用于治疗冠状病毒科感染的适体制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗由来自冠状病毒科的病毒引起的感染的新型适体分子、体外/离体预防由来自冠状病毒科的病毒引起的感染的方法、包含此类适体分子的药物组合物和试剂盒、以及适体分子用于预防由来自冠状病毒科的病毒感染体细胞的用途。本发明专利技术还涉及与冠状病毒科病毒的关键酶的特定和新鉴定的表位结合的亲和性分子。性分子。性分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗冠状病毒科感染的适体


[0001]本专利技术涉及用于治疗由来自冠状病毒科(Coronaviridae)的病毒引起的感染的新型适体分子、体外/离体预防由来自冠状病毒科的病毒引起的感染的方法、包含此类适体分子的药物组合物和试剂盒、以及适体分子用于预防体细胞被来自冠状病毒科的病毒感染的用途。本专利技术还涉及与冠状病毒科病毒的关键酶内的特定和新鉴定的表位结合的亲和性分子。

技术介绍

[0002]新型且高致病性冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)的出现及其迅速的国际化传播构成了严重的全球突发公共卫生事件。与由例如2003年的严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS
‑
CoV)和2012年的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS
‑
CoV)等其它致病性冠状病毒毒株感染的那些患者相似，由SARS
‑
CoV
‑
2感染的患者表现出一系列症状，包括干咳、发烧、头痛、呼吸困难和肺炎，估计死亡率在3
‑
5％的范围内。
[0003]截至2020年4月8日，全球已确认1,317,130例病毒感染，其中74,304例感染患者确认死亡(https://www.who.int/emergencies/diseases/novel
‑
coronavirus
‑
2019)。
[0004]目前，世界上的多个城市和国家处于不同程度的封锁以使持续传播最小化，并且由于SARS
‑<br/>COV
‑
2的迅速和全球传播，WHO已宣布国际关注的突发公共卫生事件(PHEIC)。
[0005]对冠状病毒基因组的系统发育分析表明，SARS
‑
CoV
‑
2是β冠状病毒属(Betacoronavirus genus)的新成员，β冠状病毒属包括SARS
‑
CoV、MERS
‑
CoV、蝙蝠SARS相关冠状病毒(SARSr
‑
CoV)以及在人类和各种动物物种中鉴定的其它成员。
[0006]每种冠状病毒包含四种结构蛋白，包括刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)。其中，刺突糖蛋白或S蛋白在病毒附着、融合和进入中发挥最重要的作用，其是开发抗体、进入抑制剂和疫苗的最有前景的靶标。S蛋白首先通过S1亚基中的受体结合结构域(RBD)与宿主受体结合，然后通过S2亚基融合病毒和宿主细胞膜，从而介导病毒进入宿主细胞(Lu,G.等人Nature 500,227
–
231(2013).)。因此，病毒包膜上的同源三聚体刺突糖蛋白(每个刺突单体中的S1亚基和S2亚基)用于结合它们的细胞受体。这种结合引发事件级联，导致细胞和病毒的膜之间的融合以进入细胞。
[0007]SARS
‑
CoV和MERS
‑
CoV RBD识别不同受体。SARS
‑
CoV将血管紧张素转换酶2(ACE2)识别为其受体，而MERS
‑
CoV将二肽基肽酶4(DPP4)识别为其受体。与SARS
‑
CoV类似，SARS
‑
CoV
‑
2也将ACE2识别为与病毒S蛋白结合的其宿主受体(Zhou,P.,等人Nature 579,270
–
273(2020).)。
[0008]先前对SARS
‑
CoV刺突及其与细胞受体ACE2的相互作用的低温EM(cryo
‑
EM)研究显示，与靶体细胞上的ACE2受体结合是SARS
‑
CoV进入靶细胞的关键初始步骤。最近的研究还指出了ACE2在介导SARS
‑
CoV
‑
2进入中的重要作用(Walls,A.C.等人Cell S0092
‑
8674(20)30262
‑
2(2020).https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.02.058.和Hoffmann,M.等人Cell S0092
‑
8674(20)30229
‑
4(2020).https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.02.052)。
[0009]表达ACE2的HeLa细胞对SARS
‑
CoV
‑
2感染敏感，而缺乏受体的HeLa细胞则不然。体外结合测定也显示，SARS
‑
CoV
‑
2受体结合结构域(RBD)以低nM范围的亲和性与ACE2结合，表明RBD是刺突糖蛋白的S1亚基内负责由ACE2结合SARS
‑
CoV
‑
2的关键功能组分。
[0010]最近，可以证明SARS
‑
CoV2还使用硫酸乙酰肝素(heparan sulfate)作为辅因子或细胞附着因子，使得随后ACE
‑
2介导的细胞进入成功。RBD与硫酸乙酰肝素的预先接触可起到“病毒收集器”的作用，这是后续细胞摄取(cell
‑
uptake)所必需的。这里，SARS
‑
CoV
‑
2的RBD的带正电荷的氨基酸被讨论作为硫酸乙酰肝素和肝素的潜在结合配偶体(Clausen等人,2020,Cell 183,1043
–
1057.e15.)。
[0011]总之，每种不同的冠状病毒的刺突蛋白对于病毒的传染性和致病性是至关重要且相关的。在这个阶段，有大量的研究和开发活动以确定针对冠状病毒刺突蛋白并因此能够干扰感染过程的新型和另外的药剂。虽然可以开发选择性靶向该部分的抗体，但确定已通过I期临床试验并因此可以安全地施用至患者的(小)分子可能更有利。
[0012]此外，病毒和病毒感染周期有更多的易感部位，理论上可以被某种物质攻击。在基于寡核苷酸的药物、也称为适体的情况下，之前已经鉴定和描述了几种易受此类分子干扰的关键位点。包括小分子、抗体衍生生物制品以及适体的药物的其它潜在靶标是参与RNA病毒的复制过程的酶。这种新型靶标和针对这种新型靶标的亲和性分子的表征将补充用于对抗冠状病毒科感染的工具包。
[0013]Gonz
á
lez等人和Zou等人提供了抗病毒活性适体的概述(Gonz
á
lez,V.M.等人,2016.Use of Aptamers as Diagnostics Tools and Antiviral Agents for Human Viruses.Pharmaceuticals(Basel)9.https://doi.org/10.3390/ph9040078和Zou等人,2019.Application of Aptamers in Virus D本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种适体，其用于通过治疗、治愈来自冠状病毒科的病毒的感染或预防来自冠状病毒科的病毒的感染的进一步进展来治疗受试者的用途，其中所述适体包含SEQ ID No.1(GGT TGG TGT GGT TGG)的核酸序列和/或与SEQ ID No.1为至少80％同一性的核酸序列。2.根据权利要求1所述的用于用途的适体，其中所述感染由来自β冠状病毒属的病毒、优选来自沙贝科病毒或玛贝科病毒亚属的病毒引起，更优选所述感染由选自包括MERS
‑
CoV、SARS
‑
CoV和SARS
‑
CoV
‑
2的组的病毒引起，特别优选其中所述感染由SARS
‑
CoV
‑
2引起。3.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的适体，其中所述适体具有抗凝血活性，优选地，其中所述适体在0.03mg/ml的适体浓度下能够将人校准血浆的作为部分促凝血酶原激酶时间(PTT)测定的凝血时间延长至60秒以上，和/或其中所述适体在0.03mg/ml的适体浓度下能够将人校准血浆的凝血酶原时间(Quick值)降低至40％以下。4.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的适体，其中所述适体通过与所述病毒的刺突(S)糖蛋白的选择性相互作用来干扰体细胞的感染，优选通过阻止或干扰所述病毒的刺突糖蛋白与受试者宿主细胞的血管紧张素转换酶2(ACE2)或二肽基肽酶4(DPP4)、更优选ACE2的相互作用来干扰体细胞的感染。5.根据权利要求4所述的用于用途的适体，其中所述刺突糖蛋白的受体结合结构域具有SEQ ID NO:2(SARS
‑
CoV
‑
2刺突RBD)或SEQ ID NO:3(SARS
‑
CoV刺突RBD)或SEQ ID NO:4(MERS
‑
CoV刺突RBD)的序列，优选其中所述刺突糖蛋白的受体结合结构域具有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的序列，优选其中所述刺突糖蛋白具有SEQ ID NO:2的序列。6.一种适体，其用于通过治疗、治愈或预防已克服来自冠状病毒科的病毒感染的患者中与长COVID相关的疾病症状来治疗受试者的用途，其中所述适体包含SEQ ID NO.1(GGT TGG TGT GGT TGG)的核酸序列和/或与SEQ ID NO.1为至少80％同一性的核酸序列。7.根据权利要求6所述的用于用途的适体，其中所述疾病症状包括来自包含以下的组的一种以上：神经症状如慢性疲劳综合征、体位性心动过速综合征(PoTS)、自主神经紊乱、震颤、注意力缺陷、命名性失语症、神经病变、横贯性脊髓炎、急性坏死性脊髓炎和格林
‑
巴利综合征，心血管症状如心肌炎症、心律失常、心动过速、心动过缓、高血压和房室(AV)传导阻滞，皮肤病症状如脱发和湿疹，或胃肠道疾病。8.根据权利要求6或7中任一项所述的用于用途的适体，其中所述适体用于抑制对G蛋白偶联受体为特异性的自身抗体与其靶蛋白的相互作用。9.根据权利要求6至8中任一项所述的用于用途的适体，其中所述适体用于治疗可以检测到针对G蛋白偶联受体的自身抗体的患者。10.根据权利要求6至9中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：安妮凯萨琳，
申请(专利权)人：柏林制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：