肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱技术

本发明专利技术提供了肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，包括以下步骤：供试样品溶液的制备；对照品溶液的制备；指纹图谱的建立；标准指纹图谱的确认，分别对多批次肾炎康复片建立指纹图谱，将多批次肾炎康复片的指纹图谱导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱评价系统”2012版软件中，生成标准指纹图谱，所述标准指纹图谱具有20个共有峰。本发明专利技术所述的肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱能够全面的反映肾炎康复片的特性，具有良好的专属性，为保证用药安全、稳定和质量可控提供参考依据，可实现对肾炎康复片制剂的质量监控，有效的控制了肾炎康复片的质量，保证了药物的疗效，促进中医药的继承和发展。展。展。

【技术实现步骤摘要】
肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱


[0001]本专利技术属于药物检测
，尤其是涉及肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。

技术介绍

[0002]天津同仁堂集团股份有限公司重点产品肾炎康复片来源于著名中医专家赵恩俭多年治疗慢性肾炎疾病临床经验之精华，收录于《中华人民共和国药典》2020年版一部。
[0003]该药由西洋参、人参、地黄、盐杜仲、山药、白花蛇舌草、黑豆、土茯苓、益母草、丹参、泽泻、白茅根、桔梗十三味中药组成，具有益气养阴，补肾健脾，清解余毒的功效，用于气阴两虚，脾肾不足，水湿内停所致的水肿，症见神疲乏力，腰酸腿软，面目、四肢浮肿，头晕耳鸣；慢性肾炎、蛋白尿、血尿见上述症候者。
[0004]中药制剂包含很多化学成分。这些化学组分产生整体的治疗效果，是重要评价的主要指标。单一的成分，并不能够真正反映出中药制剂品质的实际水平。中国药典2020版只对丹参中的丹参中丹参酮ⅡA、益母草中的盐酸水苏碱、桔梗薄层人参和西洋参中Rb1、Re、Rg、拟F11薄层鉴别和丹参中丹参酮ⅡA含量，但由于肾炎康复片药物组成众多，仅仅检测这5种药材难以全面、准确反映改制剂的疗效和整体质量。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术旨在提出肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，以全面的反映肾炎康复片的特性，具有良好的专属性，有助于控制肾炎康复片的质量，确保临床疗效。
[0006]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0007]肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
[0008]S1、供试样品溶液的制备：取肾炎康复片去除包衣，粉碎，加入甲醇，水浴回流，过滤，得到供试样品溶液；
[0009]S2、对照品溶液的制备：分别称取定丹参酮ⅡA、人参皂苷Rb1、盐酸益母草碱、丹酚酸B、落新妇苷、大豆苷、松脂醇二葡萄糖苷、对香豆酸、迷迭香酸对照品，加入甲醇，制得对照品溶液；
[0010]S3、指纹图谱的建立：分别吸取供试样品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪进行测定，即得供试样品的指纹图谱；
[0011]S4、标准指纹图谱的确认：按照上述方法分别对多批次肾炎康复片建立指纹图谱，将多批次肾炎康复片的指纹图谱导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱评价系统”2012版软件中，生成标准指纹图谱，所述标准指纹图谱具有20个共有峰。
[0012]进一步地，述对照品溶液中定丹参酮ⅡA、人参皂苷Rb1、盐酸益母草碱、丹酚酸B、落新妇苷、大豆苷、松脂醇二葡萄糖苷、对香豆酸、迷迭香酸的浓度为2
‑
30μg/ml；优选地，对照品溶液中丹参酮ⅡA浓度为8μg/ml、人参皂苷Rb1浓度为20μg/ml、盐酸益母草碱浓度为5μ
g/ml、丹酚酸B浓度为5μg/ml、落新妇苷浓度为5μg/ml、大豆苷浓度为10μg/ml、松脂醇二葡萄糖苷浓度为20μg/ml、对香豆酸浓度为5μg/ml、迷迭香酸浓度为10μg/ml。
[0013]进一步地，步骤S3中的测定条件为：色谱柱：Agilent Technologies ZORBAX SB
‑
C18；4.6
×
250mm，3.5μm，流速：0.6ml/min，流动相：其中A：0.1
‑
0.2％磷酸溶液,B：乙腈，柱温：20℃
‑
35℃，进样体积6μl，分析时间：188min，扫描波长：203
‑
360nm。
[0014]进一步地，0
‑
10min，A：B体积比98:2；10
‑
18min，A：B体积比98:2
‑
87:13；18
‑
58min，A：B体积比87:13
‑
86:14；58
‑
68min，A：B体积比86:14
‑
83:17；68
‑
88min，A：B体积比83:17
‑
80:20；88
‑
123min，A：B体积比80:20
‑
79:21；123
‑
155min，A：B体积比79:21
‑
49:51；155
‑
165min，A：B体积比49:51
‑
19:81；165
‑
188min，A：B体积比19:81
‑
9:91。
[0015]进一步地，0
‑
37.5min，扫描波长为360nm；37.5
‑
52.5min，扫描波长改为203nm；52.5
‑
71min，扫描波长改为330nm；71
‑
83min，扫描波长改为270nm；83
‑
110min，扫描波长改为210nm；110
‑
143min，扫描波长改为275nm；143
‑
146.5min，扫描波长改为203nm；146.5
‑
183min，扫描波长改为275nm；183
‑
188min，扫描波长改为203nm。
[0016]进一步地，0
‑
55min柱温：20℃，55
‑
188min柱温：35℃。
[0017]进一步地，还包括以下步骤：
[0018]根据肾炎康复片处方制备单味药材溶液及单味或多味药材阴性对照处方样品溶液，吸取单味药材溶液、单味或多味药材阴性对照处方样品溶液及步骤S2中的对照品溶液注入液相色谱仪进行测定，建立单味药材溶液及单味或多味药材阴性对照处方样品溶液的指纹图谱，并与20个共有峰进行比较，确定指纹峰归属。
[0019]进一步地，指纹峰1、3、7、9、10、11、12来自土茯苓，指纹峰2来自盐杜仲，指纹峰4、8来自黑豆，指纹峰5来自益母草，指纹峰6来自白花蛇舌草和白茅根，指纹峰13、14、15、17、18、19、20来自丹参，指纹峰16来自人参和西洋参。
[0020]根据上述任一所述的建立方法建立的标准指纹图谱，各共有峰的相对保留时间为：1号峰0.329
±
0.020、2号峰0.357
±
0.020、3号峰0.361
±
0.020、4号峰0.395
±
0.020、5号峰0.409
±
0.020、6号峰0.460
±
0.020、7号峰0.615
±
0.020、8号峰0.637
±
0.010、9号峰0.643
±
0.010、10号峰0.709
±
0.010、11号峰0.727
±
0.010、12号峰0.750
±
0.010、13号峰0.817...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、供试样品溶液的制备：取肾炎康复片去除包衣，粉碎，加入甲醇，水浴回流，过滤，得到供试样品溶液；S2、对照品溶液的制备：分别称取定丹参酮ⅡA、人参皂苷Rb1、盐酸益母草碱、丹酚酸B、落新妇苷、大豆苷、松脂醇二葡萄糖苷、对香豆酸、迷迭香酸对照品，加入甲醇，制得对照品溶液；S3、指纹图谱的建立：分别吸取供试样品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪进行测定，即得供试样品的指纹图谱；S4、标准指纹图谱的确认：按照上述方法分别对多批次肾炎康复片建立指纹图谱，将多批次肾炎康复片的指纹图谱导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱评价系统”2012版软件中，生成标准指纹图谱，所述标准指纹图谱具有20个共有峰。2.根据权利要求1所述的肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述对照品溶液中定丹参酮ⅡA、人参皂苷Rb1、盐酸益母草碱、丹酚酸B、落新妇苷、大豆苷、松脂醇二葡萄糖苷、对香豆酸、迷迭香酸的浓度为2
‑
30μg/ml；优选地，对照品溶液中丹参酮ⅡA浓度为8μg/ml、人参皂苷Rb1浓度为20μg/ml、盐酸益母草碱浓度为5μg/ml、丹酚酸B浓度为5μg/ml、落新妇苷浓度为5μg/ml、大豆苷浓度为10μg/ml、松脂醇二葡萄糖苷浓度为20μg/ml、对香豆酸浓度为5μg/ml、迷迭香酸浓度为10μg/ml。3.根据权利要求1所述的肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤S3中的测定条件为：色谱柱：Agilent Technologies ZORBAX SB
‑
C18；4.6
×
250mm，3.5μm，流速：0.6ml/min，流动相：其中A：0.1
‑
0.2％磷酸溶液,B：乙腈，柱温：20℃
‑
35℃，进样体积6μl，分析时间：188min，扫描波长：203
‑
360nm。4.根据权利要求3所述的肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：0
‑
10min，A：B体积比98:2；10
‑
18min，A：B体积比98:2
‑
87:13；18
‑
58min，A：B体积比87:13
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86:14；58
‑
68min，A：B体积比86:14
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83:17；68
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88min，A：B体积比83:17
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80:20；88
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123min，A：B体积比80:20
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79:21；123
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155min，A：B体积比79:21
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49:51；155
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165min，A：B体积比49:51
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19:81；165
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188min，A：B体积比19:81
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9:91。5.根据权利要求3所述的肾炎康复片HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：0
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37.5min，扫描波长为360nm；37.5
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52.5min，扫描波长改为203nm；52.5
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71min，扫描波长改为330nm；71
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83min，扫描波长改为270nm；83
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【专利技术属性】
技术研发人员：沈宇燕，张彦森，高桂琴，
申请(专利权)人：天津同仁堂集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：