一株耐多粘菌素产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌EC382-2-2及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株耐多粘菌素产超广谱β

【技术实现步骤摘要】
一株耐多粘菌素产超广谱
β
‑
内酰胺酶大肠杆菌EC382
‑2‑
2及其应用

：
[0001]本专利技术涉及耐药致病菌
，尤其涉及一株耐多粘菌素产超广谱β
‑
内酰胺酶大肠杆菌EC382
‑2‑
2及其应用。

技术介绍
：
[0002]大肠杆菌O157是一种重要的人畜共患病病原菌，可引起人和动物腹泻、出血性肠炎和溶血性尿毒综合症等疾病，给食品安全和人类健康造成严重威胁。E.coli O157包含多个H型，其中O157:H7是国内外研究最多的一类血清型，具有高致死率。除O157:H7外，近年来多种其他H型被报道与人类严重感染相关，例如O157:H45、O157:H26、O157:H2和O157:H16等。食用受E.coli O157污染的肉类蔬菜等是食物中毒的主要原因。目前，E.coli O157仍是世界各国重点追踪和监测的重要病原菌。
[0003]抗生素对于大肠杆菌(包括大肠杆菌O157)感染治疗具有一定辅助作用，但是随着抗生素在畜牧养殖和临床的广泛/过度使用，大肠杆菌及大肠杆菌O157耐药性逐年增加，多重耐药菌株在动物、食品和环境中不断扩散。泛耐药菌株可通过食品传播给人类，给临床和畜牧业细菌感染治疗带来新挑战。当前，耐药菌株的流行和蔓延已成为一个重要的公共卫生问题。文献资料显示，大肠杆菌对多数喹诺酮类药的耐药率高达50％，三代头孢的耐药率达到20％以上，且五重、六重、七重耐药情况占主导。多粘菌素(Colistin)被认为是治疗多重耐药革兰氏阴性菌感染的最后选择。然而自2015年我国首次报道质粒介导黏菌素耐药基因mcr
‑
1以来，耐多粘菌素大肠杆菌在全球范围报道逐渐增多。Mcr
‑
1基因通过可转移质粒在不同的细菌中水平传播，导致新的多重耐药和泛耐药菌开始出现。截止目前，质粒介导的mcr
‑
1基因已经在大肠杆菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌等多种肠杆菌科细菌中检出，部分菌株同时携带超广谱β
‑
内酰胺酶类ESBL基因和mcr
‑
1基因，导致对三代头孢和多粘菌素产生抗性，进一步限制了抗生素的选择，增加了疾病治疗的难度。
[0004]持续追踪监测新耐药菌的出现，及时更新报告耐药菌扩散情况，逐步完善数据共享服务平台，对于开发新型药物、保障人类健康具有重要意义。

技术实现思路
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[0005]为克服现有技术的不足，本专利技术提供一株同时携带多重耐药基因和毒力基因的大肠杆菌O157新菌株
‑
大肠杆菌EC382
‑2‑
2及其应用，该菌株为国际上首次报道，可作为筛选新型抗菌药物的模式菌株，具有良好的应用前景。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一株致病大肠杆菌(atypical enteropathogenic Escherichia coli,aEPEC)EC382
‑2‑
2，其分类命名为大肠杆菌(Escherichia coli)EC382
‑2‑
2，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址为中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏日期为2022年10月27日，保藏编号为GDMCC No：62929。
[0007]本专利技术提供的大肠杆菌EC382
‑2‑
2，属于血清型O157:H26，同时携带18种耐药基因和1种毒力基因，其所携带基因如下：
[0008]耐药基因：ant(2
’
)
‑
Ia，aph(3
’
)
‑
Ib，aph(3
’
)
‑
IIa，aph(3
’
)
‑
XV，aph(6
’
)
‑
Id，floR，catB3，CTX
‑
M
‑
55，OXA
‑
4，TEM
‑
214，mcr
‑
1，dfrA1，fosA3，mdf(A)，oqxA，oqxB，sul2，tet(A)；
[0009]毒力基因：携带编码LEE黏附位点的毒力基因(eae)；
[0010]染色体上喹诺酮类耐药突变位点：
[0011]gyrA基因编码产物的第83位的丝氨酸(S)突变为亮氨酸(L)；
[0012]gyrA基因编码产物的第87位的天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N)；
[0013]parC基因编码产物的第80位的丝氨酸(S)突变为异亮氨酸(I)。
[0014]所述的致病大肠杆菌EC382
‑2‑
2，为革兰氏阴性、短杆菌，API 20E鉴定为大肠杆菌(5044552)，符合率为99.5％。其生化特征如下：ONPG试验(+)，精氨酸双水解酶(
‑
)，赖氨酸脱羧酶(+)，鸟氨酸脱羧酶阳性(
‑
)，柠檬酸盐(
‑
)，产生硫化氢(
‑
)，尿素酶(
‑
)，苯丙氨酸脱氨酶(
‑
)，吲哚试验(+)，VP试验(
‑
)，不能液化明胶，发酵葡萄糖、甘露醇、山梨醇、鼠李糖、密二糖、阿拉伯糖，不发酵肌醇、蔗糖和苦杏仁苷，具大肠杆菌典型生理生化特征。血清型分子鉴定为血清型O157:H26。
[0015]本专利技术的第二个目的是提供上述大肠杆菌EC382
‑2‑
2在作为筛选新型抗菌药物的模式菌株中的应用。
[0016]优选，是大肠杆菌EC382
‑2‑
2作为模式菌株在筛选抗大肠杆菌的功能微生物、药物、制剂或抗菌材料中的应用。
[0017]优选，所述的功能微生物、药物、制剂或抗菌材料是抑制耐氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、头孢噻肟、多粘菌素E、庆大霉素、环丙沙星、复方新诺明、四环素和氟苯尼考的大肠杆菌的功能微生物、药物、制剂或抗菌材料。
[0018]优选，所述的大肠杆菌EC382
‑2‑
2可作为抗生素药物，例如多粘菌素或三代头孢测定的对照或模式菌株，用于辅助筛选食品微生物防控和临床治疗靶向药物。
[0019]优选，所述的大肠杆菌EC382
‑2‑
2作为检测耐药基因mcr
‑
1/CTX
‑
M
‑
55和毒力基因eae的参照菌株。
[0020]本专利技术的第三个目的是能够特异性鉴别大肠杆菌EC382
‑2‑
2的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示。
[0021]本专利技术的第四个目的是提供特异性鉴别大肠杆菌EC382
‑2‑
2的引物，包括：F:5
’‑
TAGAAGGCTCTTTGGAAGCA
‑3’
；R:5<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.大肠杆菌(Escherichia coli)EC382
‑2‑
2，保藏编号为GDMCC No：62929。2.权利要求1所述的大肠杆菌EC382
‑2‑
2在作为筛选新型抗菌药物的模式菌株中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，是大肠杆菌EC382
‑2‑
2作为模式菌株在筛选抗大肠杆菌的功能微生物、药物、制剂或抗菌材料中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的功能微生物、药物、制剂或抗菌材料是抑制耐氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、头孢噻肟、多粘菌素E、庆大霉素、环丙沙星、复方新诺明、四环素和氟苯尼考的大肠杆菌的功能微生物、药物、制剂或抗菌材料。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的大肠杆菌EC382
‑2‑
2可作为筛选抗生素药物的对照或模式菌株，用于辅助筛选食品微生物防控和临床治疗靶向药物。6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的大肠杆菌EC382
‑2‑
2作为检测耐药基因mcr
‑
1/CTX
‑
M
‑
55和毒力基因eae的参照菌株。7.一种能够特异性鉴别权利要求1所述的大肠杆菌EC382
...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄远斌，张淑红，代京莎，杨广珠，吴清平，张菊梅，陈玲，刘欣琪，吴诗，古其会，张友雄，韦献虎，
申请(专利权)人：广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：