CHAPS在制备降低测值跳值的化学发光免疫检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术提供了CHAPS在制备降低测值跳值的化学发光免疫检测试剂盒中的应用，属于体外诊断检测技术领域，在化学发光免疫检测时，加入CHAPS，可有效增加血清样本中膜蛋白或破碎的细胞片段的溶解，降低测试反应中引入的非特异性反应，从而有效降低化学发光免疫检测试剂盒测试的跳值概率。测试的跳值概率。

【技术实现步骤摘要】
CHAPS在制备降低测值跳值的化学发光免疫检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及体外诊断检测
，是涉及CHAPS的新用途，具体涉及CHAPS在制备降低测值跳值的化学发光免疫检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染可引起各种类型肝脏疾病，包括急慢性乙型肝炎、肝硬化、甚至肝细胞癌。HBV在电镜下是大约42～45nm长的DNA颗粒(Dane颗粒)，Dane颗粒有双层外壳。乙型肝炎表面抗原是乙型肝炎病毒(HBV)的外壳成分，为一条大小不一的多肽。内壳是一个核心蛋白称为乙型肝炎核心蛋白(HBc)。自从1967年首次发现乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)以来，HBsAg从最初作为慢性乙型肝炎病毒感染的定性诊断指标逐渐发展为目前广泛应用的HBsAg定量诊断及检测指标。乙型肝炎病毒表面抗原的检测通常用于辅助诊断怀疑乙型肝炎病毒(HBV)感染的患者并对患者的感染状态进行监测，监测感染者是否已治愈或成为慢性乙型肝炎病毒携带者。在对慢性或急性乙型肝炎进行诊断时，乙型肝炎病毒表面抗原的反应性结果应与患者的病史和其他乙肝血清学标志物相结合进行诊断，目前HBsAg的临床诊断方法主要有胶体金法、酶联免疫法、电化学发光法、时间分辨免疫分析法、化学发光免疫分析法等。
[0003]但是任何一种方法的检测在实验操作过程中都会因为操作不规范引起测值的不准确，即假阳性；针对这种操作不规范引起的假阳性分析原因为检测系统测值跳值引起的。跳值为样本及测试条件所导致的非重现性假阳性或初测假阳性。测试结果表现为发光值偏高，经过重复测试，结果趋于正常；且该现象的重现性低，与系统的精密度无关。检测结果出现假阳性致使诊断结果不准确，导致误诊，后果十分严重。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供CHAPS的新应用，具体是在制备降低测值跳值的化学发光免疫检测试剂盒中的应用。
[0005]本专利技术人通过大量研究实验发现，常规的检测技术出现跳值的原因，是因为样本在采集处理过程中没有按照正规操作执行，使得处理后的血清中出现不可溶的纤维蛋白或者细胞碎片，从而在测试反应过程中影响抗原抗体的结合，而加入的CHAPS，可有效增加血清样本中膜蛋白或破碎的细胞片段的溶解，降低测试反应中引入的非特异性反应，从而有效降低测试引入的跳值概率。
[0006]本专利技术提供了CHAPS在制备用于降低测值跳值化学发光免疫检测试剂盒中的应用，该应用试纸该化学发光免疫检测试剂盒中包括CHAPS，CHAPS的使用浓度为0.1
‑
1g/L。
[0007]优选地，所述的化学发光免疫检测试剂盒包括乙型肝炎病毒表面、乙型肝炎病毒e抗原、梅毒螺旋体抗体、丙型肝炎病毒抗体、人类免疫缺陷病毒抗原和抗体检测试剂盒。
[0008]本专利技术的有益效果如下，CHAPS(3
‑
(3
‑
(胆酰胺丙基)二甲氨基)丙磺酸内盐)，是一
种两性表面活性剂，也是一种非变性的去垢剂，申请人意外发现，该化合物应用于化学发光免疫检测试剂盒中，可有效增加血清样本中膜蛋白或破碎的细胞片段的溶解，降低测试反应中引入的非特异性反应，从而有效降低化学发光免疫检测试剂盒测试的跳值概率。
具体实施方式
[0009]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术具体实施例对本专利技术技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0010]实验试剂
[0011]乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
1和乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
2购自Meridian，乙型肝炎病毒e抗原特异性抗体
‑
1和乙型肝炎病毒e抗原特异性抗体
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2购自武汉奥科，磁纳米微粒均由基蛋生物医药有限公司提供，吖啶酯和生物素均购自阿拉丁。小牛血清(Gibco公司)，其它试剂以及耗材若无特殊说明，均购自Sigma
‑
Aldrich公司。
[0012]实施例1
[0013]一种降低乙型肝炎病毒表面抗原跳值检测试剂盒
[0014]包括链霉亲和素包被羧基磁纳米微粒、吖啶酯标记乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
1、含有CHAPS的生物素标记的乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
2，还包括化学发光激发液A液和B液，清洗液。
[0015]上述检测试剂盒中各组分具体的制备方法如下：
[0016]1.1链霉亲和素包被羧基磁纳米微粒的制备：
[0017]A.将羧基磁纳米微粒清洗并替换为所需缓冲液。具体步骤：取1mL粒径为1μm的羧基磁纳米微粒于离心管放置微磁性分离架上磁性分离，约1分钟后，吸取澄清液体，加入1mL的50mM PH＝5.5MES缓冲液重新吹打分散，重复两次以上步骤。
[0018]B.按照羧基磁纳米微粒：EDC：NHS＝1:0.5:0.5的质量比将EDC和NHS加入悬浮MES的羧基磁性微球中反应30分钟，反应结束后清洗三次。
[0019]C.根据溶液中分散磁性微球的质量浓度推算出所需偶联的链霉亲和素的质量浓度，按照链霉亲和素：磁纳米微粒＝1:10的质量比将链霉亲和素缓慢滴加到分散好的磁性微球中。室温充分搅拌反应12小时后，向体系中加入BSA以及甘氨酸溶液封闭磁性微球上空余的位点，BSA及甘氨酸的浓度为0.2％，充分搅拌封闭1小时后用PBS
‑
T清洗3次即可。使用含2％BSA的PBS缓冲液将工作浓度调整为2.5mg/mL。
[0020]1.2.吖啶酯标记乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
1的制备：
[0021]吖啶酯用DMSO溶解成浓度为1mg/ml，根据乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
1：吖啶酯＝1:10的摩尔比，将乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
1用50mM PH＝7.6的磷酸盐缓冲液稀释成所需浓度后，加入吖啶酯溶液。37摄氏度下反应1小时后，透析除去未结合的吖啶酯即可。吖啶酯标记的抗体用含2％BSA的PBS缓冲液稀释至使用工作浓度为0.4μg/mL。
[0022]1.3含有CHAPS的生物素标记乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
2的制备：
[0023]生物素用DMF溶解成浓度为10mg/ml，根据乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
2：生物素＝1:10的摩尔比，将乙型肝炎病毒表面抗原特异性抗体
‑
2用50mM PH＝9.0的碳酸盐
缓冲液稀释成所需浓度后，加入FITC溶液，37摄氏度下反应2小时后，透析除去未结合的FITC即可，用含2％mg/mL BSA的PBS缓冲液稀释至使用工作浓度为2μg/M本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CHAPS在制备降低测值跳值的化学发光免疫检测试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，CHAPS的使用浓度为0.1
‑
1g/L。3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔松松，赵欢，
申请(专利权)人：基蛋生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：