眼内液细菌的检测方法、探针组合物和试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种眼内液细菌的检测方法、探针组合物和试剂盒，涉及感染性疾病分子诊断的技术领域。该检测方法包括使用序列如Seq_1～3所示的用于检测铜绿假单胞菌的探针组；序列如Seq_4～6所示的用于检测肺炎克雷伯菌的探针组；序列如Seq_7～9所示的用于检测金黄色葡萄球菌的探针组；序列如Seq_10～12所示的用于检测酿脓链球菌的探针组；采用荧光PCR检测方法检测待测样本，缓解了现有技术中存在的缺乏一种感染性眼病实验室诊断产品的问题。乏一种感染性眼病实验室诊断产品的问题。乏一种感染性眼病实验室诊断产品的问题。

【技术实现步骤摘要】
眼内液细菌的检测方法、探针组合物和试剂盒


[0001]本专利技术涉及感染性疾病分子诊断
，尤其是涉及一种眼内液细菌的检测方法、探针组合物和试剂盒。

技术介绍

[0002]感染性眼病是眼部常见多发病，细菌感染常导致组织不同程度的损伤，有时可严重影响视力，是发展中国家主要致盲因素之一。多重细菌感染是指2种或2种以上的细菌同时感染所引起的眼病，而病原微生物检查是感染性眼病诊断的金标准，但由于眼部组织取材困难、标本量少，实验室诊断阳性率偏低，严重影响疾病的诊断和预后。我国大多数医疗机构感染性眼病实验室诊断能力不足，因此，一种能够用于感染性眼病实验室诊断的产品是目前市场需要的。
[0003]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的在于提供一种用于检测眼内液细菌的探针组合物，该探针组合物具有扩增靶基因特异性好和灵敏度高的优点，缓解了现有技术中存在的缺乏一种能够用于感染性眼病实验室诊断的产品的问题。
[0005]本专利技术的第二目的在于提供一种上述探针组合物的应用。
[0006]本专利技术的第三目的在于提供一种用于检测眼内液细菌的试剂盒，该试剂盒包含上述探针组合物。
[0007]本专利技术的第四目的在于提供一种眼内液细菌的检测方法。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0009]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种用于检测眼内液细菌的探针组合物，包括如下探针组：
[0010]用于检测铜绿假单胞菌的探针组，由序列如Seq_1所示探针PA
‑
ecfX
‑
F20、序列如Seq_2所示探针PA
‑
ecfX
‑
R24和序列如Seq_3所示探针PA
‑
ecfX
‑
P20组成；
[0011]用于检测肺炎克雷伯菌的探针组，由序列如Seq_4所示探针Kpn
‑
rcsA
‑
F1、序列如Seq_5所示探针Kpn
‑
rcsA
‑
R2和序列如Seq_6所示探针Kpn
‑
rcsA
‑
P1组成；
[0012]用于检测金黄色葡萄球菌的探针组，由序列如Seq_7所示探针SA
‑
nuc
‑
F2、序列如Seq_8所示探针SA
‑
nuc
‑
R1和序列如Seq_9所示探针SA
‑
nuc
‑
P1组成；
[0013]用于检测酿脓链球菌的探针组，由序列如Seq_10所示探针Spy
‑
DnaseB
‑
F2、序列如Seq_11所示探针Spy
‑
DnaseB
‑
R1和序列如Seq_12所示探针Spy
‑
DnaseB
‑
P1组成；
[0014]探针PA
‑
ecfX
‑
P20、探针Kpn
‑
rcsA
‑
P1、探针SA
‑
nuc
‑
P1和探针Spy
‑
DnaseB
‑
P1分别独立的修饰有荧光基团和猝灭基团。
[0015]优选地，还包括用于检测内参基因的探针组；
[0016]优选地，所述用于检测内参基因的探针组由序列如Seq_13所示探针RP
‑
F10、序列
如Seq_14所示探针RP
‑
R10和序列如Seq_15所示探针RP
‑
P10组成；所述探针RP
‑
P10修饰有荧光基团和猝灭基团。
[0017]优选地，所述荧光基团选自FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas Red或Cy5；
[0018]优选地，所述猝灭基团选自BHQ1、BHQ2或MGB。
[0019]优选地，所述探针组合物包括探针组合物A和探针组合物B；
[0020]所述探针组合物A包括所述用于检测铜绿假单胞菌的探针组、所述用于检测肺炎克雷伯菌的探针组和用于检测内参基因的探针组；
[0021]所述探针组合物A中的探针PA
‑
ecfX
‑
P20、探针Kpn
‑
rcsA
‑
P1和探针RP
‑
P10由互不相同的荧光基团修饰；
[0022]所述探针组合物B包括所述用于检测金黄色葡萄球菌的探针组、所述用于检测酿脓链球菌和用于检测内参基因的探针组；
[0023]所述探针组合物B中的探针SA
‑
nuc
‑
P1、探针Spy
‑
DnaseB
‑
P1和探针RP
‑
P10由互不相同的荧光基团修饰；
[0024]优选地，所述探针组合物A中：探针PA
‑
ecfX
‑
P20的5
’
端修饰FAM荧光基团，3
’
端修饰BHQ1猝灭基团；探针Kpn
‑
rcsA
‑
P1的5
’
端修饰VIC荧光基团，3
’
端修饰BHQ1猝灭基团；探针RP
‑
P10的5
’
端修饰CY5荧光基团，3
’
端修饰BHQ3猝灭基团；
[0025]优选地，所述探针组合物B中：探针SA
‑
nuc
‑
P1的5
’
端修饰FAM荧光基团，3
’
端修饰BHQ1猝灭基团；探针Spy
‑
DnaseB
‑
P1的5
’
端修饰VIC荧光基团，3
’
端修饰BHQ1猝灭基团；探针RP
‑
P10的5
’
端修饰CY5荧光基团，3
’
端修饰BHQ3猝灭基团。
[0026]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种上述探针组合物在如下(a)～(d)中的应用：
[0027](a)用于非诊断和治疗目的的检测铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和酿脓链球菌中的一种或多种；
[0028](b)用于制备检测铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和酿脓链球菌中的一种或多种的产品；
[0029](c)用于制备检测眼内液细菌的产品；
[0030](d)用于制备诊断眼部疾病的产品。
[0031]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种用于检测眼内液细菌的试剂盒，该试剂盒包含上述探针组合物。
[0032]优选地，所述试剂盒包含试剂A和试剂B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测眼内液细菌的探针组合物，其特征在于，包括如下探针组：用于检测铜绿假单胞菌的探针组，由序列如Seq_1所示探针PA
‑
ecfX
‑
F20、序列如Seq_2所示探针PA
‑
ecfX
‑
R24和序列如Seq_3所示探针PA
‑
ecfX
‑
P20组成；用于检测肺炎克雷伯菌的探针组，由序列如Seq_4所示探针Kpn
‑
rcsA
‑
F1、序列如Seq_5所示探针Kpn
‑
rcsA
‑
R2和序列如Seq_6所示探针Kpn
‑
rcsA
‑
P1组成；用于检测金黄色葡萄球菌的探针组，由序列如Seq_7所示探针SA
‑
nuc
‑
F2、序列如Seq_8所示探针SA
‑
nuc
‑
R1和序列如Seq_9所示探针SA
‑
nuc
‑
P1组成；用于检测酿脓链球菌的探针组，由序列如Seq_10所示探针Spy
‑
DnaseB
‑
F2、序列如Seq_11所示探针Spy
‑
DnaseB
‑
R1和序列如Seq_12所示探针Spy
‑
DnaseB
‑
P1组成；探针PA
‑
ecfX
‑
P20、探针Kpn
‑
rcsA
‑
P1、探针SA
‑
nuc
‑
P1和探针Spy
‑
DnaseB
‑
P1分别独立的修饰有荧光基团和猝灭基团。2.根据权利要求1所述的探针组合物，其特征在于，还包括用于检测内参基因的探针组；优选地，所述用于检测内参基因的探针组由序列如Seq_13所示探针RP
‑
F10、序列如Seq_14所示探针RP
‑
R10和序列如Seq_15所示探针RP
‑
P10组成；所述探针RP
‑
P10修饰有荧光基团和猝灭基团。3.根据权利要求1或2所述的探针组合物，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas Red或Cy5；优选地，所述猝灭基团选自BHQ1、BHQ2或MGB。4.根据权利要求2所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包括探针组合物A和探针组合物B；所述探针组合物A包括所述用于检测铜绿假单胞菌的探针组、所述用于检测肺炎克雷伯菌的探针组和用于检测内参基因的探针组；所述探针组合物A中的探针PA
‑
ecfX
‑
P20、探针Kpn
‑
rcsA
‑
P1和探针RP
‑
P10由互不相同的荧光基团修饰；所述探针组合物B包括所述用于检测金黄色葡萄球菌的探针组、所述用于检测酿脓链球菌和用于检测内参基因的探针组；所述探针组合物B中的探针SA
‑
nuc
‑
P1、探针Spy
‑
DnaseB
‑
P1和探针RP
‑
P10由互不相同的荧光基团修饰；优选地，所述探针组合物A中：探针PA
‑
ecfX
‑
P20的5
’
端修饰FAM荧光基团，3
’
端修饰BHQ1猝灭基团；探针Kpn
‑
rcsA
‑
P1的5
’
端修饰VIC荧光基团，3
’
端修饰BHQ1猝灭基团；探针RP
‑
P10的5
’
端修饰CY5荧光基团，3
’
端修饰BHQ3猝灭基团；优选地，所述探针组合物B中：探针SA
‑
nuc
‑
P1的5<...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶勇，陆成慧，邓永杰，
申请(专利权)人：智德明创生物科技无锡有限公司，
类型：发明
国别省市：