一种1,5-脱水-D-山梨醇测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物医学检测技术领域，公开了一种1,5

【技术实现步骤摘要】
一种1,5
‑
脱水
‑
D
‑
山梨醇测定试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物医学检测
，具体涉及一种1,5
‑
脱水
‑
D
‑
山梨醇测定试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]近年来，糖尿病的发病率急剧增长，已经成为威胁人类健康的主要疾病之一，引起了人们的极大关注。糖尿病作为一种慢性高发性疾病，早预防、早诊断、早治疗尤为重要，然而，作为目前临床上广泛使用诊断糖尿病的标准—口服葡萄糖耐量试验操作繁琐，患者依从性较差；而空腹血糖和糖化血红蛋白容易遗检早期糖尿病患者。所以，需要继续寻找更加敏感、更加特异的诊断指标，作为筛查早期糖尿病及其监控血糖波动水平。l,5
‑
脱水
‑
D
‑
山梨醇(l,5
‑
AG)是存在于人体血液中主要的多元醇糖物质之一，由于其代谢稳定，在含量波动范围小，可及时反映糖尿病患者的糖代谢情况，具有空腹血糖、果糖胺和糖化血红蛋白所不具备的特征，在糖尿病的早期诊断和治疗中有很高的临床价值。
[0003]专利CN 107907534A公开了一种用于1,5
‑
脱水
‑
D
‑
山梨醇检测显色试剂，其组成为N
‑
(羧甲基氨基羰基)
‑
4,4
’‑
双(二甲胺基)二苯胺钠盐(简称DA
‑
64)和18
‑
冠醚
‑
6(CAS:17455
‑
13
‑
9)。通过在DA
‑
64水溶液中添加18
‑
冠醚
‑
6，使DA
‑
64与所添加的18冠醚
‑
6形成复合物体系，增加了DA
‑
64分子在溶液中的稳定性，从而获得具有长期稳定Trinder反应显色试剂。但冠醚有一定的毒性，必须避免吸入其蒸气或与皮肤接触，存在一定危害。
[0004]CN 107703071 B公开了一种检测1,5
‑
AG的试剂盒，通过选择适宜的试剂R1和试剂R2，采用HK+G6PD法+乳酸脱氢酶法有效地消除了1,5
‑
AG样品中的内源性葡萄糖，然后利用氧化酶
‑
紫外分光光度法检测人体血清中1,5
‑
AG的含量。该试剂盒能够有效消除1～20mM内源性葡萄糖的干扰。但该试剂盒为保证试剂的稳定性需加入较高含量的保护剂及防腐剂。

技术实现思路

[0005]针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本专利技术的首要目的在于提供一种1,5
‑
脱水
‑
D
‑
山梨醇测定试剂盒。
[0006]本专利技术的另一目的在于提供上述1,5
‑
脱水
‑
D
‑
山梨醇测定试剂盒的制备方法。
[0007]本专利技术目的通过以下技术方案实现：
[0008]一种1,5
‑
脱水
‑
D
‑
山梨醇测定试剂盒，由R1试剂和R2试剂组成，其中R1试剂由己糖激酶、三磷酸腺苷(ATP)、丙酮酸激酶、磷酸烯醇丙酮酸(PEP)、抗坏血酸氧化酶、4
‑
氨基安替比林(4
‑
AAP)、脂肽和三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液组成；R2试剂由过氧化物酶、吡喃糖氧化酶、羟基甲苯磺酰碘苯、表面活性剂和磷酸盐(PBS)缓冲液组成。
[0009]进一步地，所述R1试剂中各组分含量如下：
[0010]己糖激酶3～25kU/L；
[0011]ATP 0.5～2mmol/L；
[0012]丙酮酸激酶2～15kU/L；
[0013]PEP 2～5mmol/L；
[0014]抗坏血酸氧化酶5～25kU/L；
[0015]4‑
AAP 0.5～2.5mmol/L；
[0016]脂肽0.1～10g/L；
[0017]Tris缓冲液10～100mmol/L。
[0018]进一步地，所述R2试剂中各组分含量如下：
[0019]过氧化物酶5～15kU/L；
[0020]吡喃糖氧化酶60～100kU/L；
[0021]羟基甲苯磺酰碘苯3～6mmol/L；
[0022]表面活性剂0.5～3g/L；
[0023]PBS缓冲液50～250mmol/L。
[0024]进一步优选地，所述脂肽为环状脂肽。
[0025]更优选地，所述脂肽为绿针假单胞菌脂肽或枯草菌脂肽。其结构分别如下：
[0026]绿针假单胞菌脂肽；
[0027]枯草菌脂肽。
[0028]本专利技术所采用的脂肽分子中具有由多个氨基酸组成的肽链形成的亲水基和脂肪经链形成的亲油基，其具有较强的表面活性，且具有相比其它合成表面活性剂更好的生物相容性，因而具有更好的稳定作用。同时脂肽还具有一定的抗菌活性，可达到抗菌防腐及进一步提高稳定性的作用。另外环状脂肽对部分重金属离子具有极强的结合作用，其在本专利技术中可与血红蛋白中的铁离子作用形成稳定的结合物，提高检测试剂盒的抗干扰作用。
[0029]进一步地，所述R2试剂中过氧化物酶选自辣根过氧化物酶。
[0030]进一步地，所述R2试剂中表面活性剂选自吐温
‑
20、绿针假单胞菌脂肽或枯草菌脂肽；更优选为枯草菌脂肽。所述枯草菌脂肽对羟基甲苯磺酰碘苯具有较强的稳定作用，且对其显色效果无明显不良影响。
[0031]本专利技术试剂盒的检验原理为：
[0032][0033][0034][0035][0036]吡喃糖氧化酶、己糖激酶和三磷酸腺苷重生系统可检测血清1,5
‑
脱水山梨醇的浓度变化。己糖激酶和ATP重生系统可有效的将葡萄糖转化为不与吡喃糖氧化酶反应的化合物葡萄糖
‑6‑
磷酸，使用这种方法可选择性的针对1,5
‑
脱水山梨醇的变化。吡喃糖氧化酶氧化1,5
‑
脱水山梨醇生成的过氧化氢可通过TRINDER反应进行检测。
[0037]上述1,5
‑
脱水
‑
D
‑
山梨醇测定试剂盒的制备方法，包括如下制备步骤：
[0038](1)配制R1试剂：取设定量的水，依次加入Tris缓冲液、己糖激酶、ATP、丙酮酸激酶、PEP、抗坏血酸氧化酶、4
‑
AAP和脂肽搅拌溶解均匀，调节PH值至7.0～9.0，即得R1试剂；
[0039](2)配制R2试剂：取设定量的水，依次加入PBS缓冲液、过氧化物酶、吡喃糖氧化酶、羟基甲苯磺酰碘苯和表面活性剂搅拌溶解均匀，调节PH值至7.0～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种1,5
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脱水
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D
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山梨醇测定试剂盒，其特征在于，由R1试剂和R2试剂组成，其中R1试剂由己糖激酶、ATP、丙酮酸激酶、PEP、抗坏血酸氧化酶、4
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AAP、脂肽和Tris缓冲液组成；R2试剂由过氧化物酶、吡喃糖氧化酶、羟基甲苯磺酰碘苯、表面活性剂和PBS缓冲液组成。2.根据权利要求1所述的一种1,5
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脱水
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D
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山梨醇测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中各组分含量如下：己糖激酶3～25kU/L；ATP0.5～2mmol/L；丙酮酸激酶2～15kU/L；PEP2～5mmol/L；抗坏血酸氧化酶5～25kU/L；4
‑
AAP0.5～2.5mmol/L；脂肽0.1～10g/L；Tris缓冲液10～100mmol/L。3.根据权利要求1所述的一种1,5
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脱水
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D
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山梨醇测定试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中各组分含量如下：过氧化物酶5～15kU/L；吡喃糖氧化酶60～100kU/L；羟基甲苯磺酰碘苯3～6mmol/L；表面活性剂0.5～3g/L；PBS缓冲液50～250mmol/L。4.根据权利要求2或3所述的一种1,5
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脱水
‑
D
‑
山梨醇测定试剂盒，其特征在于，所述脂肽为环状脂肽。5.根据权利要求4所述的一种1,5
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脱水
‑
D
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖华，钟铃，周鹏程，
申请(专利权)人：广东优尼德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：