CBS基因在制备糖尿病视网膜病变治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了CBS基因在制备糖尿病视网膜病变治疗药物中的应用，本发明专利技术通过动物实验验证发现，所述CBS基因的过表达可显著延缓细胞衰老，维持细胞年轻状态，缓解血管糖基化，抑制血管内皮细胞和周细胞的凋亡，对糖尿病视网膜病变具有较好的治疗效果，为本领域关于糖尿病视网膜病变治疗的研究提供了新思路、新手段和技术支持，具有良好的临床应用前景。具有良好的临床应用前景。具有良好的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
CBS基因在制备糖尿病视网膜病变治疗药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体地，本专利技术涉及CBS基因在制备糖尿病视网膜病变治疗药物中的应用。

技术介绍

[0002]糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy，DR)是糖尿病性微血管病变中最严重的并发症之一，已成为当前全球重要的致盲眼病。DR的发病主要是微血管病变，表现为视网膜微动脉瘤的形成，视网膜出血、渗出、视网膜新生血管形成、玻璃体积血及玻璃体视网膜增殖，最终可导致患者视功能不可逆的丧失。新生血管的产生是增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative Diabetic Retinopathy，PDR)的标志，也是影响视力预后的重要原因。临床上主要通过全视网膜光凝术(panretinal photocoa gulation，PRP)及眼部注射干预血管新生相关分子(靶点)药物达到缓解DR病程的作用，但尚缺乏有效控制DR发生发展的治疗方法。既往的研究表明DR的发生和发展与高糖环境、组织缺氧、氧化应激损伤和慢性炎症过程诱发的相关信号通路、相关基因表达和调控功能异常有关，尽管相关研究学者在该领域进行了广泛的研究，但是关于其发病机制至今仍未完全明了。
[0003]胱硫醚
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β
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合成酶(Cystathionine
‑
β
‑
synthase，CBS)是同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)代谢过程中的关键酶之一，CBS由四个相同的亚基构成同源四聚体，是一种磷酸吡哆醛(Pyridoxal phosphate，PLP)依赖性酶。在维生素B6的催化下，CBS能够催化丝氨酸与Hcy反应合成胱硫醚(Cystathionine，D
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(P))。作为影响Hcy水平的一种关键酶，CBS在Hcy转变成胱硫醚的转硫酸路径中起着重要的作用，该酶在酶循环方法学中，常用于血液中同型半胱氨酸的检测。CBS的活性降低，会导致胱硫醚
‑
β
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合成酶缺乏症(Cystathionine
‑
β
‑
synthase deficiency，CBSD)，从而可引起高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia，HHcy)，进而导致众多器官和组织，包括眼、骨骼、血管、中枢神经系统等的损伤。迄今为止，尚未见CBS基因在制备糖尿病视网膜病变治疗药物中的应用的相关报道。

技术实现思路

[0004]为了弥补本领域存在的技术空白，本专利技术的目的在于提供CBS基因在制备糖尿病视网膜病变治疗药物中的应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]本专利技术的第一方面提供了CBS基因在制备血管生成性眼病治疗和/或预防药物中的应用。
[0007]进一步，所述CBS基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
[0008]优选地，所述CBS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
[0009]优选地，所述血管生成性眼病包括糖尿病视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、年龄相关的黄斑变性、视网膜静脉阻塞后的黄斑水肿、血管性视网膜病变、脉络膜新血管形成、视
网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、角膜新血管形成；
[0010]更优选地，所述血管生成性眼病为糖尿病视网膜病变。
[0011]本文中所述的“治疗和/或预防”，是指预防、逆转、缓和、抑制该术语所适用的失调或病症或者这种失调或病症的一种或多种症状的进展，治疗疾病或病状包括改善特定疾病或病状的至少一种症状，即便基础病理生理学不受影响，例如，本文中所使用“治疗和/或预防血管生成性眼病”包括以下一种或多种：(1)预防血管生成性眼病的发生；(2)抑制血管生成性眼病的发展；(3)治愈血管生成性眼病；(4)缓解血管生成性眼病患者的相关症状；(5)减轻血管生成性眼病的严重程度；(6)防止血管生成性眼病的复发。
[0012]本专利技术的第二方面提供了一种重组病毒载体。
[0013]进一步，所述重组病毒载体包含CBS基因；
[0014]优选地，所述CBS基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
[0015]优选地，所述CBS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
[0016]优选地，所述重组病毒载体包括腺相关病毒(AAV)载体、腺病毒载体、辅助病毒依赖性腺病毒载体、逆转录病毒载体、单纯疱疹病毒载体、慢病毒载体、痘病毒载体、日本血凝病毒
‑
脂质体(HVJ)复合物载体、Moloney鼠白血病病毒载体、基于HIV的病毒载体；
[0017]更优选地，所述重组病毒载体为腺相关病毒载体；
[0018]最优选地，所述腺相关病毒载体包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12和/或其杂合体；
[0019]最优选地，所述重组病毒载体为重组AAV1载体；
[0020]最优选地，所述重组病毒载体为将表达CBS基因的质粒载体和AAV1共转染到细胞中后收获得到的感染性病毒颗粒AAV1
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SFFV
‑
CBS
‑
T2A
‑
mCherry；
[0021]最优选地，所述细胞为人胚肾细胞系；
[0022]最优选地，所述人胚肾细胞系包括293FT、293、293T、293A；
[0023]最优选地，所述人胚肾细胞系为293FT；
[0024]最优选地，所述表达CBS基因的质粒载体为pSFFV
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CBS
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T2A
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mCherry质粒载体；
[0025]最优选地，所述pSFFV
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CBS
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T2A
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mCherry质粒载体为将CBS基因序列插入pSFFV
‑
T2A
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mCherry质粒的pSFFV和T2A之间得到的。
[0026]本专利技术的第三方面提供了一种本专利技术第二方面所述的重组病毒载体的制备方法。
[0027]进一步，所述方法包括如下步骤：
[0028](1)pSFFV
‑
CBS
‑
T2A
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mCherry质粒载体的构建；
[0029](2)将步骤(1)中构建得到的pSFFV
‑
CBS
‑
T2A
‑
mCherry质粒载体和AAV1共转染到细胞中后培养所述细胞；
[0030](3)收集细胞上清获得感染性病毒颗粒，即为重组病毒载体AAV1
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SFFV
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CBS
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T2A
‑
mCherry；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CBS基因在制备血管生成性眼病治疗和/或预防药物中的应用，其特征在于，所述CBS基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；优选地，所述CBS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；优选地，所述血管生成性眼病包括糖尿病视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、年龄相关的黄斑变性、视网膜静脉阻塞后的黄斑水肿、血管性视网膜病变、脉络膜新血管形成、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、角膜新血管形成；更优选地，所述血管生成性眼病为糖尿病视网膜病变。2.一种重组病毒载体，其特征在于，所述重组病毒载体包含CBS基因；优选地，所述CBS基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；优选地，所述CBS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；优选地，所述重组病毒载体包括腺相关病毒(AAV)载体、腺病毒载体、辅助病毒依赖性腺病毒载体、逆转录病毒载体、单纯疱疹病毒载体、慢病毒载体、痘病毒载体、日本血凝病毒
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脂质体(HVJ)复合物载体、Moloney鼠白血病病毒载体、基于HIV的病毒载体；更优选地，所述重组病毒载体为腺相关病毒载体；最优选地，所述腺相关病毒载体包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12和/或其杂合体；最优选地，所述重组病毒载体为重组AAV1载体；最优选地，所述重组病毒载体为将表达CBS基因的质粒载体和AAV1共转染到细胞中后收获得到的感染性病毒颗粒AAV1
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SFFV
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CBS
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T2A
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mCherry；最优选地，所述细胞为人胚肾细胞系；最优选地，所述人胚肾细胞系包括293FT、293、293T、293A；最优选地，所述人胚肾细胞系为293FT；最优选地，所述表达CBS基因的质粒载体为pSFFV
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CBS
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T2A
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mCherry质粒载体；最优选地，所述pSFFV
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CBS
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T2A
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mCherry质粒载体为将CBS基因序列插入pSFFV
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T2A
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mCherry质粒的pSFFV和T2A之间得到的。3.一种权利要求2所述的重组病毒载体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)pSFFV
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CBS
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T2A
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mCherry质粒载体的构建；(2)将步骤(1)中构建得到的pSFFV
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CBS
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T2A
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mCherry质粒载体和AAV1共转染到细胞中后培养所述细胞；(3)收集细胞上清获得感染性病毒颗粒，即为重组病毒载体AAV1
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SFFV
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CBS
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T2A
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mCherry；优选地，步骤(1)中所述的pSFFV
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CBS
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T2A
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mCherry质粒载体为将所述CBS基因序列插入pSFFV
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【专利技术属性】
技术研发人员：蔡晓琛，顾雨春，谭帅帅，苏冰，吴理达，
申请(专利权)人：呈诺再生医学科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：