一组重组酶聚合酶扩增检测传染病病原的探针引物组、试剂盒及检测体系和应用制造技术

本发明专利技术提供了一组重组酶聚合酶扩增检测传染病病原的探针引物组、试剂盒及检测体系和应用，涉及病原体检测技术领域。本发明专利技术提供了一组重组酶聚合酶扩增检测传染病病原的探针引物组，所述探针引物组可在39℃下20min内完成链置换反应，具有操作简单、扩增速度快、灵敏度高和特异性强等特点，极具应用前景。极具应用前景。极具应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一组重组酶聚合酶扩增检测传染病病原的探针引物组、试剂盒及检测体系和应用


[0001]本专利技术属于病原体检测
，具体涉及一组重组酶聚合酶扩增检测传染病病原的探针引物组、试剂盒及检测体系和应用。

技术介绍

[0002]全球化背景下，存在各种新发突发传染病威胁，目前已知的烈性传染病病原包括埃博拉病毒(Ebola virus)、马尔堡病毒(Marburg virus)、黄热病毒(Flavivirus)、裂谷热病毒(Rift Valley Fever Virus，RVFV)和拉沙热病毒(Lassa fever virus)。
[0003]埃博拉病毒属丝状病毒科，呈长丝状体，单股负链RNA病毒。借由体液和血液传播是一种能引起人类和其他灵长类动物产生埃博拉出血热的烈性传染病病毒，其引起的埃博拉出血热是当今世界上最致命的病毒性出血热，生物安全等级为4级。病毒潜伏期可达2～21天，通常只有5～10天，传染性强，病死率最高达90％。在世界范围内已造成10次具有规模的爆发流行，其中2014年爆发于西非的埃博拉疫情造成了一万多人死亡。
[0004]马尔堡病毒结构为典型的丝状病毒，形似丝线，直径通常一样，但长度介于80nm至14000nm。马尔堡病毒可透过体液，包括血液、排泄物、唾液及呕吐物传播。传染能力强，诱发的马尔堡出血热病死率为25％～100％。1967年于吸得马尔堡地区首次发现马尔堡病毒，31人发病其中7人死亡。1998年～2000年刚果民主共和国发生马尔堡病毒大爆发，149宗个案中123人死亡。2004年起近一年马尔堡病毒在非洲安哥拉爆发，超过300人死亡。2021年世界卫生组织表示，西非国家几内亚再次出现“马尔堡出血热”死亡病例。
[0005]黄热病毒属于黄热病科黄热病毒属，为RNA病毒，经蚊叮咬传播，具有嗜内脏性及嗜神经性。黄热病主要流行于非洲和中南美洲的热带和亚热带地区，全年均可发病。
[0006]裂谷热病毒归布尼亚病毒科白蛉热病毒属，病毒主要经蚊叮咬或染疫动物传播给人，多发生于大雨季节。裂谷热病毒引起的出血病例病死率大约为50％。
[0007]拉沙热病毒属于第四级病毒，流行于部分西非地区，会导致病毒性出血热。拉沙热为人畜共患病，80％左右的人感染为无症状，总病死率为1％，但在住院患者中高达15％，该病在妊娠后期超过80％的孕产妇死亡和(或)胎儿死亡。由于拉沙热在病程初期很难与包括伤寒、疟疾、志贺菌病、黄热病和其他病毒性出血热等病症进行区分，所以快速准确的检测诊断十分关键。
[0008]烈性病病毒的大规模的传播流行，很大原因在于未能及时准确的检测诊断，未能采取及时有效的隔离和辅助治疗措施，造成病情延误和疫情蔓延。烈性传染病的快速检测是及时鉴定病原和隔离传染源的关键，对于此类传染病疫情的科学防控意义重大。快速检测也是及时发现传染源、有效采取隔离措施，防止疫情蔓延的关键。虽然目前的荧光定量PCR技术能够快速、准确检测出病毒核酸，但是它需要有热循环系统的元件，这通常依赖于大型仪器，不利于快速检测。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一组重组酶聚合酶扩增(RPA)检测传染病病原的探针引物组、试剂盒及检测体系和应用，具有良好的灵敏度和特异性，扩增快速、高效，且操作简便。
[0010]本专利技术提供了一组重组酶聚合酶扩增检测传染病病原的探针引物组，针对埃博拉病毒设计的探针引物组包括引物Ebola
‑
F、引物Ebola
‑
F和探针Ebola
‑
P；所述引物Ebola
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物Ebola
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针Ebola
‑
P的核苷酸序序列如SEQ ID NO.3所示；
[0011]针对马尔堡病毒设计的探针引物组包括引物Marburg
‑
F、引物Marburg
‑
R和探针Marburg
‑
P；所述引物Marburg
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述引物Marburg
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述探针Marburg
‑
P的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
[0012]针对黄热病毒设计的探针引物组包括引物YFV
‑
F、引物YFV
‑
R和探针YFV
‑
P；所述引物YFV
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述引物YFV
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述探针YFV
‑
P的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；
[0013]针对裂谷热病毒设计的探针引物组包括引物RVFV
‑
F、引物RVFV
‑
R和探针RVFV
‑
P；所述引物RVFV
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，所述引物RVFV
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，所述探针RVFV
‑
P的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
[0014]针对拉沙热病毒设计的探针引物组包括引物Lassa
‑
F、引物Lassa
‑
R和探针Lassa
‑
P；所述引物Lassa
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，所述引物Lassa
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示，所述探针Lassa
‑
P的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。
[0015]本专利技术还提供了一种检测烈性传染病病原的重组酶聚合酶扩增体系，包括权利要求1中的任一项探针引物组、PEG缓冲液、NTP、dNTP、重组酶、聚合酶、醋酸镁、模板和无RNA酶水。
[0016]优选的，所述体系以50μL计，包括：10μM上游引物2μL、10μM下游引物2μL、10μM探针0.6μL、280mM醋酸镁2.5μL、PEG缓冲液25μL，5μL模板和余量的无RNA酶水。
[0017]优选的，所述模板包括RNA模板。
[0018]本专利技术还提供了一种检测烈性传染病病原的重组酶聚合酶扩增试剂盒，包括上述探针引物组，且针对不同病毒设计的探针引物组独立包装。
[0019]优选的，所述试剂盒中还包括PEG缓冲液、NTP、dNTP、重组酶、聚合酶、醋酸镁和无RNA酶水。
[0020]本专利技术还提供了上述探针引物组或上述体系或上述试剂盒在制备烈性传染病诊断工具中的应用。
[0021]有益效果：本专利技术提供了一组重组酶聚合酶扩增检测传染病病原的探针引物组，能够灵敏并特异的扩增和检测埃博拉病毒的NP基因、马尔堡病毒的N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组重组酶聚合酶扩增检测传染病病原的探针引物组，其特征在于，针对埃博拉病毒设计的探针引物组包括引物Ebola
‑
F、引物Ebola
‑
F和探针Ebola
‑
P；所述引物Ebola
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物Ebola
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针Ebola
‑
P的核苷酸序序列如SEQ ID NO.3所示；针对马尔堡病毒设计的探针引物组包括引物Marburg
‑
F、引物Marburg
‑
R和探针Marburg
‑
P；所述引物Marburg
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述引物Marburg
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述探针Marburg
‑
P的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；针对黄热病毒设计的探针引物组包括引物YFV
‑
F、引物YFV
‑
R和探针YFV
‑
P；所述引物YFV
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述引物YFV
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述探针YFV
‑
P的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；针对裂谷热病毒设计的探针引物组包括引物RVFV
‑
F、引物RVFV
‑
R和探针RVFV
‑
P...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵荣涛，郭旭东，刘婉莹，王超，石华，杨益，袁正泉，宋宏彬，
申请(专利权)人：中国人民解放军疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：