一株地衣芽孢杆菌SCAU1602及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)SCAU1602及其应用。该菌株于2022年5月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，菌株保藏编号为CCTCC NO：M 2022712，其16S rRNA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。本发明专利技术提供的地衣芽孢杆菌SCAU1602具有耐高温特性，可在28～70℃生长，最适温度范围45～60℃；同时该菌株在堆肥处理中具有良好的抑制氨气产生能力。在鸡粪高温堆肥中接种该菌剂，可有效降低鸡粪堆肥处理的氨气逸失，减少堆肥臭气产生，从而提升鸡粪堆肥品质，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株地衣芽孢杆菌SCAU1602及其应用


[0001]本专利技术涉及农业微生物领域，具体涉及一株地衣芽孢杆菌SCAU1602及其应用。

技术介绍

[0002]随着我国家禽养殖业的发展，养殖场规模化、集约化水平不断提升，家禽养殖粪便产量急剧增加，据统计，我国仅蛋鸡养殖的粪便产生量每天约14万吨，若处理不当会带来严重的污染环境，制约蛋鸡产业的可持续发展。鸡粪营养价值高，含有大量未被消化吸收的营养物质，是农业生产的重要肥料资源。然而，鸡粪成分复杂，堆放过程中常常产生硫化氢、氨气、胺类和一些低级脂肪酸类等恶臭气味化学物质。其中，浓度最高、危害最大的是氨气，既对家禽上呼吸道产生腐蚀和刺激作用，引发多种呼吸道疾病及氨中毒，影响机体健康和生长性能；同时，氨气扩散后与大气中水分结合，进入土壤会导致土壤酸化，进入水体则引起水体富营养化。
[0003]好氧堆肥是鸡粪无害化处理的有效处理途径，可转化为优质有机肥，具有成本低、操作简单的优点。鸡粪堆肥过程中会产生大量氨气，抑制氨气产生的方法很多，包括堆肥过程中采取物理或化学方法控制、接种除臭微生物等措施。研究表明，好氧堆肥接种高效除臭菌剂，利用除臭菌的代谢作用，可有效减少臭味产生，降低氮素损失，在堆肥生产中具有重要的现实意义。
[0004]地衣芽孢杆菌是公认的安全菌株，分布于动物肠道、堆肥制品和土壤环境，部分菌株具备益生菌效果。作为益生菌可促使宿主机体产生抗菌活性物质，具有改善肠道菌群平衡、保护动物回肠黏膜，提高机体的免疫功能，加之其具有独特的生物夺氧机制，可有效抑制病原菌生长繁殖；同时，地衣芽孢杆菌具有较强的产酶能力，促进肠道营养物质消化和吸收，可有效提高饲料利用率。
[0005]尽管地衣芽孢杆菌已普遍用作动物益生菌，亦作为畜禽粪便堆肥处理接种剂，但尚未见筛选兼具耐高温和除臭保氮效果的地衣芽孢杆菌应用于畜禽粪便堆肥处理、减少氨气产生的相关报道。因此筛选耐高温、抑制氨气产生和除臭能力强的地衣芽孢杆菌，应用于畜禽粪便高温堆肥处理，减少氨氮逸失和臭气产生，减轻空气污染，具有积极的现实意义。

技术实现思路

[0006]为达到上述目的，本专利技术提供了一株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)SCAU1602及其应用，旨在解决堆肥过程中的氨气逸失以及堆肥除臭等问题，提升堆肥品质，具有广阔的应用前景。
[0007]本专利技术提供了一株地衣芽孢杆菌SCAU1602，该菌株已于2022年5月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2022712。
[0008]优选地，该菌株的生长pH范围为5.0～10.0，生长温度范围为28～70℃，尤其在45～60℃温度范围内长势较好。
[0009]本专利技术提供的地衣芽孢杆菌SCAU1602可应用于制备生物菌剂。
[0010]本专利技术还提供了一种由上述地衣芽孢杆菌SCAU1602所制备的生物菌剂，尤其可用于制备液体生物菌剂。
[0011]优选地，上述液体生物菌剂中的活菌数不少于1.0*109CFU/mL。
[0012]本专利技术提供的上述生物菌剂可应用于堆肥，尤其可用于鸡粪堆肥处理，能有效降低鸡粪发酵时氨气的产生量，提高堆肥的氮含量。
[0013]本专利技术提供的上述生物菌剂可应用于其他畜禽粪便原料的堆肥处理，还可应用于含蛋白质原料的发酵或堆肥中，可起到抑氨除臭保氮的作用。
[0014]本专利技术提供的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)SCAU1602及其应用，可减少堆肥过程中的氨气产生及逸失，从而解决堆肥除臭问题，具有以下优点：
[0015]菌株SCAU1602生长温度范围较宽，具有良好的耐高温特性，由该菌制备的生物菌剂可用于堆肥处理，发挥其抑氨除臭保氮功能，可有效提升堆肥品质，具有较为广阔的应用前景。
附图说明
[0016]图1为本专利技术中地衣芽孢杆菌SCAU1602在牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落形态。
[0017]图2为本专利技术中地衣芽孢杆菌SCAU1602在电镜形态。
[0018]图3为本专利技术中地衣芽孢杆菌SCAU1602的16S rRNA基因序列的系统发育图。
具体实施方式
[0019]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]说明：下述实验例中所用的材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0021]实验例1菌株的分离、纯化和保存。
[0022]样品采集：从养鸡场采集鸡粪样品，装入无菌采样袋，带回实验室低温保存。
[0023]培养基制备：牛肉膏蛋白胨配方为牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂20g，水1000mL，调节pH至7.0～7.2。
[0024]菌株分离纯化：称取10g鸡粪样品，转入带有玻璃珠且装有90mL无菌水的三角瓶中，放于50℃恒温摇床180r/min振荡30min后，在无菌水中进行10倍梯度稀释，制备稀释菌悬液至10
‑6后，各取100μL稀释度为10
‑4、10
‑5和10
‑6的菌悬液涂布到牛肉膏蛋白胨培养基平板，置于50℃恒温培养48h，挑取单菌落进行分离纯化。
[0025]除臭菌筛选：将纯化的细菌菌株分别接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，50℃培养36h，离心、取上清液，用纳氏试剂检测菌株产氨气情况，无橙色沉淀出现为阴性，说明菌株不产氨气；有橙色沉淀出现为阳性，表明菌株产氨气。
[0026]从采集的样品中分离得到57株细菌，并最终筛选获得1株不产氨气的耐高温细菌菌株，编号为SCAU1602。
[0027]如图1所示，为本实施例的分离纯化得到的菌株SCAU1602在牛肉膏蛋白胨培养基平板上50℃培养24h，菌落形态为圆形、扁平、乳白色、不透明，菌落表面初期光滑、后期褶皱，边缘不整齐，直径为1.5～2.5mm。菌体电镜形态如图2所示，为短杆状，产芽孢，有鞭毛，无荚膜，革兰氏染色鉴定结果为阳性。
[0028]实验例2菌株的鉴定及系统发育分析
[0029]本专利技术采用Chelex 100裂解液法提取细菌DNA，取100μL 5％Chelex 100溶液于PCR管中，从试管斜面上挑取少许菌体，与裂解液充分混匀后在PCR仪上进行程序裂解，反应程序为：99℃10min。随后4℃下12000r/min离心10min，上清液即为供试菌株DNA。
[0030]以上述所得的细菌基因组DNA为模板，以如下所示的通用引物为PCR引物，扩增体系为：模板DNA 1.5μL，27f(10μM)0.15μL，1492r(10μM)0.15μL，2
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株地衣芽孢杆菌SCAU1602，其特征在于，该菌株已于2022年5月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2022712。2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌SCAU1602，其特征在于，所述菌株的生长温度范围为28～70℃。3.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌SCAU1602，其特征在于，所述菌株的生长pH范围为5.0～10.0。4.如权利要求1～3中任意一项所述的地衣芽孢杆菌SCAU1602在制备生物菌剂中的应用。5.一种生物菌剂，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈强，王祖昱，余金阳，刘轶豪，蔡金桥，余秀梅，辜运富，张凌子，赵珂，马孟根，林春雪，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：