鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和杂交种的引物、方法和试剂盒技术

本申请公开了一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的引物、方法和试剂盒，涉及分子生物学技术领域。所述引物正向序列为：TTATCTGACAGAAGCACCAG；反向序列为：CAGTTACCACTTTGGACTAT。本申请通过筛选得到了一对可以将瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种准确鉴定出来的引物。鉴定过程仅需剪取少量鳍条，提取组织DNA，使用该引物进行PCR扩增后进行琼脂糖凝胶电泳即可。该方法具有准确可靠、成本较低、操作简单的优势，且不受制于鱼体的生长情况，可在各养殖阶段取样鉴定，对于实际生产具有重要意义。具有重要意义。具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和杂交种的引物、方法和试剂盒


[0001]本申请涉及分子生物学
，具体涉及一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和杂交种的引物、方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco(Richardson)隶属鲇形目(Siluriformes)、鲿科(Bagridae)、黄颡鱼属(Pelteobagrus)，广泛分布于我国江河、湖泊、水库等自然水域。因其肉质鲜美、肌间刺少、营养价值高深受消费者的喜爱。20世纪90年代以来，黄颡鱼市场需求量急剧上涨，自然水域的产量难以满足，鱼类学家通过人工催产和授精突破了黄颡鱼大规模化人工繁育技术，推动了黄颡鱼产业的发展。在黄颡鱼养殖过程中，我国学者发现黄颡鱼雄鱼生长速度显著快于雌鱼，因此开拓出了一条分子标记辅助的全雄鱼培育技术路线，并培育出新品种全雄黄颡鱼“全雄1号”，极大提高黄颡鱼产量和经济效益。然而,亲本超雄鱼繁育系经过多代自交之后会生退化,自交系在生长和抗病等性能方面呈现减弱的趋势,此时需要对全雄黄颡鱼进行品种改良或开发出其他黄颡鱼新品种。
[0003]杂交育种是遗传育种中最经典的方法之一，瓦氏黄颡鱼与黄颡鱼亲缘关系较近，个体远大于黄颡鱼，因此研究人员选取瓦氏黄颡鱼作为父本与黄颡鱼杂交，产生新品种“黄优1号”，其形态特征与黄颡鱼接近，生长速度与成活率优于黄颡鱼，受到养殖户的一致青睐。然而，由于人工养殖密度过大、环境变化等原因，鱼类养殖特别容易出现开春大规模死亡的情况，再加上黄颡鱼体表无鳞，在养殖过程中更易受到水体环境影响，开春死亡率特别高。通过选育个体更大的近缘物种长吻鮠作为父本与瓦氏黄颡鱼杂交，得到的后代可以在半年时间达到一年龄的黄颡鱼上市规格，这样可以在开春前上市，避免大规模死亡。在实际生产过程中，由于杂交种的形态特征与父母本非常接近，养殖过程会存在混杂现象，影响生产过程。
[0004]DNA分子标记是根据物种间DNA序列差异设计的引物，可准确鉴定物种，被广泛应用于物种鉴定、性别鉴定、亲子鉴定等领域。由于瓦氏黄颡鱼、长吻鮠及杂交种外形相似，此前通过形态学方法对其进行鉴定存在较大困难和鉴定错误，因此设计出可以稳定、高效鉴别瓦氏黄颡鱼、长吻鮠及其杂交种的DNA分子标记，对于生产实践意义重大。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本申请的目的在于能够提供一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和杂交种的引物、方法和试剂盒，旨在解决上述
技术介绍
中关于无法高效鉴别瓦氏黄颡鱼、长吻鮠及其杂交种的问题，通过使用该引物在瓦氏黄颡鱼、长吻鮠及其杂交种中的PCR产物凝胶电泳图可直观的进行区分。
[0006]为了实现上述技术目的，本申请主要采用如下技术方案：
[0007]第一方面，本申请提供了一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的引物，所述引物正向序列为：TTATCTGACAGAAGCACCAG；反向序列为：CAGTTACCACTTTGGACTAT。
[0008]第二方面，本申请提供了一种如权利要求1第一方面所述的快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的引物在鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种中的应用。
[0009]第三方面，本申请提供了一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的方法，所述方法包括如下步骤：
[0010]提取待鉴定样本的DNA；
[0011]利用如第一方面所述的引物对提取的待测DNA进行PCR扩增；
[0012]将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳后条带位置判断鉴定样本种类。
[0013]第四方面，本申请提供了一种检测瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1第一方面所述的引物。
[0014]与现有技术相比，本申请至少具有如下有益效果：
[0015]本申请通过筛选得到了一对可以将瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种准确鉴定出来的引物。鉴定过程仅需剪取少量鳍条，提取组织DNA，使用该引物进行PCR扩增后进行琼脂糖凝胶电泳即可。该方法具有准确可靠、成本较低、操作简单的优势，且不受制于鱼体的生长情况，可在各养殖阶段取样鉴定，对于实际生产具有重要意义。
附图说明
[0016]图1为本申请实施例提供的引物设计示意图；
[0017]图2为本申请实施例中公开提供的PCR扩增产物的凝胶电泳结果图。
具体实施方式
[0018]为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。本申请中未详细单独说明的试剂均为常规试剂，均可从商业途径获得；未详细特别说明的方法均为常规实验方法，可从现有技术中获知。
[0019]需要说明的是，本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序，也不对其后的技术特征起到实质的限定作用。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本申请的实施例能够除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
[0020]本申请实施例提供了一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的引物，所述引物正向序列为：TTATCTGACAGAAGCACCAG；反向序列为：CAGTTACCACTTTGGACTAT。
[0021]本申请实施例提供了一种如上所述的快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的引物在鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种中的应用。
[0022]本申请实施例提供了一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的方法，所述方法包括如下步骤：
[0023]提取待鉴定样本的DNA；
[0024]利用如上所述的引物对提取的待测DNA进行PCR扩增；
[0025]将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳后条带位置判断鉴定样本种类。
[0026]在一些实施例中，所述待鉴定样本以鱼的鳍条组织作为提取样本。
[0027]在一些实施例中，所述PCR扩增体系为10μL，包括5μL2xTaqMasterMix、0.5μL10uM的正反向引物、1μL DNA模板、3μL ddH2O。
[0028]在一些实施例中，根据权利要求3所述的快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的方法，所述PCR扩增程序为：在95℃预变性3
‑
5min，然后进入循环扩增阶段：95℃40s，54℃30s，72℃60s，循环30
‑
35次，最后在72℃保温7min。
[0029]在一些实施例中，根据电泳后条带位置判断鉴定样本种类的方法为：若仅扩增出一条339bp的条带，则鉴定样本为瓦氏黄颡鱼；若仅扩增出本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的引物，所述引物正向序列为：TTATCTGACAGAAGCACCAG；反向序列为：CAGTTACCACTTTGGACTAT。2.一种如权利要求1所述的快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的引物在鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种中的应用。3.一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的方法，所述方法包括如下步骤：提取待鉴定样本的DNA；利用如权利要求1所述的引物对提取的待测DNA进行PCR扩增；将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳后条带位置判断鉴定样本种类。4.根据权利要求3所述的快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的方法，所述待鉴定样本以鱼的鳍条组织作为提取样本。5.根据权利要求3所述的快速鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和其杂交种的方法，所述PCR扩增体系为10μL，包括5μL2xTaqMasterMix、...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅洁，廖倩，巩高瑞，孙瑞东，王忠卫，桂建芳，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
国别省市：