鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物及其制备方法。本发明专利技术方法，包括如下步骤：S1、对第一组蛋鸡给药恩诺沙星，收集含有恩诺沙星鸡蛋；对第二组蛋鸡给药环丙沙星，收集含有环丙沙星鸡蛋；S2、将空白鸡蛋、含有恩诺沙星鸡蛋和含有环丙沙星鸡蛋分别冻干，得到空白鸡蛋冻干粉、含有恩诺沙星鸡蛋冻干粉和含有环丙环丙沙星鸡蛋冻干粉；S3、将空白鸡蛋冻干粉、含有恩诺沙星鸡蛋冻干粉和含有环丙沙星鸡蛋冻干粉粉碎后混匀，即得。本发明专利技术由鸡的喂养开始，制备参考物质侯选物及基体标准物质，还原了恩诺沙星和环丙沙星在鸡体内完整的代谢过程；本发明专利技术基体标准物质满足了恩诺沙星和环丙沙星残留检测中质量控制和方法学验证的需求。学验证的需求。

【技术实现步骤摘要】
鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物及其制备方法


[0001]本专利技术属于基体标准物质
，尤其涉及鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物及其制备方法。

技术介绍

[0002]恩诺沙星和环丙沙星属于第三代氟喹诺酮类药物，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有较高的抗菌活性，同时对治疗支原体、衣原体感染也有较好的抗菌作用，具有毒副作用小，与其他抗菌治疗药物无交叉耐药性等特点，故能够与β
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内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类药物进行联合治疗，以增强其抗菌活性。上述药物具有抗菌谱广、杀菌力强、可与多种药物联合应用等特点，但是由于养殖户缺乏药物的相关知识，使得药物滥用以及不遵循休药期的情况常有发生，导致了动物组织中药物含量不断的富集。药物通过食物链蓄积在体内，人体若长期摄入含有喹诺酮类药物残留的食品，对人体的中枢神经系统、消化系统、泌尿系统以及幼儿软骨均有严重影响，目前实验表明恩诺沙星在实验动物中显示一定的致突变和胚胎毒作用，高剂量的环丙沙星易导致肝细胞变性或坏死。环丙沙星是恩诺沙星在动物体内的代谢物，GB
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2019中规定恩诺沙星在家禽产蛋期禁用，故对于检测动物源性食品中的恩诺沙星和环丙沙星方法的需求十分迫切。
[0003]在兽药残留检测中，样品的基质成分十分复杂。单纯采用纯标准品制备的添加样品进行方法评价存在诸多弊端，例如在检测过程中存在明显的基质效应的干扰，运用基体标准物质对检测过程和结果进行质控和校准是最为有效的手段。因此基体标准物质的研制在兽药残留检测过程中具有十分重要的作用。标准物质是一种或多种足够均匀、稳定并有特性量值用于评价方法，校准仪器设备，给材料赋值的物质。“基体标准物质”是具有最高计量学特征、用基准方法确定特性量值的标准物质。
[0004]缺乏基体标准物质是制约动物源性食品
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鸡蛋中恩诺沙星和环丙沙星兽药残留检测技术取得突破的最大障碍。然而制备基体标准物质的首要步骤是参考物质候选物的制备。候选物应尽可能与实际样品一致，这样才最大限度克服由于基体效应所引起的误差，从而保证量值传递的准确。
[0005]目前于国家标准物质资源共享平台上可以查询到如下涉及到恩诺沙星和环丙沙星的标准物质。包括鱼肉粉中、蜂蜜中、鸡肉粉中、鸡蛋液中、甲醇中的恩诺沙星或者环丙沙星残留分析标准物质以及恩诺沙星或者环丙沙星纯度标准物质，同时包含恩诺沙星和环丙沙星的标准物质只有甲醇溶液中。鸡蛋作为我国最常食用的食物之一，且GB
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2019中规定恩诺沙星和环丙沙星在产蛋期是禁用的，故而鸡蛋中的恩诺沙星和环丙沙星的兽药残留监测是十分重要的。国外从20世纪80年代起即有文献报道研制动物组织中的关键技术，就动物组织如肌肉、内脏、血液来说，新鲜或需冷冻保存的样品由于运输、保存及均匀过程较困难，所以将这些基质真空干燥制成冻干粉是一个较好的选择。因此，提供鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质候选物及基体标准物质是当前需要解决的技术问题。
[0006]恩诺沙星和环丙沙星现有多种残留检测方法，但由于参考物质候选物的后续测定要求量值准确、灵敏度高。因此，需要开发出一种鸡蛋冻干粉中恩诺沙星和环丙沙星的检测方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物及其制备方法，该参考物质后续物可以最大限度克服由于鸡蛋基质效应所引起的误差，且满足国内外对鸡蛋中恩诺沙星和环丙沙星残留实验室的质量控制及方法验证的需求，填补了喹诺酮类药物基体标准物质的空白，为鸡蛋中恩诺沙星和环丙沙星残留分析提供了量值溯源的依据。
[0008]本专利技术提供的鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物的制备方法，包括如下步骤：
[0009]S1、对第一组蛋鸡给药恩诺沙星，收集含有恩诺沙星的鸡蛋；对第二组蛋鸡给药环丙沙星，收集含有环丙沙星的鸡蛋；
[0010]S2、将空白鸡蛋、所述含有恩诺沙星的鸡蛋和所述含有环丙沙星的鸡蛋分别进行真空冷冻干燥，得到空白鸡蛋冻干粉、含有恩诺沙星的鸡蛋冻干粉和含有环丙环丙沙星的鸡蛋冻干粉；
[0011]S3、将所述空白鸡蛋冻干粉、所述含有恩诺沙星的鸡蛋冻干粉和所述含有环丙沙星的鸡蛋冻干粉粉碎后混匀，得到鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质候选物。
[0012]上述的制备方法中，所述给药恩诺沙星的方式可为饲喂含有恩诺沙星的饲料，自由采食；
[0013]所述含有恩诺沙星的饲料中恩诺沙星的质量百分含量可为0.001％～0.003％，具体可为0.002％；
[0014]所述给药恩诺沙星的时间可为连续给药4～6天，具体可为连续给药5天；
[0015]所述收集含有恩诺沙星的鸡蛋可为收集给药第2天～停药后第5天的鸡蛋；
[0016]所述给药环丙沙星的方式可为饲喂含有环丙沙星的饲料，自由采食；
[0017]所述含有环丙沙星的饲料中环丙沙星的质量百分含量可为0.001％～0.003％，具体可为0.002％；
[0018]所述给药环丙沙星的时间可为连续给药4～6天，具体可为连续给药5天；
[0019]所述收集含有环丙沙星的鸡蛋可为收集给药第2天～停药后第5天的鸡蛋。
[0020]所述收集的鸡蛋在
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20℃保存。
[0021]上述的制备方法中，所述真空冷冻干燥是一个稳定化的物质干燥过程，是将含水的物质先冻结成固态，而后使其中的水分从固态直接升华变成气态排除，以除去水分而保存物质的方法；
[0022]所述真空冷冻干燥的真空度可为3～50Pa，具体可为10～20Pa；冷肼温度具体可为
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80℃；所述真空冷冻干燥的时间可为4～6天，具体可为5天。
[0023]上述的制备方法中，所述粉碎的转速可为1500～4000r/min，具体可为2000r/min；所述粉碎的时间可为10～30s，具体可为15s；
[0024]所述粉碎后过筛，粒径可为0.8～1.0mm，具体可为0.9mm；
[0025]所述混匀可为混合机混匀，混匀时间可为2～6h，具体可为3h。
[0026]上述的制备方法中，所述鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物中恩诺沙星和环丙沙星的浓度均为1μg/kg。
[0027]本专利技术进一步提供了上述的制备方法制备得到的鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物或参考物质或基体标准物质。
[0028]本专利技术还提供了一种鸡蛋冻干粉中恩诺沙星和环丙沙星的分析方法，包括如下步骤：
[0029](1)将待检测的鸡蛋冻干粉和水混匀使所述鸡蛋冻干粉还原为鸡蛋；在所述还原的鸡蛋中添加恩诺沙星同位素内标和环丙沙星同位素内标，混匀；在所述混匀后的混合液中加入提取试剂进行提取，得到提取液；
[0030](2)对所述提取液进行脱脂；
[0031](3)将所述脱脂后的提取液通过固相萃取柱进行净化，收集洗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物的制备方法，包括如下步骤：S1、对第一组蛋鸡给药恩诺沙星，收集含有恩诺沙星的鸡蛋；对第二组蛋鸡给药环丙沙星，收集含有环丙沙星的鸡蛋；S2、将空白鸡蛋、所述含有恩诺沙星的鸡蛋和所述含有环丙沙星的鸡蛋分别进行真空冷冻干燥，得到空白鸡蛋冻干粉、含有恩诺沙星的鸡蛋冻干粉和含有环丙环丙沙星的鸡蛋冻干粉；S3、将所述空白鸡蛋冻干粉、所述含有恩诺沙星的鸡蛋冻干粉和所述含有环丙沙星的鸡蛋冻干粉粉碎后混匀，得到鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述给药恩诺沙星的方式为饲喂含有恩诺沙星的饲料，自由采食；所述含有恩诺沙星的饲料中恩诺沙星的质量百分含量为0.001％～0.003％；所述给药恩诺沙星的时间为4～6天；所述收集含有恩诺沙星的鸡蛋为收集给药第2天～停药后第5天的鸡蛋；所述给药环丙沙星的方式为饲喂含有环丙沙星的饲料，自由采食；所述含有环丙沙星的饲料中环丙沙星的质量百分含量为0.001％～0.003％；所述给药环丙沙星的时间为4～6天；所述收集含有环丙沙星的鸡蛋为收集给药第2天～停药后第5天的鸡蛋。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述真空冷冻干燥的真空度为3～50Pa，时间为4～6天。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述粉碎的转速为1500～4000r/min，时间为10～30s；所述粉碎后过筛，粒径为0.8～1.0mm；所述混匀为混合机混匀，混匀时间为2～6h。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物中恩诺沙星和环丙沙星的浓度均为1μg/kg。6.权利要求1
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5中任一项所述的制备方法制备得到的鸡蛋冻干粉恩诺沙星和环丙沙星参考物质侯选物或参考物质或基体标准物质。7.一种鸡蛋冻干粉中恩诺沙星和环丙沙星的分析方法，包括如下步骤：(1)将待检测的鸡蛋冻干粉和水混匀使所述鸡蛋冻干粉还原为鸡蛋；在所述还原的鸡蛋中添加恩诺沙星内标和环丙沙星内标，混匀；在所述混匀后的混合液中加入提取试剂进行提取，得到提取液；(2)对所述提取液...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏曦，李晓薇，杜静静，王成飞，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：