一种检测猴痘病毒的试剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种检测猴痘病毒的试剂及其应用。本发明专利技术提供的检测猴痘病毒的试剂包括：针对猴痘病毒A27L基因的LAMP检测引物组；和/或针对猴痘病毒F3L基因的LAMP检测引物组。本发明专利技术提供的用于检测猴痘病毒的试剂能够实现对猴痘病毒的特异性检测，本发明专利技术提供的LAMP试剂盒的检测操作简单、特异性强、灵敏度高，可以快速且高效对猴痘病毒进行检测，可以用于基层医疗卫生单位和各疾病预防控制中心筛查和检测猴痘病毒。检测猴痘病毒。检测猴痘病毒。

【技术实现步骤摘要】
一种检测猴痘病毒的试剂及其应用


[0001]本专利技术是关于生物
中病毒的分子生物学检测方法，具体涉及一种检测猴痘病毒的试剂及其应用。

技术介绍

[0002]猴痘病毒是痘病毒科正痘病毒属的线性双链DNA病毒，是现已灭绝的天花病毒的近源病毒。近些年，猴痘病毒已在多个国家出现，发病率呈现升高趋势。建立猴痘病毒的快速检测方法非常必要。
[0003]猴痘病毒的核酸检测方法常见的是荧光定量PCR，虽然具有特异性强、灵敏度高等特点，但是所需实验仪器昂贵，实验操作相对复杂，对实验人员专业度要求高，不适用于在专业人员缺乏、实验条件相对简陋的基层实验室开展。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供一种检测猴痘病毒的试剂及其应用。
[0005]本专利技术的一个目的在于提供一种检测猴痘病毒的试剂。
[0006]本专利技术的另一目的在于提供一种用于检测猴痘病毒的试剂盒。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供所述试剂及试剂盒用于检测猴痘病毒的相关应用。
[0008]一方面，本专利技术提供一种检测猴痘病毒的试剂，该试剂包括：
[0009]针对猴痘病毒A27L基因的LAMP检测引物组；和/或
[0010]针对猴痘病毒F3L基因的LAMP检测引物组。
[0011]根据本专利技术的具体实施方案，其中，所述A27L基因包括如SEQ ID NO:1所示的序列；
[0012]所述F3L基因包括如SEQ ID NO:7所示的序列。
[0013]根据本专利技术的具体实施方案，其中，针对猴痘病毒A27L基因的LAMP检测引物组包括SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物；
[0014]其中，所述如SEQ ID NO:2所示序列的引物为外部引物F3引物；
[0015]所述如SEQ ID NO:3所示序列的引物为外部引物B3引物；
[0016]所述如SEQ ID NO:4所示序列的引物为内部引物FIP引物；
[0017]所述如SEQ ID NO:5所示序列的引物为内部引物BIP引物；
[0018]所述如SEQ ID NO:6所示序列的引物为环导引物LB引物。
[0019]优选地，所述引物组还包括F3L基因引物组，所述F3L基因引物组包括如SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示序列的引物；
[0020]其中，所述如SEQ ID NO:8所示序列的引物为外部引物F3引物；
[0021]所述如SEQ ID NO:9所示序列的引物为外部引物B3引物；
[0022]所述如SEQ ID NO:10所示序列的引物为内部引物FIP引物；
[0023]所述如SEQ ID NO:11所示序列的引物为内部引物BIP引物；
[0024]所述如SEQ ID NO:12所示序列的引物为环导引物LF引物。
[0025]另一方面，本专利技术还提供了一种用于检测猴痘病毒的试剂盒，其包含本专利技术所述的试剂。
[0026]本专利技术提供的用于检测猴痘病毒的引物组，是LAMP专用引物，能够实现高效、快速、高特异性地检测猴痘病毒，且操作简单，灵敏度高，结果鉴定简便。
[0027]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的用于检测猴痘病毒的试剂盒中，还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10
×
Thermopol反应缓冲液、MgSO4、betaine、dNTP，Bst DNA聚合酶。
[0028]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的用于检测猴痘病毒的试剂盒中，还包含阳性对照和/或阴性对照；
[0029]优选地，所述阳性对照包含猴痘病毒基因组DNA，优选为猴痘病毒基因A27L的质粒DNA，以及猴痘病毒基因F3L的质粒DNA；所述阴性对照为不含猴痘病毒基因组DNA的反应体系。
[0030]另一方面，本专利技术还提供了非诊断目的的所述的试剂或所述的试剂盒在检测样品中是否存在猴痘病毒的应用。
[0031]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的非诊断目的的试剂或试剂盒在检测样品中是否存在猴痘病毒的应用中，所述引物组是用于LAMP反应。
[0032]优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的引物的终浓度独立地为2
‑
8pmol，SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示序列的引物的终浓度独立地为24
‑
36pmol，SEQ ID NO:6所示序列的引物的终浓度独立地为12
‑
18pmol。
[0033]更优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3所示序列的引物的终浓度独立地为8pmol，SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5所示序列的引物的终浓度独立地为32pmol，SEQ ID NO:6所示序列的引物的终浓度独立地为16pmol。
[0034]优选地，F3L引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9所示序列的引物的终浓度独立地为2
‑
8pmol，SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11所示序列的引物的终浓度独立地为24
‑
36pmol，SEQ ID NO:12所示序列的引物的终浓度独立地为12
‑
18pmol。
[0035]更优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9所示序列的引物的终浓度独立地为8pmol，SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11所示序列的引物的终浓度独立地为32pmol，SEQ ID NO:12所示序列的引物的终浓度独立地为16pmol。
[0036]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的非诊断目的的试剂或试剂盒在检测样品中是否存在猴痘病毒的应用中，LAMP反应体系还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10
×
Thermopol反应缓冲液2.5μl、100mM MgSO41.5μl、5mMbetaine 4μl、10mM dNTP 3.5μl，Bst DNA聚合酶1μl，ddH2O补至25μl。优选地，所述基础反应试剂在25μl反应体系中的使用量为：12.5μl。
[0037]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的非诊断目的的试剂或试剂盒在检测样品中是否存在猴痘病毒的应用中，所述检测包括以下步骤：
[0038]S1：提取待测样品DNA；
[0039]S2：反应体系配制：25μl反应体系包含2μl待测样品DNA、10
×
Thermopol反应缓冲
液2.5μl、100mM M本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测猴痘病毒的试剂，该试剂包括：针对猴痘病毒A27L基因的LAMP检测引物组；和/或针对猴痘病毒F3L基因的LAMP检测引物组。2.根据权利要求1所述的试剂，其中，所述A27L基因包括如SEQ ID NO:1所示的序列；所述F3L基因包括如SEQ ID NO:7所示的序列。3.根据权利要求1或2所述的试剂，其中，针对猴痘病毒A27L基因的LAMP检测引物组包括如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物；其中，所述如SEQ ID NO:2所示序列的引物为外部引物F3引物；所述如SEQ ID NO:3所示序列的引物为外部引物B3引物；所述如SEQ ID NO:4所示序列的引物为内部引物FIP引物；所述如SEQ ID NO:5所示序列的引物为内部引物BIP引物；所述如SEQ ID NO:6所示序列的引物为环导引物LB引物。4.根据权利要求3所述的试剂，其中，针对猴痘病毒F3L基因的LAMP检测引物组包括如SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示序列的引物；其中，所述如SEQ ID NO:8所示序列的引物为外部引物F3引物；所述如SEQ ID NO:9所示序列的引物为外部引物B3引物；所述如SEQ ID NO:10所示序列的引物为内部引物FIP引物；所述如SEQ ID NO:11所示序列的引物为内部引物BIP引物；所述如SEQ ID NO:12所示序列的引物为环导引物LF引物。5.一种用于检测猴痘病毒的试剂盒，其包含权利要求1
‑
4任一项所述的试剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10
×
Thermopol反应缓冲液、MgSO4、betaine、dNTP、Bst DNA聚合酶。7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包含阳性对照和/或阴性对照；优选地，所述阳性对照包含猴痘病毒基因A27L的质粒DNA，以及包含猴痘病毒基因F3L的质粒DNA，所述阴性对照为不含猴痘病毒基因组DNA的反应体系。8.一种非诊断目的的权利要求1
‑
4任一项所述的试剂或权利要求5
‑
7任一项所述的试剂盒在检测样品中是否存在猴痘病毒的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其中，所述引物组是用于LAMP反应；优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的引物的终浓度独立地为2
‑
8pmol，SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示序列的引物的终浓度独立地为24
‑
36pmol，SEQ ID NO:6所示序列的引物的终浓度独立地为12
‑
18pmol；更优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:2、SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁静，冯俊霞，薛冠华，闫超，崔晶花，冯燕玲，赵汉青，甘霖，范政，杜冰，崔晓虎，
申请(专利权)人：首都儿科研究所，
类型：发明
国别省市：