改性HDL的定量方法以及用于该定量方法的分析用试剂技术

本发明专利技术提供一种改性HDL的定量方法，其为试样中所含的改性HDL的定量方法，其中，使所述改性HDL与改性HDL结合蛋白结合，对所述改性HDL结合蛋白与所述改性HDL的结合体进行定量，所述改性HDL结合蛋白包含具有因子V的L链部位的序列的蛋白质或其突变体。的序列的蛋白质或其突变体。的序列的蛋白质或其突变体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改性HDL的定量方法以及用于该定量方法的分析用试剂


[0001]本专利技术涉及能够用于生活习惯病风险及其治愈效果的判定的改性HDL的定量方法以及用于该定量方法的分析用试剂。

技术介绍

[0002]HDL(High
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Density Lipoprotein，高密度脂蛋白)是所谓的胆固醇的一种，比重高、粒径小。已知HDL负责从组织向肝脏的胆固醇的输送。若HDL在血中浓度较高，则使动脉硬化的风险降低，因此有时也通称为“有益胆固醇”。另一方面，比重低的LDL(Low
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Density Lipoprotein，低密度脂蛋白)作为“有害胆固醇”而已知。HDL和LDL的浓度被用作健康诊断的指标。
[0003]作为HDL的生理活性，不仅抑制LDL的氧化，而且通过NO的增加等减轻由氧化LDL引起的细胞毒性，发挥抗动脉硬化效果。但是，在冠状动脉疾病患者中，血中改性HDL增加，其经由LOX
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1作用于血管，促进动脉硬化，在人的动脉硬化灶中，作为HDL的载脂蛋白的ApoAI改性而成的物质大量蓄积。由于这些结果，为了将HDL用作健康诊断的指标，不仅需要测定HDL的浓度，还需要分别对具有本来的生理活性的HDL和由于改性等而活性发生了变化的HDL进行定量。尤其是，认为如果能够对改性HDL进行定量，则能够用于包含上述冠状动脉疾病在内的、与循环系统以及血液相关的疾病及其风险的验证。
[0004]专利文献1公开了一种功能障碍HDL的测定方法，其为试样中所含的功能障碍HDL的测定方法，其中，使试样与功能障碍HDL的受体接触，使试样中的功能障碍HDL与受体结合，并对与受体结合的功能障碍HDL进行检测，受体为LOX
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1或其变体，受体固定化于载体，使对功能障碍HDL进行识别的抗体进一步与结合于受体的功能障碍HDL结合。该技术试图提供一种能够广泛检测多种分子形态的功能障碍HDL的功能障碍HDL测定技术，并且提供利用了该技术的生活习惯病的检测技术。
[0005]另外，本专利技术的专利技术人在专利文献2中公开了在与LOX
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1结合的LOX
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1结合蛋白序列上直接或经由间隔物连结有ApoA1的全部蛋白序列或部分片段蛋白序列的融合蛋白以及使用了该融合蛋白的高密度脂蛋白的测定试剂盒。该技术通过测定由LOX
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1和抗ApoA1抗体同时识别的HDL，能够测定接受了各种改性的HDL，以及使用如针对LOX
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1的抗体(抗LOX
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1抗体)的LOX
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1结合部位等那样使与LOX
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1特异性结合的蛋白质和ApoA1融合而成的融合蛋白。通过该融合蛋白，能够同时识别接受了各种改性的HDL，用于测定受体结合活性并测定生理活性本身，因此想要得到不含脂质、能够长期保存、能够再现性地进行调整、能够降低各个测定试验间的偏差而提高可靠性的可成为参考的融合蛋白。现有技术文献专利文献
[0006]专利文献1：日本特许第6231307号公报专利文献2：日本特愿2018
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024007

技术实现思路

专利技术所要解决的问题
[0007]改性HDL在理论上在实验室中可以通过专利文献1中记载的技术进行定量。本专利技术的专利技术人的专利文献2的技术与现有技术相比进一步精炼。可以预想到，应用这些方法，容易建立即使不是充分精炼也能够用于改性HDL的定量的方法。
[0008]然而，现状是专利文献1的技术也没有达到普及。进一步地，即使使用本专利技术的专利技术人的专利文献2的技术，使用实验室以外的条件、不同的检体实施时，有时改性HDL的定量结果也不是恒定的。上述差异除了实验室内的条件以外，还考虑了实施技术的人的试验技术的差异等各种因素。本专利技术的专利技术人考虑到上述的历史经过和在临床的实际应用中即使条件稍差也应该能够进行测定，以将改性HDL的定量技术改良为更具有通用性的定量技术为目标进行了深入研究。
[0009]本专利技术是鉴于上述情况而完成的，其目的在于提供一种与以往相比能够更稳定且准确地对改性HDL进行定量、对心/血管系统疾病、糖尿病或糖尿病性疾病等、或其发展程度的判定有用的改性HDL的定量方法、以及用于该定量方法的分析用试剂。用于解决问题的手段
[0010]为了解决上述问题，本专利技术具有以下的方式。[1]一种改性HDL的定量方法，其为试样中所含的改性HDL的定量方法，其中，使所述改性HDL与改性HDL结合蛋白结合，对所述改性HDL结合蛋白与所述改性HDL的结合体进行定量，所述改性HDL结合蛋白包含具有因子V的L链部位的序列的蛋白质或其突变体。[2]在所述改性HDL的定量方法的基础上，所述改性HDL结合蛋白包含因子V的磷脂识别部位的序列。[3]在所述改性HDL的定量方法的基础上，所述改性HDL结合蛋白包含因子V的序列。[4]在所述改性HDL的定量方法的基础上，所述改性HDL结合蛋白是具备与作为因子V的磷脂识别部位的C1
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C2结构域具有部分同源性的部位的蛋白质。[5]在所述改性HDL的定量方法的基础上，具备与所述C1
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C2结构域具有部分同源性的部位的蛋白质为MFG
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E8、Del
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1或因子VIII。[6]在所述改性HDL的定量方法的基础上，所述改性HDL结合蛋白为重组蛋白。[7]在所述改性HDL的定量方法的基础上，所述定量是形成所述改性HDL与所述改性HDL结合蛋白的复合体并通过免疫分析对所述复合体进行定量。[8]在所述改性HDL的定量方法的基础上，通过使用了将所述改性HDL结合蛋白、或将与其结合的蛋白质固相化的ELISA板的ELISA法来进行基于所述免疫分析的定量。[9]在所述改性HDL的定量方法的基础上，所述定量是形成所述改性HDL、所述改性HDL结合蛋白以及LOX
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1蛋白的复合体并通过免疫分析对所述复合体进行定量。[10]在所述改性HDL的定量方法的基础上，在所述定量中，使用血清或血浆作为试样。[11]在所述改性HDL的定量方法的基础上，在所述定量中具备使用血清作为试样并在所述试样中添加所述改性HDL结合蛋白的工序。
[12]一种分析用试剂，所述分析用试剂用于为了对心/血管系统疾病、糖尿病或糖尿病性疾病、它们的风险或其发展程度进行判定的改性HDL的定量，其中，所述分析用试剂包含能够与所述改性HDL结合的改性HDL结合蛋白，所述改性HDL结合蛋白包含具有因子V的L链部位序列的蛋白质或其突变体。[13]在所述分析用试剂的基础上，所述改性HDL结合蛋白包含因子V的磷脂识别部位的序列。[14]在所述分析用试剂的基础上，所述改性HDL结合蛋白包含因子V的序列。[15]在所述分析用试剂的基础上，所述改性HDL结合蛋白是具备与作为因子V的磷脂识别部位的C1
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C2结构域具有部分同源性的部位的蛋白质。[16]在所述分析用试剂的基础上，具备与所述C1
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C2结构域具有部分同源本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种改性HDL的定量方法，其为试样中所含的改性HDL的定量方法，其中，使所述改性HDL与改性HDL结合蛋白结合，对所述改性HDL结合蛋白与所述改性HDL的结合体进行定量，所述改性HDL结合蛋白包含具有因子V的L链部位的序列的蛋白质或其突变体。2.根据权利要求1所述的改性HDL的定量方法，其中，所述改性HDL结合蛋白包含因子V的磷脂识别部位的序列。3.根据权利要求1或2所述的改性HDL的定量方法，其中，所述改性HDL结合蛋白包含因子V的序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的改性HDL的定量方法，其中，所述改性HDL结合蛋白是具备与作为因子V的磷脂识别部位的C1
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C2结构域具有部分同源性的部位的蛋白质。5.根据权利要求4所述的改性HDL的定量方法，其中，具备与所述C1
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C2结构域具有部分同源性的部位的蛋白质为MFG
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E8、Del
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1或因子VIII。6.根据权利要求1至5中任一项所述的改性HDL的定量方法，其中，所述改性HDL结合蛋白为重组蛋白。7.根据权利要求1至6中任一项所述的改性HDL的定量方法，其中，所述定量是形成所述改性HDL与所述改性HDL结合蛋白的复合体并通过免疫分析对所述复合体进行定量。8.根据权利要求7所述的改性HDL的定量方法，其中，通过使用了将所述改性HDL结合蛋白、或将与所述改性HDL结合蛋白结合的蛋白质固相化的ELISA板的ELISA法来进行基于所述免疫分析的定量。9.根据权利要求1至8中任一项所述的改性HDL的定量方法，其中，所述定量是形成所述改性HDL、所述改性HDL结合蛋白以及LOX

【专利技术属性】
技术研发人员：泽村达也，垣野明美，
申请(专利权)人：国立大学法人信州大学，
类型：发明
国别省市：