特异性结合分子制造技术

本发明专利技术涉及与来源于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)烯酰ACP还原酶的HLA

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性结合分子
[0001]本专利技术涉及与来源于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)烯酰ACP还原酶的HLA
‑
E限制性肽RLPAKAPLL(SEQ ID NO:1)结合的特异性结合分子。所述特异性结合分子可以包含嵌入框架序列内的CDR序列。CDR和框架序列可对应于T细胞受体(TCR)可变结构域，并且可以进一步包含相对于天然TCR可变结构域的非天然突变。本专利技术的特异性结合分子特别适合用作用于治疗感染性疾病的新型免疫治疗剂。

技术介绍

[0002]结核病(TB)仍是全世界感染致死的主要原因。针对结核分枝杆菌(Mtb)感染的免疫应答很复杂，并且该细菌已经进化出复杂的免疫逃避机制，使其成为一种难以用当前疗法治疗的病原体。因此，迫切需要新的治疗干预措施。
[0003]HLA
‑
E属于非经典MHC 1b类分子家族，已知其向NK细胞和T细胞呈递有限数量的肽(Braud等，Eur J Immunol 27,1164
‑
1169(1997)；Sullivan等，Tissue antigens 72,415
‑
424(2008))。在稳态条件下，HLA
‑
E可以将来自其他HLA分子的前导序列肽呈递给NK细胞作为免疫监视的方法，缺少前导序列呈递会导致NK细胞进行靶向杀伤。然而，在细胞应激后，如感染期间，HLA
‑
E也可以呈递多种病原体或自身衍生的肽，随后这些肽可以被特定的T细胞识别。HLA
‑<br/>E呈递的肽作为治疗靶点特别有吸引力，因为HLA
‑
E基因在人类中几乎是非多态性的，这提高了在整个人类群体中靶向这些感染的可能性，并避免了靶向高度多态性的经典HLA分子所固有的挑战。
[0004]CD8+T细胞靶向HLA
‑
E呈递的Mtb衍生肽，包括肽RLPAKAPLL，这已被描述并且已证明对Mtb或牛分枝杆菌感染的巨噬细胞具有细胞溶解活性(Caccamo等，Eur J Immunol 45,1069
‑
1081(2015)；Joosten等，PLoS Pathog 6,e1000782(2010)；Prezzemolo等，Eur J Immunol 48,293
‑
305(2018)；van Meijgaarden等，PLoS Pathog11,e1004671(2015))。

技术实现思路

[0005]在第一个方面中，本专利技术提供了一种特异性结合分子，其具有结合于与HLA
‑
E复合的RLPAKAPLL(SEQ ID NO:1)的特性。
[0006]本专利技术人发现，RLPAKAPLL HLA
‑
E为基于T细胞受体(TCR)的免疫治疗干预提供了理想的靶点，以解决慢性疾病。本专利技术首次提供了与RLPAKAPLL HLA
‑
E复合物结合的特异性结合分子，其包含TCR CDR和框架区。所述特异性结合分子对于治疗TB具有特别理想的治疗特性。
[0007]肽RLPAKAPLL对应于由inhA基因(有序基因座名称，Rv1484；Uniprot编号P9WGR1)编码的Mtb蛋白NADH依赖性烯酰基
‑
[酰基载体蛋白]还原酶[NADH]的氨基酸53
‑
61。与之复合的HLA
‑
E分子可以是HLA
‑
E*01:01或HLA
‑
E*01
‑
03。
[0008]本专利技术的特异性结合分子可以包含TCRα链可变结构域和/或TCRβ链可变结构域，所述TCRα链可变结构域和/或所述TCRβ链可变结构域各自包含FR1
‑
CDR1
‑
FR2
‑
CDR2
‑
FR3
‑
CDR3
‑
FR4，其中FR是框架区和CDR是互补性决定区。
[0009]特异性结合分子或其结合片段可以包含TCR可变结构域，其可对应于来自天然TCR的那些，或更优选TCR可变结构域可被工程化。天然TCR可变结构域也可以称为野生型、天然的、亲本、未突变或支架结构域。特异性结合分子或结合片段可用于产生具有理想治疗特性的分子，例如对靶标的超生理亲和力、长结合半衰期、对靶标的高特异性和良好的稳定性。本专利技术还包括整合了特异性结合分子或其结合片段和T细胞重定向部分的双特异性或双功能或融合分子。这些分子可以通过重定向和激活T细胞来介导针对TB感染细胞的有效和特异性应答。此外，使用具有超生理亲和力的特异性结合分子有助于识别和清除呈递低水平肽
‑
HLA的细菌感染细胞。或者，特异性结合分子或结合片段可以与其他治疗剂和/或诊断剂融合，和/或掺入工程化的T细胞中用于过继疗法。
[0010]TCR结构域序列可以参考IMGT命名法来定义，该命名法对于TCR领域的技术人员而言广为人知且可以获得。例如，参见：LeFranc和LeFranc,(2001).“T cell Receptor Factsbook”,Academic Press；Lefranc,(2011),Cold Spring Harb Protoc 2011(6):595
‑
603；Lefranc,(2001),Curr Protoc Immunol Appendix 1:Appendix 100；和Lefranc,(2003),Leukemia 17(1):260
‑
266。简而言之，αβTCR由两条以二硫键连接的链组成。通常认为每条链(α和β)具有两个结构域，即可变结构域和恒定结构域。短连接区连接可变结构域和恒定结构域，并且通常被认为是α可变区的一部分。另外，β链通常包含在连接区旁的短的多变区，该多变区通常也被认为是β可变区的一部分。每条链的可变结构域位于N端，并包含嵌入框架序列(FR)的三个互补性决定区(CDR)。CDR包含肽
‑
MHC结合的识别位点。存在若干个编码α链可变(Vα)区的基因和若干个编码β链可变(Vβ)区的基因，其区别在于它们的框架、CDR1和CDR2序列，以及部分定义的CDR3序列。在IMGT命名法中，Vα和Vβ基因分别用前缀TRAV和TRBV来表示(Folch和Lefranc,(2000),Exp Clin Immunogenet17(1):42
‑
54；Scaviner和Lefranc,(2000),Exp Clin Immunogenet 17(2):83
‑
96；LeFranc和LeFranc,(2001),“T cell Receptor Factsbook”,Academic Press)。同样地，α链和β链各有若干连接基因或J基因，分别被称为TRAJ或TRBJ，而β链有被称为TRBD的多变基因或D基因(Folch和Lefranc,(2000),本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种特异性结合分子，其具有结合于与HLA
‑
E复合的RLPAKAPLL(SEQ ID NO:1)的特性。2.根据权利要求1所述的特异性结合分子，其包含TCRα链可变结构域和/或TCRβ链可变结构域，所述TCRα链可变结构域和/或所述TCRβ链可变结构域各自包含FR1
‑
CDR1
‑
FR2
‑
CDR2
‑
FR3
‑
CDR3
‑
FR4，其中FR是框架区和CDR是互补性决定区。3.根据权利要求2所述的特异性结合分子，其中(a)所述α链CDR具有以下序列：CDR1
–
DSAIYN，CDR2
–
IQSSQRE，CDR3
–
CAVTNQAGTALIF，其中任选地具有一个或多个突变，和/或(b)所述β链CDR具有以下序列：CDR1
–
MNHEY，CDR2
–
SVGAGI，CDR3
–
CASSYSIRGSRGEQFF，其中任选地具有一个或多个突变。4.根据权利要求3所述的特异性结合分子，其中所述α链可变结构域框架区包含以下序列：FR1
–
SEQ ID NO:2的氨基酸1
‑
26，FR2
–
SEQ ID NO:2的氨基酸33
‑
49，FR3
–
SEQ ID NO:2的氨基酸57
‑
89，FR4
–
SEQ ID NO:2的氨基酸103
‑
112，或者与所述序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的相应序列，和/或所述β链可变结构域框架区包含以下序列：FR1
–
SEQ ID NO:3的氨基酸1
‑
26，FR2
–
SEQ ID NO:3的氨基酸32
‑
48，FR3
–
SEQ ID NO:3的氨基酸55
‑
90，FR4
–
SEQ ID NO:3的氨基酸107
‑
115，或者与所述序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的相应序列。5.根据权利要求3或权利要求4所述的特异性结合分子，其中在所述α链CDR中的所述突变的一个或多个选自：在残基26和27之间的PDG插入、S28Q、Q54K、N94G、Q95E、A96S、T98V、A99Y、L100W、I101V，参照SEQ ID NO:2的编号，和/或在所述β链CDR中的所述突变的一个或多个选自：N28K、Y31F、V50L、A52V、G53D、Q104L，参照SEQ ID NO:3的编号。6.根据权利要求3
‑
5中任一项所述的特异性结合分子，其中所述α链CDR1、CDR2和CDR3
序列选自：CDR1
ꢀꢀꢀ
PDGDQAIYN，或CDR2
ꢀꢀꢀ
IQSSKRECDR3
ꢀꢀꢀ
CAVTGESGVYWVF，和/或所述β链CDR1、CDR2和CDR3序列选自CDR1
ꢀꢀꢀ
MKHEFCDR2
ꢀꢀꢀ
SLGVDICDR3
ꢀꢀꢀ
CASSYSIRGSRGELFF。7.根据权利要求3
‑
6中任一项所述的特异性结合分子，其中在所述α链中，CDR1是PDGDQAIYN，CDR2是IQSSKRE和CDR3是CAVTGESGVYWVF，和在所述β链中，CDR1是MKHEF，CDR2是SLGVDI和CDR3是CASSYSIRGSRGELFF。8.根据前述任一项权利要求所述的特异性结合分子，其中所述α链可变结构域包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和所述β链可变结构域包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。9.根据权利要求2所述的特异性结合分子，其中(a)所述α链CDR具有以下序列：CDR1
–
DRGSQS，CDR2
–
IYSNGD，CDR3
–
CAVMDSSYKLIF，其中任选地具有一个或多个突变，和/或(b)所述β链CDR具有以下序列：CDR1
–
SEHNR，CDR2
–
FQNEAQ，CDR3
–
CASSLATNEQFF，其中任选地具有一个或多个突变。10.根据权利要求9所述的特异性结合分子，其中所述α链可变结构域框架区包含以下序列：FR1
–
SEQ ID NO:4的氨基酸1
‑
26FR2
–
SEQ ID NO:4的氨基酸33
‑
49FR3
–
SEQ ID NO:4的氨基酸56
‑
88FR4
–
SEQ ID NO:4的氨基酸101
‑
110，或者与所述序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的相应序列，和/或所述β链可变结构域框架区包含以下序列：FR1
–
SEQ ID NO:5的氨基酸1
‑
26FR2
–
SEQ ID NO:5的氨基酸32
‑
48FR3
–
SEQ ID NO:5的氨基酸55
‑
91FR4
–
SEQ ID NO:5的氨基酸104
‑
112，
或者与所述序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的相应序列。11.根据权利要求9或权利要求10所述的特异性结合分子，其中在所述α链CDR中的所述突变的一个或多个选自G29R、Q31R、S94R、S95E、K97E、L98I、I99S，参照SEQ ID NO:4的编号，和/或在所述β链CDR中的所述突变的一个或多个选自E28D、N51S、A97G、T98P、F102L，参照SEQ ID NO:5的编号。12.根据权利要求9
‑
11中任一项所述的特异性结合分子，其中所述α链CDR1、CDR2和CDR3序列选自：CDR1
ꢀꢀꢀ
...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：英美偌科有限公司，
类型：发明
国别省市：