的抗体或PD
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L1抑制剂等。
[0025]在本专利技术的药物组合物中，可以包含本领域通常使用的药学上可接受的溶剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、润滑剂等，但不限于此。
[0026]本专利技术的药物组合物可以制备为常用的剂型，例如片剂、颗粒剂、胶囊剂、悬液、冻干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.普通拟杆菌，其为自人肠道微生物分离的普通拟杆菌，保藏号为CGMCC:22924，保藏日期为2021年07月19日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，或普通拟杆菌，其与普通拟杆菌CGMCC22924相比，在16SRNA的核苷酸序列中具有至少95％，优选至少96％，97％，98％或99％的序列同一性。普通拟杆菌，其与普通拟杆菌CGMCC22924相比，在基因组的核苷酸序列中具有至少99％的序列同一性，或具有与所述核苷酸序列编码的氨基酸序列相比有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列。2.权利要求1所述的普通拟杆菌在制备用于预防肿瘤产生或治疗肿瘤的药物中的用途，其中，当所述药物用于治疗肿瘤时优选与其他抗癌治疗联合施用而增强抗癌效果。3.根据权利要求2所述的用途，其中所述其他抗癌治疗包括抗PD
‑
1治疗剂(优选为抗PD
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1的抗体和/或PD
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L1抑制剂)，或除了抗PD
‑
1抗体以外的其他抗体药物。4.根据权利要求3或4所述的用途，其中，所述肿瘤为实体瘤(优选为选自由胃癌、食管癌、结肠癌、直肠癌、黑色...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱书，郭梦，陶万银，
申请(专利权)人：中国科学技术大学，
类型：发明
国别省市：