一种用于血样的叶酸解离剂与应用制造技术

本发明专利技术公开一种用于血样的叶酸解离剂及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术所述的叶酸解离剂包括如下组分：处理液1：50mM 2

【技术实现步骤摘要】
一种用于血样的叶酸解离剂与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于血样的叶酸解离剂及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]研究表明营养性贫血和巨红细胞性贫血可能会引起叶酸不足，怀孕期间血清叶酸水平低可能会导致与胎儿神经管缺损。孕妇定期检测血液中的叶酸含量具有有非常重要的临床意义。
[0003]现有技术中叶酸检测的解离剂多用尿素、蛋白酶K、表面活性剂等对叶酸进行解离，但该方法中残留的尿素和蛋白酶K等，会对后续测定造成影响，使测定结果不准确。有些解离剂有三种或以上组分，使用起来比较繁琐，而且增加了反应时间。

技术实现思路

[0004]专利技术目的：本专利技术需要解决的技术问题是提供一种用于血样的叶酸解离剂，以解决现有技术中叶酸检测结果不准确、使用繁琐等问题。
[0005]本专利技术还要解决的技术问题是提供上述用于血样的叶酸解离剂在检测却倾叶酸含量中的应用。
[0006]技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]一种用于血样的叶酸解离剂，包括如下组分：
[0008]处理液1：50mM 2
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(N
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吗啉基)乙磺酸、50mM二硫苏糖醇，pH5.5；
[0009]处理液2：氢氧化钠20g/L。
[0010]上述用于血样的叶酸解离剂在血清叶酸含量检测中的应用在本专利技术的保护范围之内。
[0011]血清中叶酸含量的检测方法，包括如下步骤：
[0012](1)第1次孵育：将血清样本与处理液1、处理液2混合，共同孵育，在 37℃，反应15min；
[0013]所述处理液1的配方如下：50mM 2
‑
(N
‑
吗啉基)乙磺酸、50mM二硫苏糖醇， pH5.5；
[0014]所述处理液2为氢氧化钠20g/L；
[0015](2)第2次孵育：将步骤(1)处理后的样本与碱性磷酸酶标记的叶酸结合蛋白共同孵育，在37℃，反应5min，形成复合物，复合物的浓度与样本中的叶酸浓度相关；
[0016](3)第3次孵育：添加包被链霉素的磁珠微粒和生物素标记的叶酸后，在 37℃，反应10min；
[0017](4)将磁微粒洗涤5次，转到检测杯中，加入化学发光底物，在37℃，使底物在复合体的催化下化学发光，并通过光子计数器测量发光强度。
[0018]步骤(1)中，所述的血清样本与处理液1、处理液2混合的体积比为1:2:2。
[0019]步骤(4)中，所述化学发光底物为AMPPD、APS
‑
5中的任意一种。
[0020]有益效果：本专利技术具有如下突出的技术效果：
[0021]本专利技术公开了一种用于血样的叶酸解离剂与应用，利用本专利技术所提供的叶酸解离剂检测血清中叶酸的含量具有准确、灵敏度高、用时间短等优势，便于医生快速精准的判断病人是否缺乏叶酸或者过量。
附图说明
[0022]图1不同的解离剂测得叶酸的含量(ng/mL)。
[0024]具体实施步骤
[0025]根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。
[0026]实施例1：叶酸解离和测定方法。
[0027]第1次孵育：取25μL样本，加入处理液1为50μL和处理液2为50μL，混匀，在37℃，孵育15min，将结合的内源性叶酸释放。
[0028]第2次孵育：将处理后的样本与碱性磷酸酶标记的叶酸结合蛋白共同孵育，在37℃，反应5min，形成复合物，复合物的浓度与样本中的叶酸浓度相关。
[0029]第3次孵育：添加包被链霉素的磁珠微粒和生物素标记的叶酸后，在37℃，反应10min，碱性磷酸酶标记的叶酸结合蛋白的未结合位点将全部结合，生成碱性磷酸酶标记的叶酸结合蛋白
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叶酸
‑
生物素复合体。然后整个复合物在生物素和链霉亲合素的相互作用下结合到亲和素磁微粒上。
[0030]将磁微粒洗涤5次，除掉非特异性结合的干扰物质，转到检测杯中，加入化学发光底物，在37℃，使底物在复合体的催化下化学发光，并通过光子计数器测量发光强度。
[0031]通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2点定标和试剂条形码上获得的主曲线生成的。
[0032]实施例2：叶酸解离剂的优化。
[0033]改变叶酸处理液1中DTT的的含量，分析DTT对叶酸解离效果的影响。
[0034]解离剂A：
[0035]处理液1，50mM的MES，5mM的DTT(二硫苏糖醇)，pH5.5。
[0036]处理液2，含有氢氧化钠20g/L。
[0037]解离剂B：
[0038]处理液1，50mM的MES，50mM的DTT(二硫苏糖醇)，pH5.5。
[0039]处理液2，含有氢氧化钠20g/L。
[0040]解离剂C：
[0041]处理液1：50mM的MES，100mM的DTT(二硫苏糖醇)，pH5.5。
[0042]处理液2：含有氢氧化钠20g/L。
[0043]表1叶酸检测结果
[0044][0045][0046][0047]各组检测结果的拟合曲线见图1，从图1中可以看出，解离剂B的检测效果最佳。
[0048]实施例3：重复性测试。
[0049]用解离剂B作为本次实验的解离剂，测定ROCHE的样本10次，计算重复性。
[0050]解离剂B：
[0051]处理液1：50mM的MES，50mM的DTT(二硫苏糖醇)，pH5.5。
[0052]处理液2：含有氢氧化钠20g/L。
[0053]表2使用解离剂B重复测定10次的结果
[0054][0055]从表2中可以看出，使用本专利技术解离剂，测量ROCHE的样本10次，最大偏差不超过5％，重复性符合要求。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于血样的叶酸解离剂，其特征在于，包括如下组分：处理液1：50mM 2
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(N
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吗啉基)乙磺酸、50mM二硫苏糖醇，pH5.5；处理液2：氢氧化钠20g/L。2.权利要求1所述用于血样的叶酸解离剂在血清叶酸含量检测中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：(1)第1次孵育：将血清样本与处理液1、处理液2混合，共同孵育，在37℃，反应15min；所述处理液1的配方如下：50mM 2
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(N
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吗啉基)乙磺酸、50mM二硫苏糖醇，pH5.5；所述处理液2为氢氧化钠20g/L；(2)第2次...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄龙耀，周志图，
申请(专利权)人：无锡百泰克生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：