一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法技术

本发明专利技术公开了一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法，主要包括三个步骤：微塑料

【技术实现步骤摘要】
一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法


[0001]本专利技术属于环境毒理学
，具体涉及一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法。

技术介绍

[0002]秀丽隐杆线虫是一种无毒无害、可以独立生存的线虫，具有雌雄同体和雄性两种性别，可以进行自体受精和双性生殖，其中大部分为雌雄同体，雄性仅占群体的0.2％。其生命周期约3天，平均寿命为2
‑
3周，适宜生长的温度为20
‑
25℃。生命周期经历胚胎期、幼虫期和成虫期，幼虫期又分为L1、L2、L3、L4四个时期。
[0003]微塑料通常是指尺寸小于5mm的微小塑料颗粒。微塑料可以通过农用地膜的长时间残留、有机肥的施用、地表水灌溉与大气中悬浮的微塑料颗粒沉降等途径进入土壤环境中，大量微塑料进入环境对生态系统具有潜在影响。化学效应是微塑料毒性的一个重要方面，微塑料在环境中可以作为化学污染物分配和吸附的介质，从而影响一些化学物质的命运和生物利用度。此外，微塑料在破碎分解的过程中可能会释放化学添加剂，进而对环境中的生物产生毒性。
[0004]土壤中大量的天然化学物质对环境中动植物的健康具有重要作用。其中就包括由植物合成的各种次生代谢物。这些次生代谢物随着植物凋落物进入土壤，进而对土壤理化性质和土壤生物群产生影响。那么在微塑料大量存在于土壤环境的现实背景下，微塑料对这些次生代谢物的吸附作用可能会使这种影响产生正面或负面的变化。
[0005]因此，研究微塑料和植物凋落物共同作用下对土壤动物的影响有利于探明在实际环境中微塑料对土壤生态系统的潜在影响，具有现实意义。有利于进一步研究在复杂的土壤环境中，动物、植物和微塑料之间的相互影响。

技术实现思路

[0006]针对微塑料和植物凋落物的联合毒性研究需要，本专利技术提供了一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法，该方法通过提取适宜浓度的植物凋落物浸提液以及配置微塑料悬浊液来进行实验，操作条件简便，避免了直接在植物凋落物或土壤中培养线虫时难以观察实验结果，线虫丢失率高的问题。
[0007]技术方案：
[0008]本专利技术所述的是一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法，包括以下步骤：
[0009]1.植物凋落物浸提液制作准备：将风干的植物凋落物剪成1
‑
2cm的小段，每20g加入 200mL蒸馏水，浸泡24h。
[0010]2.步骤一浸泡后的混合物超声30min，用滤纸过滤后，在4000r/min下离心1h，之后依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，得到0.1g/L的浸提液，于4℃保存。
[0011]3.称取0.01g微塑料于10mL玻璃管中，加入10mL植物凋落物浸提液，超声30min，得
到1g/L的微塑料
‑
凋落物悬浊液。
[0012]4.实验中选择一种微塑料，设置四个实验组，包括一个空白组，每组设置六个平行，四组间只有采用的凋落物种类不同，其余条件均相同。
[0013]5.配置NGM培养基，倒入直径35mm的培养皿中。每个培养皿中加入50μL微塑料
‑ꢀ
凋落物悬浊液和50μL的大肠杆菌op50菌液。
[0014]6.将处理后的培养皿放入培养箱，24h后每个培养皿转入一条L4期线虫，在22℃下继续培养。
[0015]7.每24h将线虫转入新的处理好的培养基直至线虫停止繁殖，使用显微镜计数线虫的产卵数并对所得数据进行分析。
[0016]其特征在于，在步骤4中，加入的液体不要碰到培养皿边缘，应留有5mm左右空间，避免线虫爬到培养皿壁上丢失。
[0017]其特征在于，实验中所用到的各种器皿，如玻璃管、培养皿都应经过灭菌处理，实验操作在超净工作台中进行。
[0018]本专利技术的优点：
[0019]1.采用配置植物凋落物浸提液的方式来进行实验，避免了直接在凋落物或土壤中培养线虫时线虫难以观察或容易丢失的情况。
[0020]2.用植物凋落物浸提液直接配置微塑料悬浊液，并且进行超声处理，可以使两者充分接触并进行反应，更好得模拟土壤环境中微塑料和植物凋落物之间的化学效应。
[0021]3.选用生态毒理学领域中应用广泛的模式生物，秀丽隐杆线虫具有生命周期短、易于培养和繁殖、谱系清楚等优点，在生物毒性表征方面具有较强的代表意义。
附图说明
[0022]图1为所述的一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法流程图。
具体实施方式
[0023]为了阐明本专利技术的技术方案，现结合附图及对聚苯乙烯(PS)和苜蓿、绿茶、小麦三种植物凋落物的联合毒性检测流程对本专利技术做进一步的详细介绍。
[0024]下列实施例中的方法，可以使本专业技术人员更全面的理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。
[0025]本实施例具体步骤如下。
[0026]1.将三种植物凋落物风干，分别剪成1
‑
2cm的小段，每20g加入200mL蒸馏水，浸泡 24h。
[0027]2.浸泡完成后超声30min，用滤纸过滤后，在4000r/min下离心1h，之后依次用0.45μm 和0.22μm的滤膜过滤，得到0.1g/L的浸提液，于4℃保存。
[0028]3.各称取0.01g PS于四个10mL玻璃管中，分别加入10mL无菌水和三种植物凋落物浸提液，超声30min，分别得到1g/L的PS
‑
水悬浊液、PS
‑
苜蓿悬浊液、PS
‑
绿茶悬浊液、PS
‑ꢀ
小麦悬浊液。
[0029]5.配置NGM培养基，倒入直径35mm的培养皿中。每个培养皿中分别加入50μL步骤三中配置好的悬浊液和50μL大肠杆菌op50菌液。
[0030]6.将处理后的培养皿放入培养箱，24h后每个培养皿转入一条L4期线虫，在22℃下继续培养。
[0031]7.每24h将线虫转入新的处理好的培养基直至线虫停止繁殖，使用显微镜计数培养皿上线虫的产卵数并对所得数据进行分析。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法，特征是包括如下步骤：(1)微塑料
‑
凋落物悬浊液的制备：a.将风干的植物凋落物剪成1
‑
2cm的小段，每20g加入200mL蒸馏水，浸泡24h后超声30min，用滤纸过滤，在4000r/min下离心1h，之后依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，得到0.1g/L的浸提液，于4℃保存。b.称取0.01g微塑料于10mL玻璃管中，加入10mL植物凋落物浸提液，超声30min，得到1g/L的微塑料
‑
凋落物悬浊液。(2)实验处理：a.实验中选择一种微塑料，设置四个实验组，包括一个空白组，每组设置六个平行，四组间只有采用的凋落物种类不同，其余条件均相同。b.配置NGM培养基，倒入直径35mm的培养皿中。每个培养皿中加入50μL微塑料
‑
凋落物悬浊液和50μL的大肠杆菌op50菌液。c.将处理后的培养皿放入培养箱，24h后每个培养皿转入一条L4期线虫，在22℃下继续培养。(3)数据记录与分析每24h将线虫转入新的处理好的培养基直至线虫停止繁殖，使用显微镜计数培养皿上线虫的产卵数并对所得数据进行分析。2.根据权利要求1所述的一种用线虫检测微塑料和植物凋落物联合毒性的方法，其特征在于，步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宪华，刘宛昕，李贇雪，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：