一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用。本发明专利技术的短小芽孢杆菌LX4400的保藏编号为CGMCC No.25787，该短小芽孢杆菌LX4400为大豆根瘤菌的伴生菌，在实际应用过程中与大豆品种的匹配具有广谱性。上述短小芽孢杆菌LX4400在与根瘤菌同时施用时具有明显的增效作用，不仅能够显著提高植株的生物量，还能够明显增强植株的抗性，有利于提高根瘤菌的实际应用效果。应用效果。

【技术实现步骤摘要】
一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其是涉及一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用。

技术介绍

[0002]国际上大豆根瘤菌的研究和应用已有一百多年的历史，无论发达国家还是发展中国家，都十分重视根瘤菌接种技术在大豆种植中的推广应用与研究工作。近几十年来我国在大豆种植上忽视地下部分，种植时依赖化学肥料，与国际上普遍接种应用根瘤菌技术相差甚远。主要原因是由于根瘤菌施用接种技术落后，造成了根瘤菌接种效率低，施用效果不理想。所以如何能更加有效的接种根瘤菌成为了研究的热点。
[0003]为了更加有效地提高根瘤菌接种效果，促进根瘤菌应用技术的推广，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用，该短小芽孢杆菌LX4400在与根瘤菌同时施用时具有明显的增效作用，不仅能够显著提高植株的生物量，还能够明显增强植株的抗性，有利于提高根瘤菌的实际应用效果。
[0005]本专利技术提供一种短小芽孢杆菌LX4400，该短小芽孢杆菌LX4400的保藏编号为CGMCC No.25787。
[0006]特别是，该短小芽孢杆菌LX4400分离自大豆植株根瘤内部，是根瘤菌的伴生菌；具体地，所述分离过程包括：将新鲜的大豆根瘤表面消毒，无菌操作条件下挤出汁液，涂抹于根瘤菌固体平板培养基上，28
‑
30℃静置培养，待培养物长出后，经过反复划线纯化，获得该短小芽孢杆菌LX4400的纯培养物。
[0007]进一步地，该短小芽孢杆菌LX4400回接验证过程是：将该短小芽孢杆菌LX4400的纯培养物和大豆根瘤菌在大豆播种时随种接入，待大豆长至初花期，采集新鲜、饱满的大豆根瘤，对大豆根瘤进行表面消毒，无菌操作条件下取内部汁液涂抹于根瘤菌固体平板培养基进行培养，经过反复划线纯化，在不同品种大豆根瘤内部均再次分离获得短小芽孢杆菌LX4400；更具体地，该短小芽孢杆菌LX4400回接验证所用豆种表面经过消毒处理，栽培土、浇灌用水均经过121℃灭菌30min的处理。
[0008]本专利技术的短小芽孢杆菌LX4400分离自大豆植株根瘤，该菌株与大豆根瘤菌共同紧密生长，在菌株分离过程中与根瘤菌很难分离，经回接实验验证该菌株为大豆根瘤菌的伴生菌。对分离得到的菌株进行16SrDNA测序，结果用Blast软件进行同源性比对，结果表明该菌株与短小芽孢杆菌的同源性为99％，构建系统发育树，证明该菌株为短小芽孢杆菌；同时，结合菌落、菌体形态特征及理化特性，从而鉴定该菌株为短小芽孢杆菌。
[0009]本专利技术的短小芽孢杆菌LX4400分类命名为：短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LX4400；保藏编号为：CGMCC No.25787；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号楼中国科学院微生物研究所；保
藏时间为：2022年09月23日。
[0010]研究表明：本专利技术的短小芽孢杆菌LX4400为大豆根瘤菌的伴生菌，在实际应用过程中与大豆品种的匹配具有广谱性，在与根瘤菌同时施用时具有明显的增效作用，不仅能够显著提高植株的生物量，还能够明显增强植株的抗性，有利于提高根瘤菌的实际应用效果；此外，本专利技术的短小芽孢杆菌LX4400在与防御假单胞菌或荧光假单胞菌混配时能够有效延长防御假单胞菌和荧光假单胞菌的存活时间，有利于提高防御假单胞菌和荧光假单胞菌的储存稳定性并延长产品货架期。
[0011]本专利技术还提供一种短小芽孢杆菌菌剂，通过对上述的短小芽孢杆菌LX4400进行发酵制得。
[0012]本专利技术对短小芽孢杆菌LX4400的发酵培养基和发酵方法不作严格限制，可以采用本领域的常规培养基及培养条件进行发酵。在一实施方式中，对短小芽孢杆菌LX4400进行发酵的发酵培养基组分可以包括：葡萄糖10
‑
20g/L，蛋白胨1
‑
3g/L，硫酸铵2
‑
4g/L，磷酸氢二钾0.5
‑
2g/L，磷酸二氢钾0.5
‑
2g/L，硫酸镁0.5
‑
1g/L；调节发酵培养基的pH值为6.8
‑
7.0，常规灭菌后使用。此外，发酵条件可以包括：发酵温度30
‑
35℃，转速160
‑
200rpm，发酵时间1.5
‑
2.5d。在上述条件下，短小芽孢杆菌菌剂中短小芽孢杆菌LX4400菌剂的活菌数为50
‑
80亿/mL。
[0013]进一步地，经过培养基优化后，短小芽孢杆菌菌剂中短小芽孢杆菌LX4400菌剂的活菌数提高为100
‑
120亿/mL。具体地，优化方法是发酵时向基础发酵培养基中添加15
‑
25mL/L根瘤菌胞外多糖粗液；具体地，该根瘤菌胞外多糖粗液中胞外多糖的分子量(重均分子量)为0.7
×
107‑
1.5
×
107Da；根瘤菌胞外多糖粗液中的胞外多糖总含量为19
‑
22g/L。此外，根瘤菌胞外多糖粗液的添加量可以为15
‑
25mL/L。
[0014]上述根瘤菌胞外多糖粗液可以通过利用大豆根瘤菌进行液体发酵、浓缩制得，大豆根瘤菌来自领先生物农业股份有限公司；对大豆根瘤菌的发酵培养基和发酵方法不作严格限制，可以采用本领域的常规培养基及培养条件进行发酵。在一实施方式中，对大豆根瘤菌进行发酵的发酵培养基的组成为：甘露醇10
‑
15g/L，氯化钠0.1
‑
0.3g/L，硫酸镁0.2
‑
0.4g/L，硫酸钙0.08
‑
0.12g/L，磷酸氢二钾0.8
‑
1.2g/L和酵母膏0.8
‑
1.2g/L。此外，发酵条件可以包括：发酵温度28
‑
30℃，转速160
‑
200rpm，发酵时间6
‑
8d。
[0015]在基础发酵培养基中添加上述根瘤菌胞外多糖粗液能够有效提高短小芽孢杆菌LX4400的活菌数并延长短小芽孢杆菌菌剂在恶劣条件下的货架期。
[0016]本专利技术还提供上述短小芽孢杆菌菌剂在根瘤菌剂使用过程中的应用。该短小芽孢杆菌菌剂在根瘤菌剂使用过程中的使用方法为拌种、包衣、冲施、喷施。具体地，在应用时，该短小芽孢杆菌菌剂与大豆根瘤菌剂共同施用。更具体地，在包衣或拌种使用时，大豆根瘤菌剂的用量可以为2
‑
3mL/公斤种子，短小芽孢杆菌菌剂的用量可以为0.1
‑
0.2mL/公斤种子。
[0017]此外，在应用时，该短小芽孢杆菌菌剂还可以与花生根瘤菌、紫云英根瘤菌、降香黄檀根瘤菌、苜蓿根瘤菌、绿豆根瘤菌、红小豆根瘤菌、沙打旺根瘤菌、甘草根瘤菌、黄芪根瘤菌、豌豆根瘤菌、菜豆根瘤菌和/或三叶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种短小芽孢杆菌LX4400，其特征在于，其保藏编号为CGMCC No.25787。2.根据权利要求1所述的短小芽孢杆菌LX4400，其特征在于，该短小芽孢杆菌LX4400分离自大豆植株根瘤内部，是根瘤菌的伴生菌。3.根据权利要求2所述的短小芽孢杆菌LX4400，其特征在于，所述分离过程包括：将新鲜的大豆根瘤表面消毒，无菌操作条件下挤出汁液，涂抹于根瘤菌固体平板培养基上，28
‑
30℃静置培养，待培养物长出后，经过反复划线纯化，获得该短小芽孢杆菌LX4400的纯培养物。4.根据权利要求3所述的短小芽孢杆菌LX4400，其特征在于，该短小芽孢杆菌LX4400回接验证过程是：将该短小芽孢杆菌LX4400的纯培养物和大豆根瘤菌在大豆播种时随种接入，待大豆长至初花期，采集新鲜、饱满的大豆根瘤，对大豆根瘤进行表面消毒，无菌操作条件下取内部汁液涂抹于根瘤菌固体平板培养基进行培养，经过反复划线纯化，在不同品种大豆根瘤内部均再次分离获得短小芽孢杆菌LX4400。5.根据权利要求4所述的短小芽孢杆菌LX4400，其特征在于，该短小芽孢杆菌LX4400回接验证所用豆种表面经过消毒处理，栽培土、浇灌用水均经过121℃灭菌30min的处理。6.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙杉杉，徐延平，李婧，章孜亮，葛振宇，徐志文，李春艳，
申请(专利权)人：领先生物农业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：