生物素化抗体的制备方法技术

本发明专利技术涉及体外诊断领域，特别涉及生物素化抗体的制备方法。本发明专利技术公开了一种高效的生物素化抗体制备方法包括：将抗体氨基化；使抗体与生物素溶液反应；去除游离的生物素，加入保护剂，得到生物素化抗体成品。本发明专利技术通过对抗体的氨基化修饰，改变抗体的理化性质，增加了抗体与生物素反应的反应位点，改变了抗体的等电点，增加了亲水性，另外通过反应体系优化，进一步提升了生物素化效率，本发明专利技术方法操作简单，应用面广，获得的生物素化抗体信号放大能力强。力强。

【技术实现步骤摘要】
生物素化抗体的制备方法


[0001]本专利技术涉及体外诊断领域，特别涉及生物素化抗体的制备方法。

技术介绍

[0002]生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合及多级放大效应，使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。它已广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究等各项技术中。
[0003]生物素又被称为维生素H，或者维生素B7，是一种水溶性维生素，其功能是在人体内参与脂肪、糖、蛋白代谢等重要物质的生化反应。生物素广泛存在于肝、肾、酵母、牛乳中。现如今通过不同的改造方式，生物素有各种各样的衍生物，生物素标记蛋白的技术也日趋成熟。生物素衍生物结构基本上由生物素双环结构，戊酸侧链，间隔臂，以及反应基团组成。通常通过对生物素衍生物中间隔臂的亲疏水性，长度的筛选、反应条件的优化等来提升蛋白的标记效率，但提升程度往往是有限的，随着生物素亲和素系统应用的普及，对生物素化抗体的需求量也在增加，而对于一些大量使用，或成本昂贵的活材，需要找到一种有效的方法来解决此问题。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了生物素化抗体的制备方法，该方法操作简单，节省成本，应用范围广；获得的生物素化抗体稳定性好，信号放大能力强。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了生物素化抗体的制备方法，包括如下步骤：
[0007]步骤(1)：将抗体置换于酸性缓冲液中，并与1
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乙基
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‑<br/>二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐以及氨基PEG氨基混合后，发生第一反应，获得氨基化抗体；
[0008]步骤(2)：将步骤(1)所述氨基化抗体置换于偏碱性缓冲液中，并与生物素混合发生第二反应，获得半成品；
[0009]步骤(3)：将步骤(2)所述半成品置换于保存缓冲液中，去除游离的生物素，再与保护剂混合，获得生物素化抗体。
[0010]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的所述置换包括通过透析或凝胶过滤层析实现所述置换。
[0011]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的步骤(1)中：
[0012]所述抗体包括鼠单抗或任意物种来源的多克隆抗体；和/或
[0013]所述酸性缓冲液包括MES缓存液；和/或
[0014]所述酸性缓冲液的pH为4.5～6.5；和/或
[0015]所述抗体、所述1
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乙基
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和所述氨基PEG氨基的摩尔比为1:(20～30):(15～20)；和/或
[0016]所述氨基PEG氨基的分子量为200～1000；和/或
[0017]所述第一反应的温度为2～8℃；和/或
[0018]所述第一反应的时间为12～16h。
[0019]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的步骤(1)中：
[0020]所述抗体为鼠单抗；
[0021]所述鼠单抗的浓度不低于1mg/mL；和/或
[0022]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的步骤(1)中：
[0023]所述第一反应的温度为4℃；和/或
[0024]所述第一反应的时间为16h。
[0025]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的步骤(2)中：
[0026]所述偏碱性缓冲液包括不含氨基的缓冲液；和/或
[0027]所述不含氨基的缓冲液包括硼酸缓冲液和/或碳酸盐缓液；和/或
[0028]所述生物素包括水溶性琥珀酰亚胺修饰的生物素；和/或
[0029]所述水溶性琥珀酰亚胺修饰的生物素包括sulfo
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NHS
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LC
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LC
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Biotin和/或sulfo
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NHS
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Biotin；和/或
[0030]所述氨基化抗体与所述生物素的摩尔比为1:(40～80)；和/或
[0031]所述第二反应的温度为20～27℃；和/或
[0032]所述第二反应的时间为12～16h。
[0033]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的步骤(2)中：
[0034]所述生物素为sulfo
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NHS
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Biotin；和/或
[0035]所述氨基化抗体与所述生物素的摩尔比为1:(40～60)；和/或
[0036]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的步骤(2)中：
[0037]所述第二反应的温度为25℃；和/或
[0038]所述第二反应的时间为16h。
[0039]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的步骤(3)中：
[0040]所述保存缓冲液包括中性缓冲液；和/或
[0041]所述中性缓冲液包括pH值为7.0～7.4的磷酸盐缓冲液；和/或
[0042]所述保护剂包括浓度为80～120g/L的海藻糖和/或蔗糖。
[0043]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述制备方法的步骤(3)中：
[0044]所述中性缓冲液为pH值为7.2的磷酸盐缓冲液；和/或
[0045]所述保护剂包括浓度为100g/L的蔗糖。
[0046]本专利技术的方法有如下效果：
[0047]本专利技术操作简单，通过两步交联反应即可实现；节省成本，同过对抗体的修饰，在达到同样标记效果的前提下，可减少一部分抗体、生物素的用量；应用范围广，不仅使用于单抗，也适用于多抗；获得的生物素化抗体稳定性好，信号放大能力强。
附图说明
[0048]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0049]图1示本专利技术的方法制得的抗体的效果验证柱状分析图。
具体实施方式
[0050]本专利技术公开了生物素化抗体的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0051]本专利技术的目的在于提供一种高效的生物素化抗体制备方法，该方法操作简单，节省成本，应用范围广；获得的生物素化抗体稳定性好，信号放大能力强。
[0052]其原理为：抗体表面暴露有大量的羧基，用氨基PEG氨基将抗体表面的羧基修饰为氨基，加上抗体表面本身含有的氨基，大大增加了与琥珀酰亚胺修饰的生物素反应的几率；另外，大量的PEG氨基修饰，使抗体的等电点更高，亲水性更强，选用合适的反应条件，可将反应效率提升至最大，反应效率的提升，使抗体上连接更多数量的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.生物素化抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤(1)：将抗体置换于酸性缓冲液中，并与1
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和氨基PEG氨基混合后发生第一反应，获得氨基化抗体；步骤(2)：将步骤(1)所述氨基化抗体置换于偏碱性缓冲液中，并与生物素混合发生第二反应，获得半成品；步骤(3)：将步骤(2)所述半成品置换于保存缓冲液中，去除游离的生物素，再与保护剂混合，获得生物素化抗体。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述置换包括通过透析或凝胶过滤层析实现所述置换。3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中：所述抗体包括鼠单抗或任意物种来源的多克隆抗体；和/或所述酸性缓冲液包括MES缓存液；和/或所述酸性缓冲液的pH为4.5～6.5；和/或所述抗体、所述1
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和所述氨基PEG氨基的摩尔比为1:(20～30):(15～20)；和/或所述氨基PEG氨基的分子量为200～1000；和/或所述第一反应的温度为2～8℃；和/或所述第一反应的时间为12～16h。4.如权利要求1至3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中：所述抗体为鼠单抗；所述鼠单抗的浓度不低于1mg/mL。5.如权利要求1至4任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中：所述第一反应的温度为4℃；和/或所述第一反应的时间为16h。6.如权利要求1至5任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈琦，王敏，杨丽革，柴丹丹，田晓平，赵巧辉，李桂林，付光宇，杨增利，
申请(专利权)人：郑州伊美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：