高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条/检测卡及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条/检测卡及制备方法和应用。该试纸条包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线、质控线和底板，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线和质控线均置于底板上，所述检测线和质控线喷涂于硝酸纤维素膜上，所述金标垫上涂覆有金标记兔抗HPV病毒多克隆抗体，并且由试纸条和塑料卡盒可制成检测卡。应用于高危型人乳头瘤病毒筛查中无需专业试验设施和实验操作人员，且不要求特定的实验平台，适合高危型人乳头瘤病毒16、18型感染检测场景更加广大。同时还提供了试纸条和检测卡具体的制备方法，制备方法简单、重复性高，利于商业大批量生产，且稳定性好。且稳定性好。且稳定性好。

【技术实现步骤摘要】
高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条/检测卡及制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体地涉及一种高危型人乳头瘤病毒16、1 8型抗原检测试纸条/检测卡及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的持续感染可导致宫颈的癌性病变。根据病毒的致病力及致病危险性的大小可将其分为高危型HPV和低危型 HPV。高危型HPV感染可引起宫颈、阴道、肛门、阴茎和口咽部位的上皮内瘤变或癌变，其HPV型别主要包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、 58、59、68、73和82。
[0003][0004][0005]2020版ACS指南收录了HPV疫苗相关文献，发现与未接种疫苗相比，接种疫苗的个体患宫颈HSIL的风险降低，HPV疫苗可有效降低宫颈病变因此，提高HPV筛查率仍然是预防宫颈癌的重要手段。但是，目前广泛采用的以核酸检测为手段的筛查方式，在时效性、操作性方面存在着短板，对于人员的专业性也有着较高要求。

技术实现思路

[0006]基于上述问题，本专利技术提供了一种快速、操作简便、无须专业技术人员，且适用场景广泛的可检高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原的抗原检测试纸条/检测卡及其制备方法和应用。
[0007]本专利技术提供的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条，包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线、质控线和底板，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线和质控线均置于底板上，所述检测线和质控线喷涂于硝酸纤维素膜上，所述金标垫上涂覆有金标记兔抗HPV病毒多克隆抗体。
[0008]本专利技术提供的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条，具有高度的特异性和灵敏度，而且操作简便，快速，无需专门设施。
[0009]优选地，所述检测线是通过将抗HPV病毒L1蛋白的单克隆抗体溶解配制成包被液喷涂在硝酸纤维素膜上形成，所述质控线是通过将羊抗兔多抗溶解配制成包被液喷涂在硝酸纤维素膜上形成。
[0010]本专利技术提供的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测卡，包括上述高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条和特制大小的塑料卡盒。
[0011]本专利技术进一步将上述试纸条装入特制大小的塑料盒中，制备成检测卡，进一步提高了使用的便捷性。
[0012]优选地，所述检测卡中央有一凹槽，用于显示试纸条检测线和质控线颜色，检测卡检测孔一侧的盒盖上印有T和C两个英文大写字母，对应试纸条硝酸纤维素膜上的检测线和
质控线，通过检测孔可以观察到硝酸纤维素膜上检测线和质控线的变化，检测卡一端设有样品孔用于滴加实验样品，其下方是试纸条的样品垫。
[0013]本专利技术提供的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：
[0014](a)利用切割仪根据底板和底板上带有检测线和控制线的硝酸纤维素膜的尺寸将样品垫、金标垫和吸水纸裁剪成适当长度的长条；
[0015](b)将金标垫粘贴在底板上硝酸纤维素膜检测线一侧，与硝酸纤维素膜有1
‑
2mm的重叠；
[0016](c)将样品垫一边与底板边缘对齐、另一边覆盖2mm金标垫粘贴在底板上；
[0017](d)将吸水纸粘贴在底板上硝酸纤维素膜质控线一侧，与硝酸纤维素膜有 1
‑
2mm的重叠，制成金标试剂卡；
[0018](e)在金标试剂卡两端的样品垫和吸水纸上分别粘贴一层保护膜，再用切膜机将金标试剂卡切割成宽度2
‑
4mm的试纸条，放入有干燥剂的铝箔袋中封口，于室温下储存。
[0019]本专利技术提供的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条的制备方法，其方法简单、稳定性和重复性好，便于大批量生产。
[0020]优选地，金标垫的制备方法如下：
[0021](a)胶体金的制备：采用柠檬酸还原法，得到40纳米左右直径的胶体金颗粒；
[0022](b)兔抗HPV病毒多克隆抗体制备:用HPV病毒L1蛋白多次免疫新西兰大白兔，取血分离血清，将血清过0.45μm滤膜后，经AKTA蛋白纯化系统对血清进行纯化，ProteinG亲和层析柱层析获得IgG，采用BCA试剂盒测定蛋白浓度，间接ELISA检测抗体效价，SDS
‑
PAGE电泳分析多抗纯度，最终得到成品兔抗HPV病毒多克隆抗体；
[0023](c)金标抗体的制备：在200ml胶体金溶液中加入上述兔抗HPV病毒多克隆抗体2
‑
10mg，与20ml浓度为10％的氯化钠溶液混合后，低速离心去除沉淀，收集上清后进一步进行高速离心，去除液体，用pH 7.2的PBS缓冲液溶解沉淀物，沉淀物溶解后上凝胶层析柱收集活性峰，得到成品金标抗体原液；
[0024](d)金标抗体工作液的制备：用pH 7.2的Tris
‑
HCL缓冲液溶解上述金标抗体原液，用含0.1％BSA和0.02％叠氮钠的稀释液调整吸光度，当吸光度A53 0调整到80时，得到金标抗体工作液；
[0025](e)金标垫的制备：利用BioDot
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RR120连续式喷膜机将金标抗体工作液喷涂到玻璃纤维膜上，37℃下干燥120min以上，得到用于试纸条制备所需的金标垫。
[0026]优选地，带有检测线和控制线的硝酸纤维素膜的制备方法如下：
[0027](a)将抗HPV病毒L1蛋白的单克隆抗体溶解配制成包被液，用喷膜机喷涂在硝酸纤维素膜上形成检测线；
[0028](b)将羊抗兔多抗溶解配制成包被液，用喷膜机喷涂在硝酸纤维素膜上形成质控线；
[0029](c)将喷涂好的硝酸纤维素膜放置于37℃的干燥箱干燥2小时以上，干燥过程中保证干燥箱环境的相对湿度不超过45％，然后放入有干燥剂的铝箔袋中封口，保存于2
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8℃的环境中备用。
[0030]本专利技术提供的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测卡的制备方法，采用如前述
试纸条的制备方法，但在制成金标试剂卡后，将金标试剂卡直接用切膜机切割成宽度2
‑
4mm的试纸条，每一条放入一个特制的塑料卡盒中，制成检测卡，放入有干燥剂的铝箔袋中封口，于室温下储存。
[0031]本专利技术同时公开了上述高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条或高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测卡在高危型人乳头瘤病毒筛查中的应用。
[0032]本专利技术设有标准比色卡，显色范围为L0
‑
L10，用于判断检测线和质控线显色范围，确定检测阴阳性。
[0033]本专利技术还公开了使用上述高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测卡的具体方法，包括如下步骤：
[0034](a)检测卡标记；
[0035](b)阴道分泌物标本处理及加样：利用配套棉签探入阴道5
‑
10cm处收集阴道分泌物并放入500ul病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条，其特征在于，包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线、质控线和底板，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线和质控线均置于底板上，所述检测线和质控线喷涂于硝酸纤维素膜上，所述金标垫上涂覆有金标记兔抗HPV病毒多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条，其特征在于：所述检测线是通过将抗HPV病毒L1蛋白的单克隆抗体溶解配制成包被液喷涂在硝酸纤维素膜上形成，所述质控线是通过将羊抗兔多抗溶解配制成包被液喷涂在硝酸纤维素膜上形成。3.一种高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测卡，其特征在于：包括如权利要求1
‑
2任一项所述高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条和特制大小的塑料卡盒。4.根据权利要求3所述的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测卡，其特征在于：所述检测卡中央有一凹槽，用于显示试纸条检测线和质控线颜色，检测卡检测孔一侧的盒盖上印有T和C两个英文大写字母，对应试纸条硝酸纤维素膜上的检测线和质控线，通过检测孔可以观察到硝酸纤维素膜上检测线和质控线的变化，检测卡一端设有样品孔用于滴加实验样品，其下方是试纸条的样品垫。5.一种高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)利用切割仪根据底板和底板上带有检测线和控制线的硝酸纤维素膜的尺寸将样品垫、金标垫和吸水纸裁剪成适当长度的长条；(b)将金标垫粘贴在底板上硝酸纤维素膜检测线一侧，与硝酸纤维素膜有1
‑
2mm的重叠；(c)将样品垫一边与底板边缘对齐、另一边覆盖2mm金标垫粘贴在底板上；(d)将吸水纸粘贴在底板上硝酸纤维素膜质控线一侧，与硝酸纤维素膜有1
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2mm的重叠，制成金标试剂卡；(e)在金标试剂卡两端的样品垫和吸水纸上分别粘贴一层保护膜，再用切膜机将金标试剂卡切割成宽度2
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4mm的试纸条，放入有干燥剂的铝箔袋中封口，于室温下储存。6.根据权利要求5所述的高危型人乳头瘤病毒16、18型抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述金标垫的制备方法如下：(a)胶体金的制备：采用柠檬酸还原法，得到40纳米左右直径的胶体金颗粒；(b)兔抗HPV病毒多克隆抗体制备:用HPV病毒L1蛋白多次免疫新西兰大白兔，取血分离血...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜杰，
申请(专利权)人：苏州杰尔赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：