一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法技术

本说明书提供一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，其中多肽为亲水性多肽，该方法包括：将所述多肽三氟乙酸盐溶解在水中得到多肽三氟乙酸盐的水溶液；将所述水溶液与有机碱混合得到中和的水溶液；在不溶于水的有机溶剂中加入所述中和的水溶液后进行搅拌并形成沉淀；以及分离所述沉淀得到产物。上述方法可简单、高效、低成本地对亲水性多肽的三氟乙酸盐进行除盐，适用于工业化生产。适用于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法
交叉引用
[0001]本申请要求2021年9月9日提交的中国申请202111058092.5的优先权，全部内容通过引用的方式整体并入本文。


[0002]本说明书涉及多肽纯化领域，特别涉及一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法。

技术介绍

[0003]多肽是由多个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物，是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，在医疗、卫生、保健、食品、化妆品等领域均有广泛应用。例如GHK(Glycyl
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L
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histidyl
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L
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lysine)、HLA
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G(KGPPAALTL)、HG1(KW LNALLHHGLNCAKGVLA)等亲水性多肽。其中，GHK是一种活性多肽，存在于人体的血液、唾液、尿液中，具有抗老、抗氧化、除皱的功能。GHK及其修饰后产物被广泛应用于功能性化妆品中，是重要的化妆品功能性活性物。HLA
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G是I类主要组织相容性复合体(MHC)的组成部分，可以结合不同抗原，从而将抗原呈递给免疫系统，激活免疫系统。HG1是一种抗菌肽，能够抑制皮肤伤口的细菌，如金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌。因此，研究多肽及其衍生物的合成有着重要的意义。
[0004]常用的亲水性多肽合成方法，需要先获得亲水性多肽三氟乙酸盐，再去除三氟乙酸得到亲水性多肽。为了使合成的亲水性多肽达到可以在人用产品中添加的标准，需要提供效率更高、经济性更好并且适于大规模工业生产的去除三氟乙酸的方法。

技术实现思路

[0005]本说明书实施例之一提供一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，其中，所述多肽为亲水性多肽，所述方法包括：将所述多肽三氟乙酸盐溶解在水中得到多肽三氟乙酸盐的水溶液；将所述水溶液与有机碱混合得到中和的水溶液；在不溶于水的有机溶剂中加入所述中和的水溶液后进行搅拌并形成沉淀；以及分离所述沉淀得到产物。
[0006]在一些实施例中，所述多肽包括GHK、AHK(L
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Alanyl
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L
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histidyl
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L
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lysine)、HLA
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G、HG1或八聚精氨酸(Octa
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arginine)。
[0007]在一些实施例中，所述水和所述多肽三氟乙酸盐的质量比为(0.1～10):1。
[0008]在一些实施例中，所述有机碱选自环己胺、丙胺、三乙胺、N,N
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二异丙基乙胺、苯胺、乙醇胺、二甲胺或二乙胺中的至少一种。
[0009]在一些实施例中，所述有机碱选自环己胺、丙胺或三乙胺中的至少一种。
[0010]在一些实施例中，所述有机碱和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1～5):1。
[0011]在一些实施例中，所述不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、正己烷、环戊基甲醚、乙醚或二氯甲烷中的至少一种。
[0012]在一些实施例中，所述不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、或二氯甲烷中的至少一种
[0013]在一些实施例中，所述有机溶剂与所述多肽三氟乙酸盐的体积
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质量比为(10～50)mL:1g。
[0014]在一些实施例中，所述有机碱为环己胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述环己胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。
[0015]在一些实施例中，所述有机碱为丙胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述丙胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。
[0016]在一些实施例中，所述有机碱为三乙胺，有机溶剂为乙酸乙酯，所述三乙胺和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1.5～5):1。
[0017]在一些实施例中，还包括对分离的沉淀进行至少一次纯化的步骤。
[0018]在一些实施例中，所述纯化步骤包括：将所述分离的沉淀与所述有机溶剂混合，将混合的溶液进行离心得到离心后的沉淀，对所述离心后的沉淀进行干燥。
[0019]在一些实施例中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或二氯甲烷中的至少一种。
[0020]在一些实施例中，还包括对产物中的三氟乙酸含量进行测定。
[0021]在一些实施例中，所述产物中三氟乙酸的含量降低为所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的初始含量的3.4～39％。
[0022]本说明书实施例之一还提供了用上述方法获得的亲水性多肽在制备化妆品组合物或药物组合物中的用途。
具体实施方式
[0023]如本说明书和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。
[0024]在含有多个官能团化合物的合成时，需要选择性地在某一个反应点上进行化学反应，另外的官能团需要被屏蔽起来。因此，在多肽的化学合成中，氨基酸的α
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氨基、侧链活性基团等官能团的保护和脱保护至关重要。多肽的化学合成以保护氨基酸为原料合成肽链。保护氨基酸的常用保护基团，如叔丁氧羰基(Boc)、三苯甲基(Trt)、乙酰基(Ac)等，可在三氟乙酸(TFA)介质中脱除并形成多肽的三氟乙酸盐。由于三氟乙酸属于酸性有机溶剂，对细胞具有毒性，需要在多肽合成的后处理中进行转盐或脱盐。
[0025]本说明书提供了一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，可通过对多肽三氟乙酸盐的水溶液进行中和、沉淀及沉淀分离，生成除盐的亲水性多肽。在一些实施例中，降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法至少包括以下步骤Ⅰ至步骤Ⅳ。
[0026]在步骤Ⅰ中，可将所述多肽三氟乙酸盐溶解在水中得到多肽三氟乙酸盐的水溶液。
[0027]在一些实施例中，多肽为亲水性多肽。具体的，上述方法可适用于多肽序列中亲水氨基酸所占比例大于50％且可溶于水的多肽。其中，所述亲水氨基酸包括但不限于赖氨酸、精氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸等。例如，亲水性多肽可以包括GHK、AHK、HLA
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G、HG1、八聚
精氨酸、五胜肽(Pentapeptide
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3)、肌肽(L
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Carnosine)等。在一些实施例中，多肽为GHK、AHK、HLA
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G、HG1或八聚精氨酸。在一些实施例中，多肽为GHK、HLA
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G或HG1。
[0028]在一些实施例中，可以通过液相合成法制备多肽三氟乙酸盐。液相合成法可首先将一个氨基酸的羧基和另一个氨基酸的氨基被保护基团封闭，然后参与肽键形成的羧基被激活，激活的羧酸受到游离氨基的亲电攻击形成一个封闭的二肽，最后通过水解有选择地除去保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降低多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸含量的方法，其中，所述多肽为亲水性多肽，其特征在于，所述方法包括：将所述多肽三氟乙酸盐溶解在水中得到多肽三氟乙酸盐的水溶液；将所述水溶液与有机碱混合得到中和的水溶液；在不溶于水的有机溶剂中加入所述中和的水溶液后进行搅拌并形成沉淀；以及分离所述沉淀得到产物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽选自GHK、AHK、HLA
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G、HG1或八聚精氨酸。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水和所述多肽三氟乙酸盐的质量比为(0.1～10):1。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机碱选自环己胺、丙胺、三乙胺、N,N
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二异丙基乙胺、苯胺、乙醇胺、二甲胺或二乙胺中的至少一种。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述有机碱选自环己胺、丙胺、或三乙胺中的至少一种。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述有机碱和所述多肽三氟乙酸盐中三氟乙酸的摩尔比为(1～5):1。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、正己烷、环戊基甲醚、乙醚或二氯甲烷中的至少一种。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述不溶于水的有机溶剂选自乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或二氯甲烷中的至少一种。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂与所述多肽三氟乙酸盐的体积
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【专利技术属性】
技术研发人员：王卫国，王克全，
申请(专利权)人：江苏金斯瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：