一种霍氏肠杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体涉及一种霍氏肠杆菌及其应用，具体为霍氏肠杆菌TY18，该霍氏肠杆菌TY18保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2022258。本发明专利技术提供的霍氏肠杆菌TY18对三唑酮、三唑醇、丙环唑、己唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑、腈菌唑、烯唑醇、氟硅唑9种农药均有降解效果。硅唑9种农药均有降解效果。硅唑9种农药均有降解效果。

【技术实现步骤摘要】
一种霍氏肠杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种霍氏肠杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]三唑酮，化学名称为1
‑
(4
‑
氯苯氧基)
‑
3,3
‑
二甲基
‑1‑
(1H
‑
1,2,4
‑
三唑
‑
l
‑
基)
ꢀ‑
α
‑
丁酮，又名粉锈宁，百里通，是一种生产上常用的内吸性广谱类三唑类杀菌剂，主要用于防治各种作物上的白粉病、锈病、叶枯病和灰霉病等多种真菌性病害，也可调节植物的生长。三唑酮在我国的使用量远高于其他三唑类农药，其原药总消费量占三唑类杀菌剂的30％以上。
[0003]在应用中发现，三唑酮的稳定性强，有很好的移动性和吸附性，在水体和土壤等环境中容易持续积累，造成土壤及水体环境污染。对破坏生态系统造成，甚至危及人体健康[刘娜,金小伟,穆云松,冯承莲,吴丰昌,王业耀.三唑酮在水环境中的环境行为、毒性效应及生态风险.生态毒理学报,2017,12(4):65
‑
75.]。美国环境保护署(US EPA 2006)经过调查发现，三唑酮急性经口对淡水鱼和无脊椎动物具有中等毒性，对啮齿动物在高剂量下被认定为致癌物和生殖毒性物，可损伤大鼠肝脏，且对人体具有致癌性，已被列为“潜在人类致癌物”。因此，如何降解三唑酮在环境中的残留备受关注。
[0004]对于农药污染的环境修复主要有物理修复、光化学修复、动植物和微生物修复等途径。其中微生物修复具有简便、快速、安全、高效的特点，且微生物种类多样、分布广泛，对环境适应性强，因此，将微生物用于环境中三唑酮的降解及污染环境的生物修复，具有很好的应用前景(田春燕,徐军,董丰收,刘新刚,吴小虎,郑永权.微生物降解三唑类杀菌剂研究进展.农药学学报,2016,18(2): 141
‑
150)。因此，不断研究新的菌株在降解三唑类杀菌剂方面具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术第一个方面提供一株霍氏肠杆菌，其保藏名称为霍氏肠杆菌TY18，保藏编号为CCTCC NO:M 2022258，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。
[0007]优选地，所述霍氏肠杆菌在降解三唑类农药中的用途。
[0008]本专利技术第二个方面提供一种所述霍氏肠杆菌的发酵方法，是将所述霍氏肠杆菌TY18接种于LB液体培养基中，28～32℃、pH 7.0～8.0下振荡培养14～18h。
[0009]本专利技术第三个方面提供了根据上述发酵方法得到的发酵液。
[0010]本专利技术第四个方面提供了发酵液在降解三唑类农药中的用途。
[0011]优选地，所述三唑类农药为三唑酮、三唑醇、丙环唑、己唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑、腈菌唑、烯唑醇、氟硅唑中的一种或几种。
[0012]本专利技术第五个方面提供一种用于降解三唑类农药的微生物菌剂，所述微生物菌剂包括上述霍氏肠杆菌株TY18和/或所述发酵液，以及可接受的辅料或载体。
[0013]本专利技术第六个方面提供一种所述霍氏肠杆菌的富集培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0014]取三唑类农药长期污染的土壤，接于含10mg/L三唑类农药的CSM富集培养液中，在28～32℃、160～200r/min下培养5～7d；
[0015]取上述接种土壤后的CSM富集培养液加入到含100mg/L三唑类农药的CSM 富集培养液中，培养5～7d；继代培养4～7次后，采用稀释涂平板法从中分离获得所述霍氏肠杆菌TY18；继续在含100mg/L三唑类农药的CSM固体培养基平板上于28～32℃下培养3～5d，即得纯化后的霍氏肠杆菌TY18单菌落。
[0016]优选地，所述CSM富集培养液按重量份数计是由以下原料制成：葡萄糖1份、KH2PO
4 0.5份、K2HPO
4 1.5份、NaCl 0.5份、MgSO4·
7H2O 0.5份、水1000 份；所述CSM富集培养液pH为7.0；
[0017]所述CSM固体培养基是向所述CSM富集培养液中加入15份琼脂，所述CSM 固体培养基pH为7.0。
[0018]优选地，所述土壤的接种量与所述含10mg/L三唑类农药的CSM富集培养液中三唑类农药的质量比为10000∶1～1.5；
[0019]所述接种土壤后的CSM富集培养液与所述含100mg/L三唑类农药的CSM 富集培养液的体积比为1∶8～10。
[0020]对比现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0021]本专利技术提供的霍氏肠杆菌TY18对三唑酮的降解率达到55.91％，对三唑醇、丙环唑、己唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑、腈菌唑、烯唑醇、氟硅唑8种农药也均有一定降解效果，降解率为26.63～43.93％。
[0022]生物保藏信息说明：
[0023]生物材料：TY18，分类学命名：霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaeechei)，已于2022年3月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：中国
·
武汉
·
武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2022258。
附图说明
[0024]图1是菌株TY18在NA培养基上28℃下培养2d的形态特征(A)和在CSM 培养基上对三唑酮的降解圈(B)；
[0025]图2是基于16S rRNA和gyrB基因序列构建菌株TY18的系统发育树图，A： 16S rRNA；B：gyrB基因；
[0026]图3是菌株TY18的生长曲线；
[0027]图4是菌株TY18对三唑酮的降解效果及生长量变化。
具体实施方式
[0028]下述实施例仅为本专利技术的优选技术方案，并不用于对本专利技术进行任何限制。对于本领域技术人员而言，本专利技术可以有各种更改和变化。凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。
[0029]以下给出本专利技术实施例中使用到的各种培养基的具体组成。
[0030]牛肉膏蛋白胨培养基(NA培养基)：蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g、NaCl 5.0g、蒸馏水1000mL、琼脂粉15g，pH 7.0。
[0031]LB液体培养基：蛋白胨10.0g、酵母粉5.0g、NaCl 5.0g、蒸馏水1000mL， pH 7.0。
[0032]CSM富集培养液：葡萄糖1.0g、KH2PO
4 0.5g、K2HPO
4 1.5g、NaCl 0.5g、 MgSO4·
7H2O 0.5g、水1000mL，pH 7.0。
[0033]筛选培养基(CSM固体培养基)：葡萄糖1.0g、KH2PO
4 0.5g、K2HPO
4 1.5g、 NaCl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株霍氏肠杆菌，其特征在于，其保藏名称为霍氏肠杆菌TY18，保藏编号为CCTCC NO:M 2022258，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。2.权利要求1所述霍氏肠杆菌在降解三唑类农药中的用途。3.一种权利要求1所述霍氏肠杆菌的发酵方法，其特征在于，是将所述霍氏肠杆菌TY18接种于LB液体培养基中，28～32℃、pH 7.0～8.0下振荡培养14～18h。4.根据权利要求3所述的发酵方法得到的发酵液。5.权利要求4所述的发酵液在降解三唑类农药中的用途。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述三唑类农药为三唑酮、三唑醇、丙环唑、己唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑、腈菌唑、烯唑醇、氟硅唑中的一种或几种。7.一种用于降解三唑类农药的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂包括权利要求1所述霍氏肠杆菌株TY18和/或权利要求4所述的发酵液，以及可接受的辅料或载体。8.一种权利要求1所述霍氏肠杆菌的富集培养方法，其特征在于，包括以下步骤：取三唑类农药长期污染的土壤，接于含10mg/L三唑类农药的CSM富集培养液中，在28～32℃、160～200r/mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：王燕，李江波，管麟，王春伟，赵晓军，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：