CAR修饰的免疫细胞、制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了CAR修饰的免疫细胞、制备方法及其应用，其中所述的BCMA的特异性抗体或其抗原结合片段能特异性与BCMA结合，所述BCMA的特异性抗体或其抗原结合片段包括特异性抗体重链可变区的抗原互补决定区CDR1、CDR2、CDR3和特异性抗体轻链可变区的抗原互补决定区CDR1、CDR2、CDR3。本发明专利技术提供了一种CAR细胞，所述CAR细胞能够有效地提高杀伤肿瘤细胞的效率和临床治疗的安全性、有效性；同时，本发明专利技术还提供了特异性抗体、CAR结构或一种CAR细胞在制备药物中的应用，从而提供一种具有优良应用前景的高效、可靠、安全的肿瘤治疗的新手段。安全的肿瘤治疗的新手段。安全的肿瘤治疗的新手段。

【技术实现步骤摘要】
CAR修饰的免疫细胞、制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于免疫治疗领域，涉及一种靶向BCMA的CAR修饰的免疫细胞、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，免疫治疗越来越多的用于肿瘤治疗领域，相对于传统手术、化疗、放疗，靶向免疫疗法能够高效的识别肿瘤细胞，并大幅度减少对身体的损伤，具有不可替代的优势和发展潜力。嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，缩写CAR)修饰的免疫细胞使用遗传工程手段修饰免疫细胞使其表达外源性抗肿瘤基因。目前随着肿瘤免疫治疗研究的积累，免疫治疗手段逐步进入临床。
[0003]多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一种浆细胞的恶性肿瘤，全球每年约有160,000新发病例，是血液系统第二位常见肿瘤，目前仍无法治愈。传统的治疗方法例如蛋白酶抑制剂(PI)和免疫调节剂(IMID)虽表现出了很好的疗效，却依旧没有解决病患复发率高和药物有效清除率低等问题。B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen，BCMA)在浆细胞中高水平选择性表达，是理想的MM治疗靶点。
[0004]BCMA也叫TNFRSF17(TNF receptor superfamily member 17，TNF配体超家族成员17)，主要在浆细胞和成熟B淋巴细胞中表达，在其它的正常人体细胞中基本检测不到。BCMA是MM细胞系上最具选择性表达的受体，其表达量随着B细胞的分化而逐渐增加，在多发性骨髓瘤的疾病进程中也逐步递增。
[0005]自然杀伤(natural killer，缩写NK)细胞是非特异性免疫系统的重要组成部分，NK细胞是一种广谱免疫细胞，具有快速发现和摧毁异常细胞(如癌症或病毒感染的细胞)的特异功能，而且NK细胞不需要提前致敏或HLA配型，即可有强大的溶解异常细胞的活性。包括NK细胞在内的免疫细胞来治疗癌症已成为新的趋势，新疗法有望成为传统手术、化疗和放疗治疗无效的肿瘤患者新的治愈希望。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种BCMA的特异性抗体或其抗原结合片段，以及一种靶向BCMA的CAR修饰的免疫细胞及其制备方法和应用。
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种BCMA的特异性抗体或其抗原结合片段。
[0008]进一步，所述特异性抗体或其抗原结合片段与BCMA特异性地结合。
[0009]进一步，所述特异性抗体或其抗原结合片段包括重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3。
[0010]进一步，所述重链CDR1含有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或与SEQ IDNO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0011]进一步，所述重链CDR2含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ IDNO:2具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0012]进一步，所述重链CDR3含有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或与SEQ IDNO:3具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0013]进一步，所述轻链CDR1含有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与SEQ IDNO:4具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0014]进一步，所述轻链CDR2含有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ IDNO:5具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0015]进一步，所述轻链CDR3含有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与SEQ IDNO:6具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0016]进一步，所述BCMA的特异性抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。
[0017]进一步，所述BCMA的特异性抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
[0018]术语“抗体”在本专利技术中以最广义使用，而且明确覆盖单克隆抗体、多克隆抗体、自至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)，只要它们展现期望的生物学活性。
[0019]第二方面，本专利技术提供了一种分离的核酸分子或包含其的载体。
[0020]进一步，所述核酸分子编码前面所述的特异性抗体或其抗原结合片段。
[0021]进一步，所述载体包括质粒、慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、线性多核苷酸。
[0022]术语“核酸”等同于“多核苷酸”、“核苷酸”、“核酸分子”，它们之间可以在本专利技术中互换使用，指任何长度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸，核糖核苷酸，经过修饰的核苷酸或碱基，和/或其类似物，或者是可通过DNA或RNA聚合酶，或者通过合成反应掺入聚合物中的任何底物。
[0023]第三方面，本专利技术提供了一种BCMA的特异性抗体或其抗原结合片段的抗体衍生物。
[0024]进一步，所述抗体衍生物包括前面所述的特异性抗体或其抗原结合片段直接或间接的偶联至可检测标记物形成的复合物。
[0025]进一步，所述可检测标记物包括荧光色素、亲和素、顺磁原子、放射性同位素、酶标记物。
[0026]进一步，所述荧光色素包括荧光素、罗丹明、Texas红、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、多甲藻黄素
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叶绿素蛋白。
[0027]进一步，所述亲和素包括生物素、卵白亲和素、链亲和素、卵黄亲和素、类亲和素。
[0028]进一步，所述放射性同位素包括放射性碘、放射性铯、放射性铱、放射性钴。
[0029]进一步，所述酶标记物包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β
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半乳糖苷酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶。
[0030]第四方面，本专利技术提供了一种抗体或其抗原结合片段的偶联物。
[0031]进一步，所述偶联物包括前面所述的特异性抗体或其抗原结合片段与治疗剂偶联形成的偶联物。
[0032]进一步，所述治疗剂包括细胞毒性剂、激素制剂、靶向小分子制剂、蛋白酶体抑制
剂、化疗剂、溶瘤药物、细胞因子、共刺激分子的激活剂、抑制性分子的抑制剂。
[0033]第五方面，本专利技术提供了一种经过改造的宿主细胞或包含其的宿主细胞群体。
[0034]进一步，所述改造的宿主细胞包括前面所述的特异性抗体或其抗原结合片段，或本专利技术第二方面所述的核酸分子或包含其的载体。
[0035]进一步，所述宿主细胞群体还包括所述改造的宿主细胞之外的宿主细胞。
[0036]进一步，所述改造的宿主细胞包括原核细胞、真核细胞。
[0037]进一步，所述原核细胞包括细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次氏体。
[0038]进一步，所述细菌包括大肠杆菌、枯草杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、假单胞菌属、链霉菌、葡萄球菌。
[0039]进一步，所述真核细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母细胞。
[0040]第六方面，本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种BCMA的特异性抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述特异性抗体或其抗原结合片段与BCMA特异性地结合；优选地，所述特异性抗体或其抗原结合片段包括重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；优选地，所述重链CDR1含有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列；优选地，所述重链CDR2含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少70％同一性的氨基酸序列；优选地，所述重链CDR3含有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3具有至少70％同一性的氨基酸序列；优选地，所述轻链CDR1含有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4具有至少70％同一性的氨基酸序列；优选地，所述轻链CDR2含有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少70％同一性的氨基酸序列；优选地，所述轻链CDR3含有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:6具有至少70％同一性的氨基酸序列；优选地，所述BCMA的特异性抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；优选地，所述BCMA的特异性抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。2.如下任意一项所述的物质：1)一种分离的核酸分子或包含其的载体，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段；优选地，所述载体包括质粒、慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、线性多核苷酸；2)一种BCMA的特异性抗体或其抗原结合片段的抗体衍生物，其特征在于，所述抗体衍生物包括权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段直接或间接的偶联至可检测标记物形成的复合物；优选地，所述可检测标记物包括荧光色素、亲和素、顺磁原子、放射性同位素、酶标记物；优选地，所述荧光色素包括荧光素、罗丹明、Texas红、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、多甲藻黄素
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叶绿素蛋白；优选地，所述亲和素包括生物素、卵白亲和素、链亲和素、卵黄亲和素、类亲和素；优选地，所述放射性同位素包括放射性碘、放射性铯、放射性铱、放射性钴；优选地，所述酶标记物包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β
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半乳糖苷酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶；3)一种抗体或其抗原结合片段的偶联物，其特征在于，所述偶联物包括权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段与治疗剂偶联形成的偶联物；优选地，所述治疗剂包括细胞毒性剂、激素制剂、靶向小分子制剂、蛋白酶体抑制剂、化疗剂、溶瘤药物、细胞因子、共刺激分子的激活剂、抑制性分子的抑制剂；4)一种经过改造的宿主细胞或包含其的宿主细胞群体，其特征在于，所述改造的宿主
细胞包括权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段，或权利要求2所述的核酸分子或包含其的载体；优选地，所述宿主细胞群体还包括所述改造的宿主细胞之外的宿主细胞；优选地，所述改造的宿主细胞包括原核细胞、真核细胞；优选地，所述原核细胞包括细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次氏体；优选地，所述细菌包括大肠杆菌、枯草杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、假单胞菌属、链霉菌、葡萄球菌；优选地，所述真核细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母细胞。3.一种检测BCMA的产品，其特征在于，所述产品包括权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段或权利要求2中2)所述的抗体衍生物；优选地，所述产品包括试剂盒、芯片或试纸。4.一种靶向BCMA的CAR，其特征在于，所述CAR包括靶向BCMA的胞外抗原结合域，所述胞外抗原结合域包括权利要求1中所述的特异性抗体或其抗原结合片段的重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；优选地，所述胞外抗原结合域包括权利要求1中所述的特异性抗体或其抗原结合片段的重链可变区；优选地，所述胞外抗原结合域包括权利要求1中所述的特异性抗体或其抗原结合片段的轻链可变区；优选地，所述胞外抗原结合域中的重链可变区和轻链可变区之间由linker连接；优选地，所述linker的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；优选地，所述胞外抗原结合域的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；优选地，所述CAR还包括铰链区、跨膜结构域、共刺激结构域、胞内信号传导结构域中的一种或多种；优选地，所述铰链区是如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列；优选地，所述跨膜结构域是如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列；优选地，所述共刺激结构域是如SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列；优选地，所述胞内信号传导结构域是如SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列；优选地，所述CAR结构完整的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。5.一种核酸分子或包含其的载体，其特征在于，所述核酸分子包括编码权利要求4所述的CAR；优选地，所述载体包括质粒、慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、线性多核苷酸。6.一种经过改造的宿主细胞或包含其的宿主细胞群体，其特征在于，所述改造的宿主细胞或包含其的宿主细胞群体包括权利要求4所述的CAR、权利要求5所述的核酸分子或包含其的载体；优选地，所述宿主细胞群体还包含所述改造的宿主细胞之外的宿主细胞；优选地，所述改造的宿主细胞包括原核细胞、真核细胞；优选地，所述原核细胞包括细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次氏体；优选地，所述细菌包括大肠杆菌、枯草杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、假单胞菌属、链霉菌、葡
萄球菌；优选地，所述真核细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母细胞；优选地，所述哺乳动物细胞包括成纤维细胞、淋巴细胞、上皮细胞、成髓细胞；优选地，所述淋巴细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞；优选地，所述载体包括质粒、慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、线性多核苷酸；优选地，所述载体为质粒载体；优选地，所述质粒载体是pLenti
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puro。7.如下任一种方法，其特征在于，所述方法包括：(1)一种生产权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：培养权利要求2中4)所述的改造的宿主细胞或包含其的宿主细胞群体，从培养物中分离出权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段；(2)一种非诊断和非治疗目的检测待测样品中BCMA或其片段的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将待测样品与权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段接触或将待测样品与权利要求2中2)所述的抗体衍生物接触，检测BCMA或其片段与权利要求1所述的特异性抗体或其抗原结合片段或权利要求2中2)所述的抗体衍生物的复合物的形成；(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘永峰，芦志华，
申请(专利权)人：北京奇迈永华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：