一种在特定位点以二肽投料制备索马鲁肽的方法技术

本发明专利技术属于多肽合成领域，涉及一种在特定位点以二肽投料进行索马鲁肽制备的方法。本发明专利技术在30位Ala，24位Ala，21位Glu，15位Asp，11位Thr，9位Glu处中的至少一个位点以二肽的形式投料，从反应机理上避免了上述六个位点在固相合成过程中的消旋，从而避免了索马鲁肽色谱分离过程中主峰附近难分离杂质的生成，使所得产品易于进行纯化精制，保障产品质量的同时，大幅提升了纯化收率。幅提升了纯化收率。

【技术实现步骤摘要】
一种在特定位点以二肽投料制备索马鲁肽的方法


[0001]本专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及一种以六个二肽片段进行固相合成，制备高纯度索马鲁肽的方法。

技术介绍

[0002]索马鲁肽(Semaglutide)是内源性GLP
‑
1类似物，Lys侧链以AEEA，γ
‑
Glu及十八烷二酸修饰，其结构如下：
[0003][0004]本品由诺和诺德公司研发，主要用于治疗2型糖尿病，并对体重控制有显著效果。原研公司的制备工艺为主链发酵加侧链化学修饰。
[0005]目前固相合成工艺已能较好的进行索马鲁肽原料药的制备，与原研公司的生物发酵工艺相比，氨基酸消旋杂质为固相合成所特有的，为保障与原研产品质量的一致性，在固相合成过程中控制氨基酸消旋杂质非常重要。目前固相合成常用的缩合剂体系有HATU/HOBt/DIEA、HBTU/HOBt/DIEA、PyBOP/HOBt/DIEA、DIC/HOBt、DIC/HOAt、DIC/Cl
‑
HOBt等，此类缩合剂能够有效的控制固相合成过程中的消旋，但无法做到生物发酵工艺中的彻底避免。
[0006]专利CN201910677458.3将索马鲁肽肽链合成分成了三个阶段，37
‑
17位采用常规固相合成工艺，逐步缩合，16
‑
11位以CTC树脂制备全保护肽后与37
‑
17位肽树脂缩合，再逐步缩合10
‑
7位四个氨基酸。此工艺解决的技术难题是16
‑r/>11位氨基酸在固相合成过程中比较难以缩合，所解决的杂质分类为16
‑
11位氨基酸的缺失，并非消旋。
[0007]专利CN201910105996.5也将索马鲁肽主链的31个氨基酸分成了三段，第一段12个，第二段12个，第三段7个，每一段在CTC树脂上制备全保护肽后，在液相体系下合成。此路线为经典片段法固液结合制备多肽，解决的主要技术难题为长链多肽在后期缩合时比较困难，同样未能关注与索马鲁肽性质相似的单消旋杂质。
[0008]专利CN201811466181.1将索马鲁肽主链的31个氨基酸分成了六段，第一肽片段序列为索马鲁肽序列中的第7
‑
10位氨基酸，第二肽片段序列为索马鲁肽序列中的第11
‑
15位氨基酸，第三肽片段序列为索马鲁肽序列中的第16
‑
22位氨基酸，第四肽片段序列为索马鲁肽序列中的第23
‑
28位氨基酸，第五肽片段序列为索马鲁肽序列中的第29
‑
32位氨基酸，第六肽片段序列为索马鲁肽序列中的第33
‑
37位氨基酸。此六个片段均在CTC树脂上合称为全保护肽，与专利CN201910105996.5不同，此专利获得六个片段肽后，不是在液相中进行片段缩合，而是在树脂上以片段的方式逐段缩合。以此工艺进行索马鲁肽制备，能过将粗品纯度
明显提高，但成本较高，不适合工业大规模生产，同时也未对单消旋杂质进行重点控制。
[0009]目前FDA对多肽仿制药杂质的质控要求为：原研制品中不存在的杂质，仿制药制品中杂质水平不能超过0.1％，要想满足此质控要求，最好的解决办法是在合成过程中避免相应杂质的生成。原研制品采用发酵工艺，理论上不存在氨基酸单消旋杂质，因此在固相合成过程中控制消旋杂质格外重要。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的是提供一种能够避免难分离消旋杂质产生的索马鲁肽固相合成方法。
[0011]本专利技术第一方面，提供了一种索马鲁肽固相合成方法，包括步骤：
[0012](a)以王树脂或CTC树脂为固相载体，在偶联剂存在下，与Fmoc
‑
Gly
‑
OH缩合，得氨基酸树脂；然后按照索马鲁肽的肽序与相应的氨基酸前体偶联，并在30位Ala，24位Ala，21位Glu，15位Asp，11位Thr，9位Glu中的至少一个位点以二肽的形式投料，得全保护索马鲁肽肽树脂；
[0013](b)裂解所述索马鲁肽肽树脂，得索马鲁肽粗品。
[0014]在另一优选例中，步骤(a)中，所述索马鲁肽按照以下肽序依次偶联：Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH，Fmoc
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH，Fmoc
‑
Val
‑
OH，Fmoc
‑
Leu
‑
OH，Fmoc
‑
Ala
‑
Trp(Boc)
‑
OH，Fmoc
‑
Ile
‑
OH，Fmoc
‑
Phe
‑
OH，Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(Alloc)
‑
OH，Fmoc
‑
Ala
‑
Ala
‑
OH，Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH，Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Leu
‑
OH，Fmoc
‑
Tyr(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Asp(OtBu)
‑
Val
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Phe
‑
OH，Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Aib
‑
OH，Boc
‑
His(Trt)
‑
OH，和Ste
‑
γ
‑
Glu(AEEA
‑
AEEA
‑
OH)
‑
OtBu(side chain)。
[0015]在另一优选例中，步骤(a)中，所述的王树脂或CTC树脂初始替代度独立地为0.4～0.5mmol/g，或Fmoc
‑
Gly
‑
Resin的替代度为0.35～0.40mmol/g。
[0016]在另一优选例中，步骤(a)中，各偶联反应的偶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种索马鲁肽固相合成方法，其特征在于，包括步骤：(a)以王树脂或CTC树脂为固相载体，在偶联剂存在下，与Fmoc
‑
Gly
‑
OH缩合，得氨基酸树脂；然后按照索马鲁肽的肽序与相应的氨基酸前体偶联，并在30位Ala，24位Ala，21位Glu，15位Asp，11位Thr，9位Glu中的至少一个位点以二肽的形式投料，得全保护索马鲁肽肽树脂；和(b)裂解所述索马鲁肽肽树脂，得索马鲁肽粗品。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述索马鲁肽按照以下肽序依次偶联：Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH，Fmoc
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH，Fmoc
‑
Val
‑
OH，Fmoc
‑
Leu
‑
OH，Fmoc
‑
Ala
‑
Trp(Boc)
‑
OH，Fmoc
‑
Ile
‑
OH，Fmoc
‑
Phe
‑
OH，Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(Alloc)
‑
OH，Fmoc
‑
Ala
‑
Ala
‑
OH，Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH，Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Leu
‑
OH，Fmoc
‑
Tyr(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Asp(OtBu)
‑
Val
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Phe
‑
OH，Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
Gly
‑
OH，Fmoc
‑
Aib
‑
OH，Boc
‑
His(Trt)
‑
OH，和Ste
‑
γ
‑
Glu(AEEA
‑
AEEA
‑
OH)
‑
OtBu(side chain)，得全保护索马鲁肽肽树脂，其结构如下：Boc
‑
His(Trt)
‑
Aib
‑
Glu(OtBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Phe
‑
Thr(tBu)
‑
Ser(tBu)
‑
Asp(OtBu)
‑
Val
‑
Ser(tBu)
‑
Ser(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Leu
‑
Glu(OtBu)
‑
Gly
‑
Gln(Trt)
‑
Ala
‑
Ala
‑
Lys(side chain)
‑
Glu(OtBu)
‑
Phe
‑
Ile
‑
Ala
‑
Trp(Boc)
‑
Leu
‑
Val
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Arg(pbf)
‑
Gly
‑
Resin。3.如权利要求1或2所述的合成方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述的王树脂或CTC树脂初始替代度独立地为0.4～0.5mmol/g，或Fmoc
‑
Gly
‑
Resin的替代度为0.35～0.40mmol/g。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：李佶辉，陈雷，陆荣健，
申请(专利权)人：前沿生物药业南京股份有限公司，
类型：发明
国别省市：