一种高产苯乳酸的瑞士乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种从镇江香醋生产工艺的过程中分离筛选得到的高产苯乳酸的瑞士乳杆菌LactobacillushelveticusHSCY2052菌株。公开了将该菌株应用于食醋发酵，食醋中的苯乳酸、乳酸的含量显著提高，产品的风味和品质有很大的改善，为食醋保健功效的开发提供了新的途径。途径。途径。

【技术实现步骤摘要】
HSCY2052菌株或本专利技术第二方面所述的微生物菌剂在食醋酿造中的应用。
[0009]进一步地，所述食醋酿造包括固态发酵和液态发酵。
[0010]进一步地，所述食醋包括发酵包括镇江香醋、山西老陈醋。
[0011]本专利技术第四方面提供了一种食醋酿造的方法，其特征在于，在醋酸发酵阶段接种本专利技术第一方面所述的菌株或本专利技术第二方面所述的微生物菌剂。
[0012]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0013]本专利技术首次从食醋发酵体系中筛选获得产苯乳酸的瑞士乳杆菌，且该菌株代谢产生的苯乳酸含量为2.4g/L；将其应用于食醋发酵，结果表明食醋中的苯乳酸、乳酸的含量显著提高，产品的风味和品质有很大的改善，为食醋保健功效的开发提供了新的途径。
附图说明
[0014]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更显著：
[0015]图1显示本专利技术的瑞士乳杆菌HSCY2052的平板培养菌落形态；
[0016]图2为本专利技术的瑞士乳杆菌HSCY2052的结晶紫染色的菌体形态。
具体实施方式
[0017]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例的附图，对本专利技术实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本专利技术的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0018]除非另作定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本专利技术专利申请说明书以及权利要求书中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性，而只是用来区分不同的组成部分。同样，“一个”或者“一”等类似词语也不表示数量限制，而是表示存在至少一个。
[0019]实施例1HSCY2052的分离、纯化、鉴定
[0020]MRS固体培养基的组成及制备方法为：胰蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，碳酸钙20.0g，苯丙酮酸3.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL，pH 6.2～6.6，115℃灭菌20min。MRS液体培养基在MRS固体培养基的基础上省略琼脂。
[0021](1)产酸菌株的分离与纯化
[0022]分别称取镇江香醋醋醅样品10g，置于90mL已灭菌的MRS液体培养基中，温度37℃、转速200r/min，振荡培养20min后，对样品进行10倍梯度稀释，选取稀释梯度为10
‑3、10
‑4、10
‑5和10
‑6的稀释液，各梯度稀释液各吸取100μL涂布MRS固体培养基平板，37℃倒置培养48h。挑取MRS固体培养基平板上产透明圈较大的菌落，将单个菌落平板划线分离3次获得纯培养物，4℃冰箱保存以供试用。
[0023](2)高产苯乳酸菌株的初筛
[0024]将上述获得的产酸菌进行高产苯乳酸菌株的初筛，将菌株划线接种于MRS固体培养基平板，37℃培养48h。然后倾注10mL半固体LB培养基于平板上层。将金黄色葡萄球菌配
成浓度为106CFU/mL的菌悬液，均匀涂布于上层培养基，凝固后，37℃培养24h，观察抑菌情况。
[0025](3)高产苯乳酸菌株的复筛
[0026]挑取上述抑菌圈较大的单菌落，于MRS液体培养基，37℃培养48h。得到的发酵液经过8000r/min离心15min后取上清液，上清液0.22μm滤膜过滤后，使用高效液相色谱法测定液体中苯乳酸的浓度，筛选出高产苯乳酸菌株，高效液相色谱工作条件：流动相为0.1％的甲酸水溶液(A)和乙腈(B)；采用梯度洗脱：0～15min，80％A；15～20min，10％A；20.01～25min，80％A；流速1mL/min；进样量10μL；柱温40℃；检测器为二极管阵列检测器；检测波长210nm。以苯乳酸标准品作为外标，进行定量分析。经测定，菌株HSCY2052发酵液中苯乳酸含量最高，达到2.4g/L。
[0027](4)菌株形态学鉴定
[0028]菌株HSCY2052在37℃培养48h后，平板上的菌落形态为乳白色、圆形、凸起、光滑、不透明、湿润、易挑取。在显微镜下观察菌体形态为长杆状，单独、成对或短链排列，从菌落形态和菌体形态上初步判断为一种乳杆菌。
[0029](5)菌株分子生物学鉴定
[0030]纯化筛选得到的细菌，取指数生长期的新鲜菌液，离心收集菌体，采用基因组抽提试剂盒提取基因组DNA。采用细菌通用引物P0
‑
P6(中国硕士学位论文全文数据库，朱其瀚，“镇江香醋发酵过程中微生物分离及其产酸特性”，2008年)扩增其16S rDNA全长序列。PCR扩增产物的测序由上海生工生物技术公司完成，测得的序列如SEQ ID NO：1所示。将测得的16S rDNA序列SEQ ID NO：1，在NCBI数据库中进行BLAST比对确定其种属。筛得的菌株16S rDNA全长序列为1116bp，与其具有最高同源性的菌株为Lactobacillus helveticus，相似度为99.73％，将该菌株命名为瑞士乳杆菌HSCY2052。
[0031]上述菌株于2022年6月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏登记入册的编号为CGMCC 25010，其分类命名分别为Lactobacillus helveticus。
[0032]实施例2瑞士乳杆菌HSCY2052在镇江香醋酿造中的应用
[0033]1、菌株的扩大培养
[0034]一级种子液的制备：按照1％(v/v)的接种量，将纯化后、处于对数生长期的瑞士乳杆菌HSCY2052菌液接种到MRS培养基中，温度37℃，静置培养24h。
[0035]二级种子液的制备：选用50L液态发酵罐，加水30L，搅拌速度为120r/min，将水加热到90℃，加入经粉碎并过100目筛得到的米粉10kg，加入2万U/mL高温α
‑
淀粉酶，添加量为3.0mL，保温35min得到醪液；然后将醪液温度降至55℃，加入5万U/g糖化酶，添加量为0.50g，保温35min，制得糖化液；在所制备的糖化液中添加1
‰
(w/v)的脱脂奶粉，115℃灭菌20min；冷却至30℃后，按照3％(v/v)的接种量接入一级种子液，控制温度37℃，罐内压强为0.05MPa，搅拌速度为60r/min。发酵结束后，乳酸菌的活菌数达到109CFU/mL。
[0036]2、酒精发酵
[0037]选取500kg大缸，倒入50kg糯米加水浸泡过夜。然后再将糯米捞出、冲净、沥干，再将糯米经蒸饭机蒸煮，得到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高产苯乳酸的瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus HSCY2052菌株，其特征在于保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏号为CGMCC No.25010，保藏日期为2022年6月6日。2.一种微生物菌剂，其特征在于，所述菌剂包括权利要求1所述的Lactobacillus helveticus HSCY2052菌株。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：张俊红，李信，陆荣松，陈雯，崔鹏景，王芸，朱杰，吴玲玲，黄天辉，
申请(专利权)人：江苏恒顺集团有限公司，
类型：发明
国别省市：