一种精子DNA碎片化检测用质控品及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种精子DNA碎片化检测用质控品及其制备方法和应用。细胞DNA碎片化方法包括：将细胞与DNA碎片化试剂混合，获得DNA碎片化的细胞，所述DNA碎片化试剂含有氧化剂和盐酸。本发明专利技术设计细胞DNA碎片化方法及精子DFI检测用质控品的制备方法，可有效减少细胞损失，降低成本，同时可准确控制细胞DNA碎片化值以及使质控品具备高稳定性和均一性。以及使质控品具备高稳定性和均一性。以及使质控品具备高稳定性和均一性。

【技术实现步骤摘要】
一种精子DNA碎片化检测用质控品及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种精子DNA碎片化检测用质控品及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]目前诊断男性不育的方法主要为检测精液量、精子浓度、精子存活率、精子活动力和精子形态等实验室指标，但是这些参数受实验员主观判断影响，且波动范围较大，仅靠这些参数已经不能满足临床需要。此外，有研究指出无论男性不育症患者精液常规检查结果是否正常，都可能存在精子DNA异常。
[0003]精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index，DFI)是指精子在形成过程中受到有害因素(如氧化应激、吸烟、高温、药物等)影响，使完整的精子DNA受到损伤，产生DNA碎片。精子DFI检测独立于精液常规检查，从分子水平反映精子DNA损伤，评估男性生育力，并在一定程度上可预测辅助生殖临床结局的参数，众多医院已经开展了对精子DFI的检测，其中使用流式细胞术的精子染色质结构分析(SCSA)法应用最为广泛。
[0004]目前精子DFI检测需求日趋增多，然而由于缺乏标准化的操作程序和相应的质控产品，检测结果存在差异且无法准确保证。目前开展DFI检测的生殖检验实验室大多未进行室内质控，部分实验室常用真实精子样本进行内部质控，存在的问题有：(1)无法满足室间质控的需求；(2)使用不同精子样本时，精子细胞的均匀性不同，更容易造成批内和批间的差异；(3)需要液氮储存不易于保存；(4)DNA碎片化值无法准确控制；(5)涉及人类基因样本有许多潜在的道德和其他风险，无法用于外部质量控制；(6)无法大规模在临床上进行推广。此外，还有报道利用鸡红细胞模拟精子细胞作为精子DFI检测用质控品，如CN113432959A公开一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，所使用的鸡红细胞与人类精子大小相似，具有细胞核，处于稳定的分裂周期末期，且具有成熟的生产检测体系，可以弥补原材料获取困难，且无法大规模推广的缺点，但直接利用过氧化氢对鸡红细胞DNA进行氧化使其DNA链断裂，易对鸡红细胞的细胞膜造成破坏，使得鸡红细胞损失较大，导致制备成本较高，不利于推广应用，且产生的DNA碎片化效果不稳定。
[0005]综上所述，如何提供一种精子DNA碎片化检测用质控品，制备成本低且具备高稳定性，是精子DNA碎片化检测领域亟需解决问题之一

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种精子DNA碎片化检测用质控品及其制备方法和应用，以期解决现有DFI检测质控品成本高、应用困难等诸多问题。
[0007]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种细胞DNA碎片化方法，所述细胞DNA碎片化方法包括：
[0009]将细胞与DNA碎片化试剂混合，获得DNA碎片化的细胞，所述DNA碎片化试剂含有氧化剂和盐酸。
[0010]本专利技术中，DNA碎片化试剂中的氧化剂具有强氧化性，能够对磷酸二酯键和脱氧核糖作用使DNA核苷酸链发生断裂，同时与盐酸协同配合，既能高效、稳定地使完整的DNA碎片化，同时能有效降低细胞损失。
[0011]优选地，所述氧化剂包括过氧化氢和/或次氯酸。
[0012]本专利技术中，选择特定的氧化剂能够进一步改善碎片化效果并降低细胞损失。
[0013]优选地，所述DNA碎片化试剂中所述盐酸的浓度为0.08
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1.08mol/L，包括但不限于0.09mol/L、0.1mol/L、0.12mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L、0.8mol/L、0.9mol/L、1mol/L、1.02mol/L、1.04mol/L、1.06mol/L或1.07mol/L。
[0014]优选地，所述DNA碎片化试剂中所述过氧化氢的质量百分比为3％
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30％，包括但不限于4％、5％、6％、7％、8％、10％、15％、20％、21％、22％、25％、26％、27％、28％或29％。
[0015]优选地，所述DNA碎片化试剂中所述次氯酸的浓度为30
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300μg/mL，包括但不限于31μg/mL、32μg/mL、33μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、220μg/mL、250μg/mL、260μg/mL、280μg/mL、290μg/mL、291μg/mL、292μg/mL、295μg/mL、296μg/mL、298μg/mL或299μg/mL。
[0016]本专利技术中，控制DNA碎片化试剂中氧化剂和盐酸的浓度能够进一步改善碎片化效果并降低细胞损失。
[0017]优选地，所述DNA碎片化试剂还含有表面活性剂和/或无机盐。
[0018]优选地，所述表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨醇酯
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20、聚山梨醇酯
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80、十二烷基麦芽糖苷，洋地黄皂苷或乙基苯基聚乙二醇中任意一种或至少两种的组合。
[0019]优选地，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化亚铁、氯化铁、氯化钙、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠中任意一种或至少两种的组合。
[0020]优选地，所述混合前还包括对细胞进行预固定的步骤。
[0021]优选地，所述预固定的步骤包括：
[0022]将细胞与细胞固定液混合。
[0023]本专利技术中，巧妙设计在碎片化前对细胞进行与固定处理，能够有效降低细胞损失，同时延长细胞保存时间。
[0024]优选地，所述细胞固定液含有细胞固定剂。
[0025]优选地，所述细胞固定剂包括甲醛和/或戊二醛。
[0026]本专利技术中，使用特定的固定剂能够进一步降低细胞损失，同时延长细胞保存时间。
[0027]优选地，所述细胞固定剂中甲醛的质量百分比为3％
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10％，包括但不限于4％、5％、6％、7％、8％或9％。
[0028]优选地，所述细胞固定剂中戊二醛的质量百分比为2.5％
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5％，包括但不限于2.6％、2.7％、2.8％、3％、3.2％、3.5％、4％、4.2％、4.5％、4.6％、4.8％或4.9％。
[0029]优选地，所述细胞固定液还含有表面活性剂和/或无机盐。
[0030]优选地，所述表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨醇酯
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20、聚山梨醇酯
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80、十二烷基麦芽糖苷，洋地黄皂苷或乙基苯基聚乙二醇中任意一种或至少两种的组合。
[0031]优选地，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化亚铁、氯化铁、氯化钙、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠中任意一种或至少两种的组合。
[0032]优选地，所述方法还包括将DNA碎片化的细胞与细胞保护液混合的步骤。
[0033]优选地，所述细胞保护液含有抑菌剂、螯合剂和氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞DNA碎片化方法，其特征在于，所述细胞DNA碎片化方法包括：将细胞与DNA碎片化试剂混合，获得DNA碎片化的细胞；所述DNA碎片化试剂含有氧化剂和盐酸。2.根据权利要求1所述的细胞DNA碎片化方法，其特征在于，所述氧化剂包括过氧化氢和/或次氯酸；优选地，所述DNA碎片化试剂中所述盐酸的浓度为0.08
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1.08mol/L；优选地，所述DNA碎片化试剂中所述过氧化氢的质量百分比为3％
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30％；优选地，所述DNA碎片化试剂中所述次氯酸的浓度为30
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300μg/mL；优选地，所述DNA碎片化试剂还含有表面活性剂和/或无机盐；优选地，所述表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨醇酯
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20、聚山梨醇酯
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80、十二烷基麦芽糖苷、洋地黄皂苷或乙基苯基聚乙二醇中任意一种或至少两种的组合；优选地，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化亚铁、氯化铁、氯化钙、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠中任意一种或至少两种的组合。3.根据权利要求1或2所述的细胞DNA碎片化方法，其特征在于，所述混合前还包括对细胞进行预固定的步骤；优选地，所述预固定的步骤包括：将细胞与细胞固定液混合；优选地，所述细胞固定液含有细胞固定剂；优选地，所述细胞固定剂包括甲醛和/或戊二醛；优选地，所述细胞固定液还含有表面活性剂和/或无机盐；优选地，所述表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨醇酯
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20、聚山梨醇酯
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80、十二烷基麦芽糖苷，洋地黄皂苷或乙基苯基聚乙二醇中任意一种或至少两种的组合；优选地，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化亚铁、氯化铁、氯化钙、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠中任意一种或至少两种的组合。4.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：康凯，张雅文，张欣，孔令印，梁波，
申请(专利权)人：苏州贝康医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：