CCT2作为胶质瘤标志物的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及CCT2作为胶质瘤标志物的应用。本发明专利技术通过生物信息学分析检索癌症基因图谱(the Cancer Genome Atlas，TCGA)和中国胶质瘤基因图谱(Chinese Glioma Genome Atlas，CGGA)两个数据库，发现在胶质瘤中CCT2的表达水平随胶质瘤的级别升高而升高，同时CCT2的高表达与胶质瘤患者的不良预后相关。本发明专利技术通过小干扰RNA降低胶质瘤细胞系中CCT2的表达水平可显著抑制胶质瘤细胞系的细胞活力和侵袭迁移的能力；通过慢病毒技术构建CCT2稳定低表达的胶质瘤细胞系，然后在裸鼠颅内异种移植构建的CCT2稳定低表达的GBM细胞系；通过小动物活体成像发现CCT2的低表达抑制了裸鼠颅内肿瘤的生长，同时延长了裸鼠的生存时间。CCT2可以作为诊断及治疗胶质瘤的分子标志物，同时在预后评估中起作用。用。用。

【技术实现步骤摘要】
CCT2作为胶质瘤标志物的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及CCT2作为胶质瘤标志物的应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤，其中超过一半的病例为恶性程度极高的WHO 4级胶质瘤，即多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiform，GBM)，具有恶性程度高、侵袭能力强、易复发、预后差等特点。临床上对于胶质瘤的治疗多为手术切除联合术后替莫唑胺(Temozolomide，TMZ)化疗，同时联合放射治疗，但是总体治疗效果不理想，特别是恶性程度最高的多形性胶质母细胞瘤患者的中位生存时间约为15个月。近年来，随着科学技术及科研手段特别是基因测序技术的发展，使得越来越多在肿瘤的发生发展过程中起重要作用的基因被鉴别出来。某些特定的基因与特定肿瘤的发生有关，因此被当作肿瘤诊断及治疗的靶点，相应的抑制剂也被应用到肿瘤的临床治疗当中，为肿瘤患者带来了福音。因此，寻找胶质瘤相关的生物学标志物，为胶质瘤的诊断、治疗及预后评估提供新的靶点成为胶质瘤研究的重要方向。
[0004]蛋白质是一种有机大分子，是构成所有生命的基础物质，是生命活动的主要承担者。蛋白质由核糖体合成肽链后需要在分子伴侣的协助下折叠成具有空间构象的成熟蛋白质后才能发挥生物功能。最复杂的伴侣蛋白是含有TCP1[CCT，也称为TRiC(TCP1环复合物)]的真核胞质伴侣蛋白，它由8个不同的亚基(CCT1,2,3,4,5,6,7和8)组成。CCT对于细胞活力至关重要，并已被证明以atp依赖的方式协助折叠细胞骨架蛋白(微管蛋白和肌动蛋白)和其他与致癌相关的蛋白质，如p53、STAT3等。在这种情况下，CCT亚基的表达升高可能导致这些致癌蛋白的上调，进而导致癌变。
[0005]文献报道CCT2在乳腺癌、肝癌等多种癌症的恶性进展中起作用，目前尚无有关CCT2在胶质瘤的诊断、治疗及预后评估中起重要作用的相关文献报道。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供CCT2作为胶质瘤标志物的应用。本专利技术通过生物信息学分析检索癌症基因图谱(the Cancer Genome Atlas，TCGA)和中国胶质瘤基因图谱(Chinese Glioma Genome Atlas，CGGA)两个数据库，发现在胶质瘤中CCT2的表达水平随胶质瘤的级别升高而升高，同时CCT2的高表达与胶质瘤患者的不良预后相关。本专利技术通过小干扰RNA降低胶质瘤细胞系中CCT2的表达水平可显著抑制胶质瘤细胞系的细胞活力和侵袭迁移的能力；通过慢病毒技术构建CCT2稳定低表达的胶质瘤细胞系，然后在裸鼠颅内异种移植构建的CCT2稳定低表达的GBM细胞系；通过小动物活体成像发现CCT2的低表达抑制了裸鼠颅内肿瘤的生长，同时延长了裸鼠的生存时间。本专利技术证实了
CCT2可以作为诊断及治疗胶质瘤的分子标志物，同时在预后评估中起作用。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：
[0008]第一方面，本专利技术提供了CCT2作为胶质瘤标志物在制备胶质瘤诊断、治疗以及预后产品中的应用，CCT2(NCBI Gene ID:10576)的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。
[0009]上述本专利技术的一种或多种技术方案取得的有益效果如下：
[0010](1)本专利技术中首次证明了通过siRNA降低CCT2基因/蛋白的表达可以抑制胶质瘤的细胞增殖及集落形成能力，以及侵袭迁移能力，证明CCT2基因/蛋白可以作为治疗胶质瘤的潜在的作用靶点；
[0011](2)本专利技术提出以CCT2为胶质瘤的肿瘤标志物，CCT2的表达量随胶质瘤级别的升高而升高，同时在GBM中较正常脑组织表达量高，使得CCT2可以作为胶质瘤辅助诊断的指标；CCT2的高表达与胶质瘤患者的差预后呈正相关，使得CCT2可以作为胶质瘤预后评估的指标。
附图说明
[0012]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0013]图1为实施例1中生物信息学分析CCT2表达情况数据图，其中a为TCGA数据库中胶质瘤样本CCT2的表达情况，b为CGGA数据库中胶质瘤样本CCT2的表达情况，c为GEPIA2网站的数据库中CCT2基因在正常脑组织与多形性胶质母细胞瘤中的表达差异；
[0014]图2为实施例中1中人星形胶质细胞(NHA)与T98、U118、A172、LN229、U251及P3#GBM胶质瘤细胞系中CCT2蛋白的蛋白免疫印迹(WB)图；
[0015]图3为实施例1中TCGA(a)与CGGA(b)数据库中胶质瘤样本表达量对生存时间影响的分析图；
[0016]图4为实施例2通过蛋白免疫印迹(WB)验证siRNA与慢病毒对CCT2蛋白敲减效率的结果图，其中a为siCCT2#1和siCCT2#2与空白组(NC)在LN229、U251、P3#GBM胶质瘤细胞系中的蛋白免疫印迹，b为慢病毒(shCCT2)与空白组(NC)在LN229、P3#GBM胶质瘤细胞系中的蛋白免疫印迹；
[0017]图5为利用siCCT2#1和siCCT2#2进行CCT2蛋白敲减后LN229、U251、P3#GBM胶质瘤细胞系细胞活力及集落形成能力的变化图，对照组为siCtrl，a为CCK8吸光度对比图，b为细胞染色图，c为细胞计数图；
[0018]图6为利用siCCT2#1和siCCT2#2进行CCT2蛋白敲减后LN229、U251胶质瘤细胞系迁移能力对比图，对照组为siCtrl，其中a为细胞染色图，b为相对细胞迁移数据对比图；
[0019]图7为利用siCCT2#1和siCCT2#2进行CCT2蛋白敲减后U251、P3#GBM胶质瘤细胞系迁移能力对比图，其中a为显微观察图，b为侵袭距离对比图；
[0020]图8为慢病毒感染构建CCT2基因/蛋白稳定低的胶质瘤细胞系(shCCT2)与对照组系(shScramble)的颅内成瘤实验结果图，其中a为活体成像图，b为活体成像光通量对比图，c为生存曲线。
具体实施方式
[0021]本专利技术的第一种典型实施方式，CCT2作为胶质瘤标志物在制备胶质瘤诊断、治疗以及预后产品中的应用，CCT2(NCBI Gene ID:10576)的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。
[0022]该实施方式的一种或多种实施例中，所述产品包括但不限于诊断胶质瘤及胶质瘤预后评估的试剂盒、胶质瘤治疗药物。
[0023]该实施方式的一种或多种实施例中，所述试剂盒以CCT2基因/蛋白为检测的靶标。
[0024]该实施方式的一种或多种实施例中，所述试剂盒包括检测CCT2基因的引物序列和/或检测CCT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CCT2作为胶质瘤标志物在制备胶质瘤诊断、治疗以及预后产品中的应用，其特征在于，CCT2的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括但不限于诊断胶质瘤及胶质瘤预后评估的试剂盒、胶质瘤治疗药物。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒以CCT2基因/蛋白为检测的靶标。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括检测CCT2基因的引物序列和/或检测CCT2蛋白的CCT2抗体。5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述胶质瘤治疗药物含有CCT2抑制剂。6.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈安静，李新钢，赵飞虎，王东海，张晴，相国，韩明志，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：