N-乙酰基保护氨基酸与其光学异构体的分离检测方法技术

本发明专利技术涉及N

【技术实现步骤摘要】
N
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乙酰基保护氨基酸与其光学异构体的分离检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析检测领域，具体涉及N
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乙酰基保护氨基酸与其光学异构体的分离检测方法。

技术介绍

[0002]随着医药行业的快速发展，多肽类药物具有生物活性高、特异性强、毒性反应弱、在体内不易产生聚集、与其他药物相互作用比较少、与体内受体亲和性高等优点，是国内外制药企业研发热点之一。N端带有保护基团的氨基酸是化学合成多肽药物的通用起始物料。其中，N
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乙酰基保护氨基酸是N端被乙酰基保护的一类氨基酸，乙酰基保护基团一般由乙酸酐引入，它是合成多肽的关键起始物料。比如，醋酸加尼瑞克采用固相合成法得到，其合成工艺中用到的(R)
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N
‑
乙酰基
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beta
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萘基丙氨酸就是其关键起始物料。
[0003]由于保护氨基酸含有手性中心，多肽类药物的起始物料及合成工艺等均可能使终产品产生差向肽杂质，且该类杂质与目标产物结构、化学性质非常接近，仅采用经典小分子常用的萃取、重结晶等手段无法去除，液相纯化手段耗时耗力还不一定达到效果，杂质对药物的安全性及有效性具有直接影响，所以从工艺及源头控制保护氨基酸的光学异构体非常重要。
[0004]对于保护氨基酸光学异构体的检测，常规采用液相正相系统，以正己烷和异丙醇按不同比例混合作为洗脱溶剂进行分离检测。但是，该系统多适用于检测N
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Bz、N
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Fmoc、N
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DNB等N端保护基团位阻较大或保护基团含有π
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酸/π
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碱芳香性官能团的保护氨基酸。对于N
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乙酰基保护氨基酸，本专利技术的专利技术人在摸索检测方法时发现，上述常规液相系统并不适用，可能原因是由于乙酰基基团的位阻较小，且并非π
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酸/π
‑
碱芳香性官能团，导致待分离成分与手性固定相之间缺少空间作用和π
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π相互作用，因此分离效果不佳。例如，专利申请CN109725073A公开了一种乙酰半胱氨酸对映异构体的分离检测方法，为了增加色谱柱中固定相与待分离手性物质之间的相互作用，提高手性分离的选择性，该方法需进行柱前衍生化，将乙酰半胱氨酸与衍生试剂(R)
‑
(+)
‑
ɑ
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甲基苄基异氰酸酯进行反应。然而，柱前衍生化反应操作步骤复杂，不易于推广使用。而且，上述常规液相系统用到的正己烷极易挥发，毒性强，对检测人员伤害大，且色谱级正己烷、异丙醇价格昂贵，导致检测成本较高。
[0005]因此，亟需提供一种高效便捷、安全、低成本的液相色谱方法用于N
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乙酰基保护氨基酸与其光学异构体的分离检测。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术提供了N
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乙酰基保护氨基酸与其光学异构体的分离检测方法，采用高效液相色谱法，固定相为O
‑9‑
(叔丁酯氨基甲酰)奎纳定键合硅胶，流动相为体积比500：(5～15)：(0.5～1.5)的甲醇：冰醋酸：三乙胺混合溶液。
[0007]进一步地，所述固定相为CHIRALPAK QD
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AX或其等效色谱柱。
[0008]优选地，CHIRALPAK QD
‑
AX的长度为150mm。
[0009]优选地，CHIRALPAK QD
‑
AX的内径为2.1～4.6mm。
[0010]进一步优选地，CHIRALPAK QD
‑
AX的内径为4.6mm。
[0011]优选地，CHIRALPAK QD
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AX的填料粒径为5μm。
[0012]进一步地，所述流动相为体积比500：(8～12)：(0.8～1.2)的甲醇：冰醋酸：三乙胺混合溶液。
[0013]优选地，所述流动相为体积比500：10：1的甲醇：冰醋酸：三乙胺混合溶液。
[0014]进一步地，所述高效液相色谱法采用等度洗脱。
[0015]进一步地，所述N
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乙酰基保护氨基酸为(R)
‑
N
‑
乙酰基
‑
beta
‑
萘基丙氨酸。
[0016]进一步地，所述流动相的流速为每分钟0.6～1.0ml。
[0017]优选地，流速为每分钟0.7～0.9ml。
[0018]进一步优选地，流速为每分钟0.8ml。
[0019]进一步地，所述高效液相色谱法设置柱温为25℃～40℃。
[0020]优选地，设置柱温为28℃～32℃。
[0021]进一步优选地，设置柱温为30℃。
[0022]进一步地，所述高效液相色谱法设置检测波长为261nm～281nm。
[0023]优选地，设置检测波长为265nm～271nm。
[0024]进一步优选地，设置检测波长为271nm。
[0025]进一步地，所述高效液相色谱法配制供试品溶液的浓度为0.1～5mg/ml。
[0026]优选地，所述高效液相色谱法配制供试品溶液的浓度为0.8～1.2mg/ml。
[0027]进一步优选地，所述高效液相色谱法配制供试品溶液的浓度为1.0mg/ml。
[0028]本专利技术中，所述供试品溶液的浓度以N
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乙酰基保护氨基酸供试品的取用量计。
[0029]进一步地，配制供试品溶液的溶剂为所述流动相。
[0030]进一步地，供试品溶液的进样体积为5～15μl。
[0031]优选地，供试品溶液的进样体积为8～12μl。
[0032]进一步优选地，供试品溶液的进样体积为10μl。
[0033]进一步地，所述检测为定性检测和/或定量检测。
[0034]优选地，定量检测采用外标法测定所述光学异构体的含量。
[0035]根据本专利技术的一些具体实施方式，N
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乙酰基保护氨基酸与其光学异构体的分离检测方法包括如下操作步骤：
[0036]1)供试品溶液制备：取待测N
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乙酰基保护氨基酸，加流动相溶解，得供试品溶液；
[0037]2)对照品溶液制备：取N
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乙酰基保护氨基酸光学异构体对照品，加流动相溶解，得对照品溶液；
[0038]3)分别吸取供试品溶液、对照品溶液和系统适用性溶液注入高效液相色谱仪。
[0039]进一步地，步骤2)所述对照品溶液每1ml含光学异构体对照品0.5～2.5μg。
[0040]本专利技术提供的检测方法能够使N
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乙酰基保护氨基酸与其光学异构体有效分离，实现了N
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乙酰基保护氨基酸中光学异构体的准确检测。方法学验证实验结果表明，本专利技术检测方法的专本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.N
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乙酰基保护氨基酸与其光学异构体的分离检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，固定相为O
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(叔丁酯氨基甲酰)奎纳定键合硅胶，流动相为体积比500：(5～15)：(0.5～1.5)的甲醇：冰醋酸：三乙胺混合溶液。2.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述固定相为CHIRALPAK QD
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AX或其等效色谱柱；优选地，CHIRALPAK QD
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AX的长度为150mm；优选地，CHIRALPAK QD
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AX的内径为2.1～4.6mm，进一步优选内径为4.6mm；优选地，CHIRALPAK QD
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AX的填料粒径为5μm。3.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述流动相为体积比500：(8～12)：(0.8～1.2)的甲醇：冰醋酸：三乙胺混合溶液；优选地，所述流动相为体积比500：10：1的甲醇：冰醋酸：三乙胺混合溶液。4.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱法采用等度洗脱。5.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述N
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乙酰基保护氨基酸为(R)<...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩骁飞，李正娇，徐彬，钟吉，袁富金，苟瑜，胡和平，
申请(专利权)人：四川汇宇海玥医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：