一种血浆游离DNA提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种血浆游离DNA提取试剂盒及提取方法，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术的试剂盒包含结合液、磁珠悬浮液、洗涤液A、洗涤液B、洗脱液；其中，结合液含Tris

【技术实现步骤摘要】
一种血浆游离DNA提取试剂盒及提取方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种血浆游离DNA提取试剂盒及提取方法。

技术介绍

[0002]血浆游离DNA，又称血液循环DNA，是指血液中游离于细胞外的DNA，其来源主要有3种：白细胞崩解释放的DNA、坏死组织特别是肿瘤组织释放入血液的DNA和感染病毒、细菌的DNA。近几年来，随着基因诊断技术的发展，游离DNA的应用价值越来越大，如优生筛查、肿瘤早期诊断、遗传病检测和病原体感染基因检测等。但血液中游离DNA含量一般较低，片段较小，不易提取，这大大影响了游离核酸的基因检测和各种研究的开展。
[0003]游离DNA提取方法一般有TRizol方法、离心柱法、磁珠法。其中，Trizol方法因其对操作者带来的毒性，现在越来越被弃用。磁珠法比较适合机器自动化提取，适合较多样本的高通量处理，但磁珠法的核酸提取得率不如离心柱法。然而离心柱法很实现完全的自动化提取，不适合大量样本的处理，通量受限。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种基于磁珠的高效血浆游离DNA提取试剂盒及提取方法。本专利技术从血浆中提取的游离DNA片段浓度高、纯度高，且能兼容高通量的自动化提取设备，适合高通量的血浆游离DNA提取。
[0005]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0006]一种血浆游离DNA提取试剂盒，包含结合液、洗涤液A、洗涤液B、洗脱液。所述的结合液成分为：20
‑
50mM Tris
‑
HCl、pH 7.0
‑
8.0，50
‑
150mM氯化钾，2
‑
4M异硫氰酸胍，10
‑
30mM氯化锂；所述的洗涤液A成分为：20
‑
30mM Tris
‑
HCl、pH 7.5
‑
8.0，100
‑
200mM氯化钾，2
‑
4M盐酸胍；所述的洗涤液B成分为：20
‑
30mM Tris
‑
HCl、pH 7.0
‑
8.0，75
‑
85％乙醇；所述的洗脱液成分为：20
‑
30mM Tris
‑
HCl、pH 7.5
‑
8.5，1
‑
3mM EDTA。所述的血浆游离DNA提取试剂盒还包含磁珠悬浮液。
[0007]优选的，所述的结合液成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH 7.8，70mM氯化钾，2.5M异硫氰酸胍，20mM氯化锂；所述的洗涤液A成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH 7.8，150mM氯化钾，2.5M盐酸胍；所述的洗涤液B成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH 7.8，80％乙醇；所述的洗脱液成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH8.5，2mM EDTA。
[0008]使用上述提取试剂盒提取血浆中游离DNA的方法，其包括如下步骤：
[0009](1)取游离血浆200μL加入离心管中，再加入300
‑
700μL结合液，震荡混匀1分钟；
[0010](2)向上述混合液中加入15
‑
40μL磁珠悬浮液，震荡混匀后，室温静置5
‑
10分钟；
[0011](3)将离心管放在磁力架上，使磁珠吸附，将溶液吸出丢弃；
[0012](4)向离心管中加入500
‑
800μL洗涤液A，震荡混匀1分钟，放在磁力架上，使磁珠吸附，将溶液吸出丢弃；
[0013](5)向离心管中加入500
‑
800μL洗涤液B，震荡混匀1分钟，放在磁力架上，使磁珠吸附，将溶液吸出丢弃；
[0014](6)将离心管开盖放置1分钟，使乙醇完全挥发；
[0015](7)加入25
‑
60μL洗脱液，震荡混匀1分钟，放在磁力架上，使磁珠吸附，将溶液转移到一个新的离心管中，得到提取的游离DNA。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果是：针对血浆游离DNA含量低、片段化程度高等特点优化了试剂成分，能针对性地高效回收血浆中的游离DNA，提取的DNA浓度和纯度更高，能更好地满足下游检测的要求，提高检测的灵敏度。
附图说明
[0017]图1是本专利技术血浆游离DNA提取试剂盒与凯杰血浆游离DNA提取试剂盒对同样2份血浆样本进行提取后，用1.5％琼脂糖凝胶电泳进行检测比较的结果图。M为DL2000 DNA ladder，1、2凯杰血浆游离DNA试剂盒的提取产物，3、4为本专利技术试剂盒的提取产物。
具体实施方式
[0018]下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。
[0019]实施例1
[0020]本专利技术所述的血浆游离DNA提取试剂盒包含结合液、洗涤液A、洗涤液B、洗脱液。所述的结合液成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH 7.8，70mM氯化钾，2.5M异硫氰酸胍，20mM氯化锂；所述的洗涤液A成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH 7.8，150mM氯化钾，2.5M盐酸胍；所述的洗涤液B成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH 7.8，80％乙醇；所述的洗脱液成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH 8.5，2mM EDTA。所述的血浆游离DNA提取试剂盒还包含磁珠悬浮液。
[0021]按如下方法配制100mL结合液：取2mL 1M Tris母液、0.52g氯化钾、29.5g异硫氰酸胍、10mL 200mM氯化锂母液，加去离子水至80mL，用盐酸调pH至7.8，再加去离子水定容到100mL。
[0022]按照如下方法配制100mL洗涤液A：取2mL 1M Tris母液、1.12g氯化钾、23.88g盐酸胍，加去离子水至80mL，用盐酸调pH至7.8，再加去离子水定容到100mL。
[0023]按照如下方法配制100mL洗涤液B：取2mL 1M Tris
‑
HCl母液pH7.8，加水定容到100mL；然后取上述溶液20mL，加入80mL乙醇。
[0024]按照如下方法配制100mL洗脱液：取2mL 1M Tris母液、1mL 200mM EDTA母液，用盐酸调pH至8.5，然后加去离子水定容至100mL。
[0025]使用上述配制好的溶液按如下步骤进行核酸提取：
[0026](1)取游离血浆200μL加入离心管中，再加入400μL结合液，震荡混匀1分钟；
[0027](2)向上述混合液中加入25μL磁珠悬浮液，震荡混匀后，室温静置8分钟；
[0028](3)将离心管放本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：包含结合液、洗涤液A、洗涤液B、洗脱液；所述的结合液成分为：20
‑
50mM Tris
‑
HCl、pH 7.0
‑
8.0，50
‑
150mM氯化钾，2
‑
4M异硫氰酸胍，10
‑
30mM氯化锂；所述的洗涤液A成分为：20
‑
30mM Tris
‑
HCl、pH 7.5
‑
8.0，100
‑
200mM氯化钾，2
‑
4M盐酸胍；所述的洗涤液B成分为：20
‑
30mM Tris
‑
HCl、pH 7.0
‑
8.0，75
‑
85％乙醇；所述的洗脱液成分为：20
‑
30mM Tris
‑
HCl、pH 7.5
‑
8.5，1
‑
3mM EDTA。2.根据权利要求1所述的血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：还包含磁珠悬浮液。3.根据权利要求1所述的血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：所述的结合液成分为：20mM Tris
‑
HCl、pH 7.8，70mM氯化钾，2.5M异硫氰酸胍，20mM氯化锂。4.根据权利要求1所述的血浆游离DNA提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡梦竹，
申请(专利权)人：武汉臻熙医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：