一种TGF-β/VEGF双功能抗体融合蛋白制造技术

本发明专利技术提供了一种TGF

【技术实现步骤摘要】
一种TGF
‑
β
/VEGF双功能抗体融合蛋白


[0001]本专利技术涉及融合蛋白
，更具体地，涉及一种TGF
‑
β/VEGF双功能抗体融合蛋白。

技术介绍

[0002]起因于脉络膜新生血管形成(CNV)的渗出型老化相关性黄斑变性(AMD)，在发达国家中是导致高度视力障碍的主要原因之一。目前已得到的证据显示，血管内皮生长因子(VEGFs)在CNV的发生中扮演中心角色，抑制VEGF产生的化合物或抑制VEGF信号传导途径的化合物可以抑制CNV。近年来，与包含光线力学疗法在内的传统治疗方法相比，抗VEGF抗体显示出更高的治疗有效性。抗VEGF药物已经成为针对CNV、AMD等药物疗法的主要选择。目前，已上市的主要抗VEGF药物给药频次为2
‑
4周，多次反复进行玻璃体注射，给患者带来极大的心理与生理负担。因此，本领域迫切需要开发一种能更为长效的针对VEGF、并且能够用于治疗CNV，AMD等眼科疾病的药物。除此之外，VEGFs也在角膜新生血管形成中起着重要作用，一种治疗角膜新生血管性疾病(如角膜碱烧伤)的策略是抑制VEGF活性。
[0003]血管内皮生长因子(VEGFs)家族中，VEGF
‑
A165(以下简称VEGF)是最丰富活跃的亚型。VEGF通过与II型受体VEGFR2结合，激活信号通路发生一系列级联反应，促进新生血管形成并维持其完整性。但I型受体VEGFR1与VEGF结合的能力远大于VEGFR2，发生作用部位主要是VEGFR1的胞外区D2结构域。VEGFR1
‑
D2通过竞争结合VEGF，阻断VEGFR2与VEGF结合，从而阻断信号通路，抑制内皮细胞增殖与血管生成。
[0004]转化生长因子
‑
β(transforming growth factor
‑
β，TGF
‑
β)属于调节细胞生长和分化的TGF
‑
β超家族，是一种多功能细胞因子。高水平的TGF
‑
β对视网膜色素上皮(RPE)的影响广泛，在增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)和AMD等眼科疾病的发病机制中发挥重要作用。TGF
‑
β通过与其受体复合物结合传递信号，诱导了SMAD2和SMAD3的磷酸化，激活下游效应基因，其中包括血管内皮生长因子A(VEGFA)，从而起到促进血管新生的作用。此外，TGF
‑
β促进上皮细胞向间充质转化，减弱视网膜屏障细胞连接的紧密性，增加平滑肌肌动蛋白表达，增强纤维性RPE细胞的收缩特性，导致视网膜脱离风险增强。
[0005]另一方面，VEGF信号通路与肿瘤新生内皮细胞的迁移、增殖、生存有关，在肿瘤周围血管新生过程中具有重要的作用，与机体多种常见肿瘤的发病及肿瘤的转移有着密切的关系。TGF
‑
β信号可作用于肿瘤微环境中的免疫细胞。一方面，分泌的TGF
‑
β会抑制效应性T细胞和天然杀伤细胞(NK)的细胞毒性，这就减弱了肿瘤微环境中固有免疫细胞的抗肿瘤能力；另外，TGF
‑
β表达上调，也会促进VEGF
‑
A等因子的分泌，刺激新生血管生成，从而为癌细胞的生长和转移提供助力。近期的研究还表明，TGF
‑
β信号通路还与肿瘤细胞的耐药性相关。
[0006]因此，一种同时阻断VEGF和TGF
‑
β信号通路的药物，在治疗CNV，PVR和AMD等眼科疾病，以及治疗肿瘤上具有临床潜力。亟待开发一种同时靶向VEGF和TGF
‑
β的双功能药物。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种TGF
‑
β/VEGF双功能抗体融合蛋白。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种双功能融合蛋白，所述双功能融合蛋白为两个单体形成的二聚体，每个单体包含：
[0009]第一结合结构域Z1；和
[0010]第二结合结构域Z2；
[0011]其中，所述第一结合结构域特异性结合靶分子TGF
‑
β；
[0012]所述第二结合结构域特异性结合靶分子VEGF。
[0013]在另一优选例中，所述Z1为特异性结合TGF
‑
β的抗体或抗体片段。
[0014]在另一优选例中，所述的抗体包括：动物源抗体(如鼠源抗体)、嵌合抗体、人源化抗体。
[0015]在另一优选例中，所述的抗体片段包含重链可变区和轻链可变区。
[0016]在另一优选例中，所述的抗体片段包含单链可变区片段(scFv)、双链可变区片段(dcFv)。
[0017]在另一优选例中，所述Z2为特异性结合VEGF的多肽片段。
[0018]在另一优选例中，所述VEGF的多肽片段衍生自VEGF受体。
[0019]在另一优选例中，所述Z2为I型VEGF受体(VEGFR1)的胞外区。
[0020]在另一优选例中，所述Z1和所述Z2通过接头或肽键相连。
[0021]在另一优选例中，所述接头为柔性接头。
[0022]在另一优选例中，所述的柔性接头包括5
‑
30个氨基酸，较佳地10
‑
25个氨基酸。
[0023]在另一优选例中，所述的柔性肽接头包括1
‑
6个G4S。
[0024]在另一优选例中，Z1为抗体，且所述的接头为(G4S)
n
，其中，n为正整数(例如1、2、3、4、5或6)，较佳地，n＝2或4。
[0025]在另一优选例中，Z1为抗TGF
‑
β单克隆抗体，并且Z2通过接头连接在Z1的选自下组的位置：重链的N端、重链的C端、轻链的N端、轻链的C端或其组合。
[0026]在另一优选例中，Z1为抗TGF
‑
β单克隆抗体，并且Z2通过接头连接在Z1的重链恒定区末端。
[0027]在另一优选例中，Z1为抗TGF
‑
β单克隆抗体，并且Z2通过接头连接在Z1的重链可变区末端。
[0028]在另一优选例中，Z1为抗TGF
‑
β单克隆抗体，并且Z2通过接头连接在Z1的轻链恒定区末端。
[0029]在另一优选例中，所述的双功能融合蛋白中的每个单体从N端到C端具有如式I所示的结构：
[0030][0031]其中，
[0032]T1、T2、T3各自独立地为无或I型VEGF受体(VEGFR1)的胞外区，且至少一个不为无；
[0033]L1、L2、L3各自独立地为无或键或接头元件；
[0034]VL代表抗TGF
‑
β抗体的轻链可变区；
[0035]CL代表抗TGF
‑
β抗体的轻链恒定区；
[0036]VH代表抗TGF
‑
β抗体的重链可变区；
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双功能融合蛋白，其特征在于，所述双功能融合蛋白为两个单体形成的二聚体，每个单体包含：第一结合结构域Z1；和第二结合结构域Z2；其中，所述第一结合结构域特异性结合靶分子TGF
‑
β；所述第二结合结构域特异性结合靶分子VEGF。2.如权利要求1所述的双功能融合蛋白，其特征在于，所述的双功能融合蛋白中的每个单体从N端到C端具有如式I所示的结构：其中，T1、T2、T3各自独立地为无或I型VEGF受体(VEGFR1)的胞外区，且至少一个不为无；L1、L2、L3各自独立地为无或键或接头元件；VL代表抗TGF
‑
β抗体的轻链可变区；CL代表抗TGF
‑
β抗体的轻链恒定区；VH代表抗TGF
‑
β抗体的重链可变区；CH代表抗TGF
‑
β抗体的重链恒定区；“～”代表二硫键或共价键；
“‑”
代表肽键；其中，所述双功能融合蛋白具有同时结合VEGF以及结合TGF
‑
β的活性。3.如权利要求1或2所述的双功能融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白选自下组：(1)所述融合蛋白的重链氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述融合蛋白的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；(2)所述融合蛋白的重链氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述融合蛋白的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；(3)所述融合蛋白的重链氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述融合蛋白的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；(4)所述融合蛋白的重链氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，所述融合蛋白的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄浩旻，邓岚，朱祯平，刘利芬，
申请(专利权)人：丹生医药技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：