本公开文本提供源自兔的抗人IgG抗体及其抗原结合部分以及使用这些抗体和部分的方法。抗原结合部分以及使用这些抗体和部分的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】ID NO:66和72、SEQ ID NO:67和73或SEQ ID NO:68和74，所述重链和轻链具有或不具有前导序列。
[0008]在某些实施方案中，本专利技术抗体或抗原结合部分包含可检测标记。
[0009]本公开文本还提供一种包含水性缓冲溶液中的本专利技术单克隆抗体或抗原结合部分的组合物或试剂盒。
[0010]在其他方面，本公开文本提供一种分离的核酸分子，其编码本专利技术单克隆抗体或抗原结合部分的重链、轻链或二者。在一些实施方案中，所述核酸分子包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和/或12。在其他实施方案中，所述核酸分子包含SEQ ID NO:1和7、SEQ ID NO:2和8、SEQ ID NO:3和9、SEQ ID NO:4和10、SEQ ID NO:5和11或SEQ ID NO:6和12。本文还提供一种包含所述核酸分子的表达构建体，以及一种宿主细胞(例如，哺乳动物细胞)，所述宿主细胞包含编码本专利技术单克隆抗体或抗原结合部分的重链和轻链的核苷酸序列。本公开文本还提供一种产生抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括在允许所述抗体或部分的重链和轻链表达的条件下培养所述宿主细胞，以及从培养的细胞或者细胞培养上清液分离所述抗体或部分。
[0011]在另一个方面，本公开文本提供一种检测样品中的人IgG或其片段的方法，所述方法包括使所述样品与本文所述的一种或多种单克隆抗体或抗原结合部分接触。所述样品(例如，组织样品，如血液、血清或血浆样品，或者活检样品)可以从例如已经被施用包含人IgG恒定区(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区)的抗体或其片段(例如，Fab或F(ab')2片段)的动物获得。所述动物可以是例如非人灵长类动物，如食蟹猴或恒河猴。
[0012]本专利技术的其他特征、目的和优势在以下的具体实施方式中是清楚的。然而，应当理解，尽管指示了本专利技术的实施方案和方面，但具体实施方式是通过仅说明而非限制的方式给出的。从具体实施方式中，本领域技术人员将清楚在本专利技术范围内的各种变化和修改。
附图说明
[0013]图1是一组Biacore传感图，其显示六种兔重组抗体克隆与全人IgG1(hIgG1)、全人IgG4(hIgG4)、人Fab(hFab)和食蟹猴IgG(食蟹猴IgG)的结合。
[0014]图2A和图2B分别显示使用Clustal Omega和Kabat编号系统对六种兔重组抗体克隆的重链(图2A)和轻链(图2B)氨基酸序列的比对。CDR(还参见Zhang和Ho,MABS(2017)9(3):419
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29)加下划线并且为粗体。前导序列、可变结构域的起点和恒定区的起点如图所示进行标记。
[0015]图2C显示六种兔抗体克隆的VH和VL序列的系统发育树。
[0016]图3A和图3B显示通过Biacore竞争测定进行的六种兔抗hIgG克隆的表位确定(图3A)和Biacore动力学测定传感图(图3B)。首先将抗体MCA5748G(Bio
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Rad)、19B1、11F9和小鼠抗hIgG mAb(Southern Biotech Cat#9042
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01)生物素化并以500
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600RU捕获于Biacore SA芯片上，并且将以1:2连续稀释8次(80
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0nM)的hIgG1抗体(伊沙妥昔单抗；“isa”)与每种竞争抗体(240nM)预混合。在预混合的竞争抗体与芯片表面上捕获的抗体在相同位点结合至hIgG1时，其阻止hIgG1与所述捕获的抗体结合。
[0017]图4A
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图4C显示使用克隆16F5作为捕获试剂的Gyrolab
TM
免疫测定，以及在含有0％、4％、10％和25％食蟹猴血清的测定基质中的hIgG4的叠加图(图4A)；含有4％食蟹猴血
清的测定基质中的hIgG4的标准曲线图(图4B)；以及含有4％食蟹猴血清的相同测定基质中的质量控制(图4C)。将克隆16F5生物素化并且用作捕获试剂。人IgG4抗体(hIgG4)用作测定标准品，将其以1200
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0.30ng/ml的范围1:4稀释。使用Alexa Fluor647缀合的山羊抗人IgG进行检测。
[0018]图5A和图5B显示针对hIgG4和hFab的检测，用作捕获试剂的不同克隆的比较。图5A显示针对hIgG4的检测，所有六种兔抗hIgG mAb克隆加上Gyrolab
TM
和MCA5748G捕获剂的标准曲线。图5B显示用于检测hIgG Fab的同组捕获试剂。注意，通过Gyrolab
TM
捕获剂或通过MCA5748G捕获剂无法检测hFab。
[0019]图6A显示沉淀和酸解离(P&A)测定中使用的四种抗体的比较。将两种兔抗人IgG克隆2C5和11G5的动态范围和敏感性与商业小鼠抗Fc mAb克隆JDC
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10(Southern Biotech，目录号9040
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01)相比较。pAb：兔多克隆抗药物抗体(药物：具有人IgG4恒定区的单克隆抗体)。ECL：电化学发光。
[0020]图6B和图6C分别显示在P&A测定中，在人、大鼠、猴和小鼠血清基质中，克隆2C5和11G5的表现。Pos ctrl：阳性对照。
具体实施方式
[0021]本公开文本提供以高亲和力与人免疫球蛋白G及其Fab片段结合但不以可检测水平与非人灵长类动物如猴(例如，食蟹猴或恒河猴)的IgG结合的兔单克隆抗体。在基于人IgG的治疗性抗体于食蟹猴或另一种非人灵长类动物中的临床前药理学研究中，这些兔抗体作为用于检测人IgG或其片段的试剂特别有用。例如，这些兔抗体可以用于研究治疗性抗体，所述治疗性抗体是全人IgG抗体、人源化IgG抗体、具有人IgG恒定区的嵌合抗体及其Fab片段。本专利技术兔抗体还可以用于基于人IgG的治疗性抗体(例如，完整抗体，包括单特异性、双特异性和三特异性抗体，以及其Fab片段)的临床前免疫组织化学研究中以及制造方法开发中。
[0022]本专利技术兔单克隆抗体与人IgG上的三个不同表位结合，所述表位与可商购的小鼠抗hIgG抗体MCA5748G所结合的表位进一步不同。兔单克隆抗体提供相对于传统小鼠单克隆抗体的几个优点。这些优点包括更高的结合亲和力和特异性以及更多样性的表位识别。兔的免疫系统在进化上与啮齿类动物的免疫系统不同，并且它使用不同的机制来生成、多样化和优化其产生的抗体的亲和力。另外，兔的免疫系统可以识别在小鼠中没有免疫原性的尺寸更小的表位，同时维持产生强免疫应答的能力。因此，本文所述的兔抗体相对于小鼠抗体是有利的。兔抗hIgG抗体
[0023]本公开文本提供与人IgG及其抗原结合部分(例如，Fab和F(ab')2)特异性(即，以高亲和力)结合的抗体。这些抗体不以可检测水平与来自临床前研究中常用的其他物种(例如，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物或狗)本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与人IgG特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或部分包含重链互补决定区(CDR)1
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3和轻链CDR1
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3，它们分别包含SEQ ID NO:27
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32，SEQ ID NO:33
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38，SEQ ID NO:39
‑
44，SEQ ID NO:45
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50，SEQ ID NO:51
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56，或SEQ ID NO:57
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62。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或部分包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，它们分别包含SEQ ID NO:13和19，SEQ ID NO:14和20，SEQ ID NO:15和21，SEQ ID NO:16和22，SEQ ID NO:17和23，或SEQ ID NO:18和24。3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中所述抗体是兔IgG抗体。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的单克隆抗体，其包含SEQ ID NO:25的重链恒定区氨基酸序列和/或SEQ ID NO:26的轻链恒定区氨基序列。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其包含分别具有以下的氨基酸序列的重链和轻链：SEQ ID NO:63和69，SEQ ID NO:64和70，SEQ ID NO:65和71，SEQ ID NO:66和72，SEQ ID NO:67和73，或SEQ ID NO:68和74，所述重链和轻链具有或不具有前导序列。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合部分，其还包含可检测标记。7.一种组合物或一种试剂盒，其包含水性缓冲溶液中的根据权利要求1
‑
6中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合部分。8.一种分离的核酸分子，其编码根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：建新公司，
类型：发明
国别省市：
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