同时检测南瓜直链淀粉和支链淀粉含量的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种同时检测作物直链淀粉和支链淀粉含量的方法，包括：(1)将待测液采用多功能微孔板检测仪检测，其中，直链淀粉测定波长λ1＝616nm，直链淀粉参比波长λ2＝472nm，支链淀粉测定波长λ3＝545nm，支链淀粉参比波长λ4＝725nm；然后将检测结果分别带入直链淀粉的回归方程y1＝

【技术实现步骤摘要】
同时检测南瓜直链淀粉和支链淀粉含量的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及农作物淀粉含量的检测
，更具体的说是涉及一种同时检测南瓜直链淀粉和支链淀粉含量的方法及其应用。

技术介绍

[0002]南瓜隶属葫芦科南瓜属，类型多样，资源丰富，果肉富含淀粉。南瓜淀粉属于小颗粒淀粉，大小分布在5
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15um，平均直径10um，比绿豆淀粉颗粒(18
‑
26um)还要小，是淀粉制品的优良原材料。南瓜淀粉是由葡萄糖组成的多糖高分子化合物，其中含有以线性结构为主的直链淀粉和分支结构为主的支键淀粉。大量研究表明，作物中的两类淀粉，它们的含量、空间结构及其相互关系，不仅影响作物本身的口感和营养品质，也影响作物淀粉的理化特性和加工性能。比如高直链淀粉的南瓜品种更适宜加工南瓜粉丝，而高支链淀粉的南瓜品种更适宜加工为冷冻南瓜。建立同时检测南瓜直链淀粉和支链淀粉含量的高通量高效检测技术，是准确辨识和培育最适南瓜淀粉深加工专用南瓜品种的首要工作。
[0003]已经有农业标准、国家标准提供了淀粉、直链淀粉和支链淀粉含量的测定方法，但是操作繁琐，对检验员的经验要求较高，不能满足高通量和同时获得直链淀粉和支链淀粉含量的要求。也有文献研究不同作物双波长测定需要的测定波长和参比波长，但是直链淀粉和支链淀粉的标准品和测试淀粉物种来源不同，将导致双波长检测误差。而现有文献和试剂盒，不能为南瓜双波长测定提供专有的测定波长和参比波长。
[0004]现有农业行业标准方法NY/T2639
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2014《稻米支链淀粉的测定分光光度法》，利用分光光度计法在620nm直接检测大米直链淀粉含量，支链淀粉的含量需首先通过国家标准方法GB5009.9
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2016《食品安全国家标准食品中淀粉的测定》获得淀粉总量，再通过公式(支链淀粉含量＝淀粉含量
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直链淀粉含量)计算获得。利用该流程获取直链淀粉和支链淀粉含量，不仅步骤繁琐，而且GB5009.9
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2016的操作对检验员的经验要求较高，不适合高通量测定要求。
[0005]现有国家标准方法GB/T15683
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2008《大米直链淀粉含量的测定》，模拟不同直链淀粉和支链淀粉含量配比，利用分光光度计法，选择将支链淀粉的干扰降低到最小的720nm，检测直链淀粉含量，同样也没有直接给出支链淀粉的含量。该流程也不能满足需同时获得直链淀粉和支链淀粉含量的要求。
[0006]现有市售的直链淀粉和支链淀粉试剂盒，如市售的A152
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1(50T/48样)和A152
‑1‑
1(50T/48样)，以及BC4265(100T/96样)和BC4275(100T/96样)，可以满足高通量测定要求，但是需要分步操作，分别测量直链淀粉和支链淀粉的含量，不能满足同时获得直链淀粉和支链淀粉含量的要求。同时，由于检测直链淀粉和支链淀粉含量的试验需要至少3次重复，因此，尽管试剂盒可以用以批量检测，但是检测成本高。同时，试剂盒的最低检出限和线性范围狭窄。对于淀粉含量较高的作物，制备的样品需要反复稀释，使样本浓度符合试剂盒的线性范围，才能使用试剂盒测定，无形之中，增加了操作步骤。
[0007]不同作物双波长测定需要的测定波长和参比波长不一样，现有技术不能为南瓜双
波长测定提供南瓜专用的测定波长和参比波长。双波长分光光度法根据碘分别与直链淀粉和支链淀粉结合，产生吸收光谱不同的复合物，通过测定波长和参比波长，在同一反应体系中，可同时获得直链淀粉和支链淀粉的含量。该方法虽然简便，但是通过该方法获取准确结果的基础是1、直链淀粉和支链淀粉的测定波长和参比波长确定，2、高通量直链淀粉和支链淀粉含量测定反应体系的确定。由于不同作物的淀粉特性不同，与碘结合存在差异，如果直链淀粉和支链淀粉的标准品和测试淀粉物种来源不同，将导致双波长检测误差。只有利用本物种的直链淀粉和支链淀粉标准品制作标准曲线，才能获取本作物特有的双波长。
[0008]目前，利用双波长分光光度法测量芭蕉芋(石海信，周艳沙，宾敏，陆来仙，尹艳镇.芭蕉芋直链和支链淀粉纯品的提取及其光谱分析.2012.37(5)：149
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153)、莲(吴远琴，黄娟，郑兴汶，谢克强，胡中立，刁英.23份莲资源直链淀粉和支链淀粉含量测定.2014.6:41
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43)和马铃薯(王丽，罗红霞，李淑荣，刘小飞，潘妍，徐毓谦.马铃薯中直链淀粉和支链淀粉含量测定方法的优化.食品工业科技.2017.17:220
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223.宋玉浩，史伟玲，张娇，丁振宇，彭洪娴，蒋春燕，马秋芹，李芝静，赵勇，唐道彬，张凯，王季春，刘勋.马铃薯块茎淀粉组分高效检测体系的建立及应用.2021.48(3)：600
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608)等作物的直链淀粉和支链淀粉含量，已有成功报道。其他很多文献，以及现有市售的直链淀粉和支链淀粉试剂盒，均以马铃薯的直链淀粉和支链淀粉作为标样。因此，现有文献和试剂盒，不能为南瓜双波长测定提供专有的测定波长和参比波长。南瓜营养保健，加工潜力大，随着南瓜加工产业升级，亟需开发一种高通量同时检测南瓜直链淀粉和支链淀粉含量的高效方法
[0009]因此，尽管现有技术可以测定作物的直链淀粉和支链淀粉含量，但是目前仍缺乏一种高通量同时检测作物直链淀粉和支链淀粉含量的高效方法。

技术实现思路

[0010]有鉴于此，本专利技术提供了一种同时检测作物直链淀粉和支链淀粉含量的方法，能够批量检测作物淀粉组分含量，在同一反应体系中(200ul)，同时检测作物直链淀粉和支链淀粉含量(96孔板)。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0012]一种同时检测南瓜直链淀粉和支链淀粉含量的方法，包括：
[0013](1)将待测液采用多功能微孔板检测仪检测，其中，直链淀粉测定波长λ1＝616nm，直链淀粉参比波长λ2＝472nm，支链淀粉测定波长λ3＝545nm，支链淀粉参比波长λ4＝725nm；
[0014](2)然后将检测结果分别带入直链淀粉的回归方程y1＝
‑
0.8163x1+0.0747和支链淀粉的回归方程y2＝0.35x2+0.0123；其中，y1表示待测液的吸光值λ2‑
λ1，x1表示淀待测液的直链淀粉浓度；y2表示待测液的吸光值λ3‑
λ4，x2表示待测液的支链淀粉浓度；
[0015](3)根据公式：淀粉组分质量/果肉鲜重＝(待测液的淀粉浓度
×
待测液体积)/果肉鲜重；
[0016]或，
[0017]根据公式：淀粉组分质量/淀粉质量＝(待测液的淀粉浓度
×
待测液体积)/干淀粉质量；
[0018]计算淀粉组分含量。
[0019]优选的，所述待测液通过以下方法制得：取南瓜淀粉10mg，加入1mL无水乙醇和
1mLNaOH，置于沸水浴中待其完全溶解后冷却，用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测南瓜直链淀粉和支链淀粉含量的方法，其特征在于(1)将待测液采用多功能微孔板检测仪检测，其中，直链淀粉测定波长λ1＝616nm，直链淀粉参比波长λ2＝472nm，支链淀粉测定波长λ3＝545nm，支链淀粉参比波长λ4＝725nm；(2)然后将检测结果分别带入直链淀粉的回归方程y1＝
‑
0.8163x1+0.0747和支链淀粉的回归方程y2＝0.35x2+0.0123；其中，y1表示待测液的吸光值λ2‑
λ1，x1表示淀待测液的直链淀粉浓度；y2表示待测液的吸光值λ3‑
λ4，x2表示待测液的支链淀粉浓度；(3)根据公式：淀粉组分质量/果肉鲜重＝(待测液的淀粉浓度
×
待测液体积)/果肉鲜重；或，根据公式：淀粉组分质量/淀粉质量＝(待测液的淀粉浓度
×
待测液体积)/干淀粉质量；计算淀粉组分含量。2.根据权利要求1所述的一种同时检测南瓜直链淀粉和支链淀粉含量的方法，其特征在于，所述待测液通过以下方法制得：首先，取南瓜淀粉10mg，加入1mL无水乙醇和1mLNaOH，置于沸水浴中待其完全溶解后冷却，用蒸...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋慧，安学君，沈登峰，
申请(专利权)人：宁波市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：