本发明专利技术提供了一种提高啤酒酵母活性的新方法，包括如下步骤：(1)制备黄芪提取物；(2)制备山楂提取物；(3)制备甘草提取物；(4)制备杜仲叶提取物；(5)将黄芪提取物、山楂提取物、甘草提取物和杜仲叶提取物按比例混合，得提取物混合溶液；(6)活化啤酒酵母，获得活化种子液；(7)在YPD液体培养基中加入活化种子液，再加入3％～20％提取物混合溶液共培养。本发明专利技术还提供了一种复合菌剂的制备方法。本发明专利技术通过将黄芪、山楂、甘草和杜仲叶添加于啤酒酵母中共培养来显著提高啤酒酵母的活性，通过将黄芪、山楂、甘草和杜仲叶提取物混合溶液干燥成粉与冻干啤酒酵母菌粉混合来制成复合菌剂，作为一种绿色饲料添加剂用于养殖业。绿色饲料添加剂用于养殖业。绿色饲料添加剂用于养殖业。
【技术实现步骤摘要】
一种提高啤酒酵母活性的新方法及复合菌剂的制备
[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种提高啤酒酵母活性的新方法及复合菌剂的制备。
技术介绍
[0002]啤酒酵母为用于酿造啤酒的酵母，其细胞形态为近球形的椭圆体。啤酒酵母中几乎不含糖、脂肪和淀粉，而含有优质完全蛋白质、优质矿物质、优质功能性膳食纤维等。因此，啤酒酵母可以作为益生菌饲料添加剂用于养殖业。
[0003]但是，在作为饲料饲喂后，啤酒酵母需要有效耐受动物的消化系统，特别是胃酸和胆盐对其活性的影响。因此，如何提高现有啤酒酵母饲料的活性，成为当前领域亟待解决的难题。
技术实现思路
[0004]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种提高啤酒酵母活性的新方法及复合菌剂的制备，其通过将黄芪、山楂、甘草和杜仲叶添加于啤酒酵母中共培养来显著提高啤酒酵母的活性(即，生长繁殖能力和耐酸、耐胆盐能力)，通过将黄芪、山楂、甘草和杜仲叶提取物混合溶液干燥成粉与冻干的啤酒酵母菌粉混合来制成复合菌剂，作为一种绿色饲料添加剂用于养殖业。
[0005]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0006]一种提高啤酒酵母活性的新方法，包括如下步骤：
[0007](1)将黄芪片放入清水中，浸泡过夜；次日，进行超声提取，超声功率800W，时间30min，温度50℃；过滤后离心处理，获得黄芪提取物；
[0008](2)将山楂放入清水中，煮沸1h，过滤获得第一次浸提液；将过滤后的残渣与清水再次混合煮沸30min，过滤获得第二次浸提液；合并两次浸提液，并加60％无水乙醇，醇沉过夜；次日离心后，取上清后回收乙醇，获得山楂提取物；
[0009](3)将甘草放入清水中，浸泡1h，煎煮2h；过滤后，同样条件煎煮残渣2次，时间分别为1.5h和1h；合并三次煎煮液加入70％无水乙醇，醇沉过夜；次日离心后，取上清后回收乙醇，获得甘草提取物；
[0010](4)向杜仲叶中加入乙醇，浸泡过夜；在800W，60℃下超声40min；过滤后进行旋转蒸发，获得杜仲叶提取物；
[0011](5)将获得的黄芪提取物、山楂提取物、甘草提取物和杜仲叶提取物按照2：3：1：2的比例混合，获得提取物混合溶液；
[0012](6)将啤酒酵母接种至YPD液体培养基中，并在37℃的培养箱中过夜培养，获得活化种子液；
[0013](7)在新鲜的YPD液体培养基中加入上述活化种子液，再加入3％～20％的提取物混合溶液，在37℃温度下共培养。
[0014]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中，将黄芪片按质量比1：5放入清水中，浸泡过夜；超声提取后，四层纱布过滤，滤液在20℃下10000rpm/min离心5min；离心后，取上清定容至200mL，即得黄芪提取物。
[0015]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(2)中，将山楂按质量比1：10放入清水中，100℃煮沸1h，过滤获得第一次浸提液；将过滤后的残渣与清水，按质量比1：5再次混合煮沸30min，过滤获得第二次浸提液；合并两次浸提液，加无水乙醇，配置60％醇沉液，4℃过夜；次日，4℃下11000rpm/min离心5min；取上清后回收乙醇，获得提取液并定容至200mL，即得山楂提取物。
[0016]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(3)中，将甘草按质量比1：10放入清水中，浸泡、煎煮；用四层纱布过滤后，同样条件下煎煮残渣2次；合并三次煎煮液加入无水乙醇，配置70％醇沉液，4℃过夜；次日，20℃下10000rpm/min离心5min；取上清后回收乙醇，获得提取液并定容至200mL，即得甘草提取物。
[0017]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中，70％乙醇浸泡杜仲叶一夜后，超声处理；用四层纱布过滤后，旋转蒸发掉乙醇，获得水溶液，定容至200mL，即得杜仲叶提取物。
[0018]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(6)中，用接种环划取一环斜面保藏的啤酒酵母，接种至100mL YPD液体培养基中，在37℃的培养箱中过夜培养，得到活化种子液。
[0019]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(7)中，提取物混合溶液的具体添加量为10％。
[0020]一种复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：
[0021](1)将黄芪片放入清水中，浸泡过夜；次日，进行超声提取，超声功率800W，时间30min，温度50℃；过滤后离心处理，获得黄芪提取物；
[0022](2)将山楂放入清水中，煮沸1h，过滤获得第一次浸提液；将过滤后的残渣与清水再次混合煮沸30min，过滤获得第二次浸提液；合并两次浸提液，并加60％无水乙醇，醇沉过夜；次日离心后，取上清后回收乙醇，获得山楂提取物；
[0023](3)将甘草放入清水中，浸泡1h，煎煮2h；过滤后，同样条件煎煮残渣2次，时间分别为1.5h和1h；合并三次煎煮液加入70％无水乙醇，醇沉过夜；次日离心后，取上清后回收乙醇，获得甘草提取物；
[0024](4)向杜仲叶中加入乙醇，浸泡过夜；在800W，60℃下超声40min；过滤后进行旋转蒸发，获得杜仲叶提取物；
[0025](5)将获得的黄芪提取物、山楂提取物、甘草提取物和杜仲叶提取物按照2：3：1：2的比例混合，获得提取物混合溶液；接着，对提取物混合溶液进行喷雾干燥，获得提取物混合粉末；
[0026](6)将啤酒酵母接种至YPD液体培养基中，并在37℃的培养箱中过夜培养，获得活化种子液；
[0027](7)过夜培养结束后，离心收集菌体，并用无菌生理盐水洗涤若干次，得到啤酒酵母菌泥；在啤酒酵母菌泥中添加保护剂，预冻后置于冷冻干燥机中冻干；冻干结束后，研磨成粉；
[0028](8)将步骤(5)获得的提取物混合粉末与步骤(7)获得的啤酒酵母冻干粉进行混合，即得目标所需的复合菌剂。
[0029]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中，喷雾干燥的条件为进风温度170℃，蠕动泵速度7rpm/min。
[0030]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(6)中，过夜培养结束后，用高速冷冻离心机在4℃，5000rpm/min条件下离心6min，收集菌体，并用无菌生理盐水洗涤3次，得到啤酒酵母菌泥；在啤酒酵母菌泥中添加发酵液体积20％的保护剂，在
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70℃下预冻2h后置于冷冻干燥机中冷冻干燥36～48h；冻干结束后，研磨成粉；其中，保护剂的组成为：脱脂乳10％，海藻糖10％，蔗糖5％。
[0031]本专利技术中，采用的YPD液体培养基为本领域常用培养基，其成分不再赘述。与提取物混合溶液作用的啤酒酵母，采用本领域任意可购买获得啤酒酵母即可。
[0032]本专利技术原料的功效原理：
[0033]黄芪中包含20多种微量元素、50多种皂苷类和三萜类化合物以及20多种黄酮类物质。其中，黄芪多糖是黄芪根部的多糖提取物，在黄芪中含量最多，具有很强的免疫活性，是增强机体免疫作用的重要部分。
[0034]山楂中主要含本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种提高啤酒酵母活性的新方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将黄芪片放入清水中，浸泡过夜；次日，进行超声提取，超声功率800W，时间30min，温度50℃；过滤后离心处理，获得黄芪提取物；(2)将山楂放入清水中，煮沸1h，过滤获得第一次浸提液；将过滤后的残渣与清水再次混合煮沸30min，过滤获得第二次浸提液；合并两次浸提液，并加60％无水乙醇，醇沉过夜；次日离心后，取上清后回收乙醇，获得山楂提取物；(3)将甘草放入清水中，浸泡1h，煎煮2h；过滤后，同样条件煎煮残渣2次，时间分别为1.5h和1h；合并三次煎煮液加入70％无水乙醇，醇沉过夜；次日离心后，取上清后回收乙醇，获得甘草提取物；(4)向杜仲叶中加入乙醇，浸泡过夜；在800W，60℃下超声40min；过滤后进行旋转蒸发，获得杜仲叶提取物；(5)将获得的黄芪提取物、山楂提取物、甘草提取物和杜仲叶提取物按照2：3：1：2的比例混合，获得提取物混合溶液；(6)将啤酒酵母接种至YPD液体培养基中，并在37℃的培养箱中过夜培养，获得活化种子液；(7)在新鲜的YPD液体培养基中加入上述活化种子液，再加入3％～20％的提取物混合溶液，在37℃温度下共培养。2.根据权利要求1所述的提高啤酒酵母活性的新方法，其特征在于，所述步骤(1)中，将黄芪片按质量比1：5放入清水中，浸泡过夜；超声提取后，四层纱布过滤，滤液在20℃下10000rpm/min离心5min；离心后，取上清定容至200mL，即得黄芪提取物。3.根据权利要求1所述的提高啤酒酵母活性的新方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将山楂按质量比1：10放入清水中，100℃煮沸1h，过滤获得第一次浸提液；将过滤后的残渣与清水，按质量比1：5再次混合煮沸30min，过滤获得第二次浸提液；合并两次浸提液，加无水乙醇，配置60％醇沉液，4℃过夜；次日，4℃下11000rpm/min离心5min；取上清后回收乙醇，获得提取液并定容至200mL，即得山楂提取物。4.根据权利要求1所述的提高啤酒酵母活性的新方法，其特征在于，所述步骤(3)中，将甘草按质量比1：10放入清水中，浸泡、煎煮；用四层纱布过滤后，同样条件下煎煮残渣2次；合并三次煎煮液加入无水乙醇，配置70％醇沉液，4℃过夜；次日，20℃下10000rpm/min离心5min；取上清后回收乙醇，获得提取液并定容至200mL，即得甘草提取物。5.根据权利要求1所述的提高啤酒酵母活性的新方法，其特征在于，所述步骤(4)中，70％乙醇浸泡杜仲叶一夜后，超声处理；用四层纱布过滤后，旋转蒸发掉乙醇，获得...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘静，汪维云，王雅玲，杨恩东，孙冬冬，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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