一种IKBKG基因第4-10外显子缺失的引物探针组对及其制备的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域。本发明专利技术提供了一种IKBKG基因第4

【技术实现步骤摘要】
一种IKBKG基因第4
‑
10外显子缺失的引物探针组对及其制备的试剂盒


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种IKBKG基因第4
‑
10外显子缺失的引物探针组及其制备的试剂盒。

技术介绍

[0002]色素失禁症(incontinentia pigmenti，IP)也称Bloch
‑
Sulzberger综合征，是一种罕见的X染色体连锁显性遗传病，多在婴儿期甚至新生儿期发病，在新生儿中的发病率0.007
‰
。色素失禁症患者中，约75％是由IKBKG基因(也叫做NEMO基因)的新发突变引起，10
‑
25％的患者是由母亲遗传所引起。色素失禁症的男性胎儿多死亡，女性新生儿主要表现为肢端的水疱性皮疹，沿着Blaschko线迅速呈线状生长。视网膜和中央神经系统损伤比皮肤损伤少见，但可能更严重，且可遗留终生后遗症。
[0003]IKBKG基因位于Xq28，包含10个外显子，编码415个氨基酸。IKBKG基因基因下游35.5kb的重复区域中存在一个高度同源的假基因IKBKGP1(也叫做ΔNEOM基因)，序列排列方向与IKBKG基因相反。在已发现的导致色素失禁症的基因突变中，90％是由于IKBKG基因内4
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10外显子缺失突变引起的，而序列在IKBKGP1基因中同时存在，检测IKBKG突变必须排除IKBKGP1基因的影响。
[0004]目前较为常见进行IKBKG基因检测4
‑
10外显子缺失的方法是：使用LongPCR扩增方法鉴别缺失，使用In2(5
’‑
GAGGACCAATACCGAGCATC
‑3’
)和JF3R(5
’‑
CTCGGAGACACAGGAACCAGCA
‑3’
)扩增。而后使用琼脂糖凝胶电泳的方法进行检测，当在2.6K区域出现电泳条带的时候表明IKBKG基因存在4
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10外显子缺失。longPCR法由于在PCR扩增结束后需开盖进行后续电泳，同样存在操作繁琐、容易污染等问题，且使用该流程耗费时间较长，每次需要约4
‑
5小时。因此使用longPCR法不适用于大样本筛查的需求。
[0005]荧光定量PCR技术近年来在分子生物学领域的应用越来越广泛，其基本原理是利用Taq酶的5
’‑3’
外切酶核酸活性，在普通PCR基础上设计荧光双标记探针，两端分别标记荧光报告基团(R)和淬灭基团(Q)；探针保持完整时R基团的荧光信号被Q基团抑制，一旦探针被切断，Q基团的抑制作用消失，R基团的荧光信号就可被检测到。该技术通过对荧光信号的检测实现对PCR过程中产物量的实时监测，除具有定量准确、检测快速等优点外，最大的优势是采用完全闭管检测，省去了对PCR产物的后处理，避免了交叉污染。而且，随着材料和仪器的进一步发展，通过在荧光探针的5
’
端标记不同的荧光染料(FAM、HEX、ROX等)及多通道荧光定量PCR仪，可以实现基因分型、基因突变检测、SNP分析等研究。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供种IKBKG基因第4
‑
10外显子缺失的引物探针组及其制备的试剂盒，提高检测效率和准确性，适应大样本筛查的需求。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种IKBKG基因第4
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10外显子缺失的引物探针组，包括IKBKG上游扩增引物、IKBKG下游扩增引物和IKBKG荧光探针；
[0009]所述IKBKG上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0010]所述IKBKG下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0011]所述IKBKG荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0012]本专利技术还提供了所述的引物探针组在制备检测IKBKG基因第4
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10外显子缺失的试剂盒中的应用。
[0013]本专利技术还提供了一种检测IKBKG基因第4
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10外显子缺失的试剂盒，其特征在于，包括如下组分：定量PCR反应液、Primer预混液、阳性对照品和阴性对照品。
[0014]作为优选，所述定量PCR反应液包括如下组分：UNG酶、PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、耐热DNA聚合酶。
[0015]作为优选，所述Primer预混液包括如下组分：IKBKG上游扩增引物、IKBKG下游扩增引物、IKBKG荧光探针、内参上游扩增引物、内参下游扩增引物和内参荧光探针；
[0016]所述内参上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
[0017]所述内参下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；
[0018]所述内参荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0019]作为优选，所述Primer预混液中上游扩增引物、下游扩增引物和探针的摩尔比为0.9～1.1：0.9～1.1：0.9～1.1。
[0020]作为优选，所述阳性对照品为IKBKG基因4
‑
10外显子缺失的DNA样本，所述阳性对照品的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0021]作为优选，所述阴性对照品为正常DNA样本。
[0022]本专利技术提供了一种IKBKG基因第4
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10外显子缺失的引物探针组及其制备的试剂盒，所述引物探针组包括IKBKG上游扩增引物、IKBKG下游扩增引物和IKBKG荧光探针；所述IKBKG上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述IKBKG下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述IKBKG荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本专利技术的引物探针组灵敏度高、特异性好。采用本专利技术的引物探针组制备的试剂盒进行检测，检测方法简便快捷，重复性好，特别是由于减少了开盖进行后续电泳过程，防止了污染，同时适用于大样本筛查的需求。
附图说明
[0023]图1为IKBKG基因结构、IKBKG基因与IKBKG1基因的重复区域、常见4
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10外显子区域的示意图；
[0024]图2为KBKG基因4
‑
10外显子缺失LongPCR检测电泳图；
[0025]图3为第一天IKBKG基因曲线图；
[0026]图4为第一天内参基因曲线图；
[0027]图5为第二天IKBKG基因曲线图；
[0028]图6为第二天内参基因曲线图；
[0029]图7为第三天IKBKG基因曲线图；
[0030]图8为第三天内参基因曲线图；
[0031]图9为第四天IKBKG基因曲线图；
[0032]图10为第四天内参基因曲线图；
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种IKBKG基因第4
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10外显子缺失的引物探针组，其特征在于，包括IKBKG上游扩增引物、IKBKG下游扩增引物和IKBKG荧光探针；所述IKBKG上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述IKBKG下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述IKBKG荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.权利要求1所述的引物探针组在制备检测IKBKG基因第4
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10外显子缺失的试剂盒中的应用。3.一种含有权利要求1中引物探针组的检测IKBKG基因第4
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10外显子缺失的试剂盒，其特征在于，包括如下组分：定量PCR反应液、Primer预混液、阳性对照品和阴性对照品。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述定量PCR反应液包括如下组分：UNG酶、PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、耐热DNA聚合酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：范嘉庚，李兴盛，吴志强，马赛勇，刘丹哪，
申请(专利权)人：杭州祥音医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：