一种具有抗氧化活性的天麻多糖制造技术

本发明专利技术公开一种具有抗氧化活性的天麻多糖RGCP

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗氧化活性的天麻多糖


[0001]本专利技术涉及天然产物活性成分
，具体涉及一种具有抗氧化活性的天麻多糖。

技术介绍

[0002]天麻别名赤箭、定风草、独摇兰、离母、合离草，为兰科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎。天麻是多年生共生植物，须与白蘑科密环菌共生。天麻主产于陕西、云南、贵州及四川等地，是我国名贵中药材。我国传统中医认为天麻具有平肝息风、镇静安眠的功效。
[0003]自由基的增加是产生衰老的重要因素。多糖对氧自由基的产生和红细胞脂质过氧化作用均有抑制作用，具有SOD样物质的活性。自由基产生过量可以引起生物膜和DNA的氧化性损伤，导致癌症、动脉硬化、衰老和多种老年慢性疾病，如使用生物抗氧化剂切断过氧化链式反应可以抑制机体的自由基损伤，从而保持最佳健康状态和防治这些疾病，延缓衰老。
[0004]多糖是一类天然高分子化合物，是一切生命的有机体必不可少的成分，同维持生物机能密切相关。目前对天麻的研究主要集中在天麻素、酚类和苷类，而天麻多糖也是天麻中重要的活性成分，是除天麻素、对羟基苯甲醇等药效成分外含量最丰富的物质，并且天麻多糖具有一系列的药理活性，因此，分离天麻中的多糖，挖掘其活性成分，对天麻药材的深度开发和保障人民生命健康及促进产业发展均具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种从天麻中提取的天麻多糖RGCP
‑
3，其为白色或者淡黄色絮状粉末，RGCP
‑
3峰位分子量为32769 Da，重均分子量为39991 Da，数均分子量为27487 Da。
[0006]本专利技术天麻多糖RGCP
‑
3具有较高的DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力和还原能力，并且对H2O2诱导的RAW264.7细胞氧化损伤具有较好的保护作用。
[0007]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：（1）新鲜天麻清洗干净，蒸至透心无白心，置于40
‑
50℃烘箱中烘干，干燥后粉碎；（2）按照质量体积比g:mL=1:15
‑
25的比例，在步骤（2）天麻粉末中加入蒸馏水，在60℃水浴锅中浸提，离心，滤渣反复提取2
‑
4次，收集合并滤液，滤液减压浓缩至原体积1/6；（3）在步骤（2）浓缩液中加入浓缩液体积3
‑
5倍的无水乙醇，在4℃下静置，过滤，收集沉淀物，将沉淀物放置于37℃烘箱内，使乙醇挥干，即得天麻多糖粗提物；（4）在天麻多糖粗提物中加入蒸馏水，60℃水浴2h，离心，除去不溶物，留上清，此步骤重复2次；（5）取步骤（4）得到的上清液，加入sevage试剂（氯仿:正丁醇=4:1）除蛋白，放至摇床内剧烈震荡，取出倒入分液漏斗中，静置分层，弃除中间相和下相，上相继续加sevege试剂除蛋白，若两相之间的液面有白色物质则继续加sevege试剂除蛋白，若没有白色物质则
说明蛋白质基本除干净；（6）将除蛋白后的糖液转移至透析袋中，每6h更换一次蒸馏水透析2
‑
3d；（7）将透析后的糖液置于
‑
80℃，通过冷冻干燥获得天麻粗多糖GCP；（8）将天麻粗多糖GCP溶解于蒸馏水中，上样于DEAE
‑
52纤维素层析柱，用0、0.1、0.2 mol/L NaCl溶液连续梯度洗脱，用自动部分收集器收集洗脱液，采用苯酚
‑
硫酸法和分光光度计跟踪监测洗脱情况，根据吸光值绘制洗脱曲线，收集洗脱峰对应的液体，透析后冷冻干燥，获得若干个多糖；（9）将步骤（8）得到的多糖分别上样于Sephadex G
‑
50葡聚糖凝胶层析柱进一步纯化，用0.1 mol/L NaCl溶液洗脱，用自动部分收集器收集洗脱液，苯酚
‑
硫酸法与分光光度计法跟踪监测洗脱情况，根据吸光值绘制曲线，收集洗脱峰对应的液体，透析后冻干，即得纯化的天麻多糖；（10）通过紫外分光度法、高效液相色谱法和红外光谱法等方法对天麻多糖RGCP
‑
2和RGCP
‑
3的结构进行初步分析；（11）天麻多糖RGCP
‑
3 DPPH抗氧化活性检测。
[0008]本专利技术的优点和技术效果：（1）本专利技术的多糖RGCP
‑
3为天然提取物，是从天麻中提取得到的新型多糖，具有良好的安全性；多糖RGCP
‑
3的峰位分子量为32769 Da，重均分子量为39991 Da，数均分子量为27487 Da，为高纯度、均一性多糖；（2）本专利技术的天麻多糖RGCP
‑
3具有较好的抗氧化活性，可为制备抗氧化药物或保健品提供新的选择；（3）本专利技术的天麻多糖RGCP
‑
3制备工艺简单，成本低，适于大规模工业生产。
附图说明
[0009]图1天麻粗多糖GCP的DEAE
‑
52阴离子交换层析洗脱曲线图；图2天麻粗多糖GCP
‑
2的Sephadex G
‑
50凝胶柱层析洗脱曲线图；图3天麻粗多糖GCP
‑
3的Sephadex G
‑
50凝胶柱层析洗脱曲线图；图4天麻粗多糖GCP
‑
4的Sephadex G
‑
50凝胶柱层析洗脱曲线图；图5天麻多糖RGCP
‑
2、RGCP
‑
3和RGCP
‑
4的紫外光谱图；图6天麻多糖RGCP
‑
2高效凝胶渗透色谱图；图7天麻多糖RGCP
‑
3高效凝胶渗透色谱图；图8天麻多糖RGCP
‑
4高效凝胶渗透色谱图；图9标准单糖混合物HPLC图；图10天麻多糖RGCP
‑
2和RGCP
‑
3的PMP衍生物HPLC图；图11天麻多糖RGCP
‑
2和RGCP
‑
3的刚果红实验图；图12天麻多糖RGCP
‑
2的红外光谱图；图13天麻多糖RGCP
‑
3的红外光谱图；图14天麻多糖RGCP
‑
2和RGCP
‑
3对DPPH 自由基的清除能力结果；图15天麻多糖RGCP
‑
2和RGCP
‑
3对羟基自由基的清除能力结果；图16天麻多糖RGCP
‑
2和RGCP
‑
3的总还原力结果；
图17天麻多糖对H2O2诱导损伤的保护作用。
具体实施方式
[0010]下面通过实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细说明，但本专利技术的内容并不局限于此，本实施例中方法如无特殊说明均为常规方法，所用材料、试剂等如无特殊说明均从商业途径所得到；实施例中多糖含量测定采用苯酚
‑
硫酸法：取每管多糖0.5 mL，再加入0.5 mL蒸馏水，加入现配的6%苯酚溶液0.5 mL，然后加入本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化活性的多糖RGCP
‑
3，其来源于天麻，天麻多糖RGCP
‑
3峰位分子量为32769 Da，重均分子量为39991 Da，数均分子量为27487 Da，为均一性多糖。2.根据权利要求1所述的具有免疫调节活性的多糖，其特征在于：天麻多糖RGCP
‑
3为α构型吡喃糖，由摩尔比为0.254%甘露糖、0.3...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨野，徐婷婷，陈卓文，王承潇，崔秀明，曲媛，杨晓艳，刘源，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：