具有抗肿瘤活性的细胞及抑制肿瘤生长的方法技术

本发明专利技术涉及癌症免疫治疗技术领域，特别涉及一种具有抗肿瘤活性的细胞及应用有该树突状细胞的抑制肿瘤生长的方法。其中，所述、细胞与肿瘤细胞同系，并经表达载体所转导以表达CCL19或表达具有与CCL19相似生物活性结构和/或生物学功能且具有至少60％以上同源性序列的肽。所述方法为将前述、细胞在肿瘤内给药、淋巴结给药或全身给药。本发明专利技术所提供的细胞在肿瘤内给药可在所述肿瘤内表达足量的CCL19或所述肽以抑制肿瘤的生长。述肽以抑制肿瘤的生长。述肽以抑制肿瘤的生长。

【技术实现步骤摘要】
具有抗肿瘤活性的细胞及抑制肿瘤生长的方法


[0001]本专利技术涉及癌症免疫治疗
，特别涉及一种具有抗肿瘤活性的细胞及应用有该树突状细胞的抑制肿瘤生长的方法。

技术介绍

[0002]功能性宿主专业抗原呈递细胞(APC)已被证明在免疫反应中起到至关重要的作用。树突状细胞(DC)是高度专业化的专业APC，具有捕获、加工和呈递T细胞抗原的强大能力。然而，肿瘤细胞干扰宿主DC的成熟和功能。为了避免肿瘤介导的DC成熟和功能抑制，离体细胞因子刺激的DC已被有效地用于临床试验和鼠类癌症模型。有充足的证据证明可以通过使用离体抗原脉冲的DC或用肿瘤RNA转染的DC来实现抗原特异性CTL反应。此外，使用细胞因子基因转导的肿瘤细胞和DC、肿瘤细胞与DC融合以及肿瘤内注射细胞因子修饰的DC的新型肿瘤抗原递送系统已被有效地用于诱导抗肿瘤免疫。有充足的证据证明通过离体刺激的DC递送肿瘤抗原在避免CTL耐受性方面优于纯化的肽。多种肿瘤抗原的疫苗接种可能优于单一表位的疫苗接种，并且这些免疫反应可以通过共同使用免疫增强细胞因子来增强。因此，科学界已经提出可以通过募集专业的宿主APC用于肿瘤抗原呈递以促进特异性T细胞活化来实现有效的抗癌免疫。
[0003]CCL19是在高内皮小静脉、脾脏和淋巴结的T细胞区表达的CC类趋化因子，它可以强烈吸引未成熟的T细胞和DC。因此，推测将CCL19递送至肿瘤部位可能是有益的，因为它将使T细胞和DC共定位，从而可能逆转肿瘤介导的免疫抑制并协调有效的细胞介导的免疫反应。CCL19吸引DC的能力是其他趋化因子共有的特性。但是，CCL19可能具有明显的优势，因为它具有在体内引发1型细胞因子应答的能力。除了其免疫治疗潜力外，趋化因子具有有效的血管抑制作用。的在先研究中已经证明，在已建立的肺癌的鼠模型中，瘤内给予的重组趋化因子引起有效的抗肿瘤反应。使用两个可移植的鼠类肺癌模型，已经证明趋化因子的抗肿瘤功效是T细胞依赖性的。趋化因子介导的抗肿瘤反应依赖于CD4和CD8淋巴细胞亚群，并伴有肿瘤的DC浸润。Vicari等证实了在C26结肠癌模型中早期发现的结果，即使用趋化因子cDNA转导的C26结肠癌细胞证明趋化因子转导的肿瘤细胞具有降低的致瘤性，这归因于免疫学和血管抑制机制。在最近直接支持这种趋化因子抗血管生成能力的研究中，Arenberg等人报道了趋化因子在SCID小鼠模型中抑制人肺癌的生长和血管生成。Dubinett等人进一步报道了表达趋化因子CCL21的树突细胞(DC)在动物模型的抗肿瘤效应(US20160058837A1)。

技术实现思路

[0004]为了克服上述现有技术的缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种具有抗肿瘤活性的新型树突状细胞及应用有该树突状细胞的抑制肿瘤生长的方法。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种具有抗肿瘤活性的细胞，所述细胞与肿瘤细胞同系，并经表达载体所转导以表达CCL19或表达具有与CCL19相似生物活性结构和/
或生物学功能且具有至少60％以上同源性序列的肽。
[0006]进一步提供一种抑制肿瘤生长的方法，包括将前述细胞以肿瘤内给药、淋巴结给药或全身给药。
[0007]本专利技术的有益效果在于：本专利技术所提供的细胞(树突状细胞)在小鼠肺癌模型表现出优秀的抗肿瘤活性。经过三周的施用，小鼠体内肿瘤被彻底根除。同时，在治疗过程中，检测到CD4+，CD8+和CD3+CXCR3+T细胞以及表达CD11c+DEC205+的DC增加，治疗后浸润肿瘤的CD4+CD25+T调节细胞明显减少，同时也被观察到肿瘤部位的细胞浸润伴随着粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，IFN
‑
γ，MIG/CXCL9，IP
‑
10/CXCL10和白介素12的增加，但转化生长因子β和前列腺素E2的免疫抑制因子在减少。并且在治疗后的肿瘤部位中显示出分泌IFN
‑
γ的肿瘤特异性T淋巴细胞的频率增加，以及诱导了肿瘤保护性免疫。
附图说明
[0008]图1所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下抗肿瘤反应的折线图；
[0009]图2所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下注射侧肿瘤生长的折线图；
[0010]图3所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下注射对侧肿瘤生长的折线图；
[0011]图4所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下增强肿瘤部位T细胞亚群和树突状细胞(DC)的频率的柱形图；
[0012]图5所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下Ⅰ型细胞因子表达量的柱状图；
[0013]图6所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下免疫抑制分子表达量的柱状图；
[0014]图7所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下诱导特异性T细胞应答的柱状图；
[0015]图8所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下抑制肿瘤生长的折线图；
[0016]图9所示为本专利技术在具体实施方式中不同测试条件下相关细胞因子表达量的柱状图。
[0017]图10所示为本专利技术在具体实施方式中插入有CCL19 cDNA片段的慢病毒载体质粒图谱。
具体实施方式
[0018]为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
[0019]一种具有抗肿瘤活性的细胞，所述细胞与肿瘤细胞同系，并经表达载体所转导以表达CCL19或表达具有与CCL19相似生物活性结构和/或生物学功能且具有至少60％以上同源性序列的肽。
[0020]其中，所述同系指所述细胞与肿瘤细胞具有相同的遗传背景，并且不发生免疫排斥反应，即所述细胞来源于具有该肿瘤细胞的哺乳动物。所述细胞可以为免疫细胞和/或APC细胞，即在一种实施方式中，所述细胞可以为免疫细胞、或APC细胞、或免疫细胞和APC细
胞的集群。优选地，所述细胞为APC细胞，更优选为树突状细胞。所述树突状细胞优选来源于哺乳动物的骨髓，即通过在所述哺乳动物的骨髓中分选获得所述树突状细胞。其中，所述哺乳动物可以为人、小鼠等，优选为人。
[0021]所述细胞通过在瘤内表达有效量的肽以抑制肿瘤的生长。所述CCL19根据具体的施用对象的不同进行特异性选择并表达。当施用对象为人时，所述CCL19的蛋白序列如SEQ ID：NP_006265.1(ncbi参考序列)。当施用对象为小鼠时，CCL19的蛋白序列如SEQ ID：NM_011888.2(ncbi参考序列)。当然，其余具有与CCL19相似的生物活性结构和/或生物学功能且具有至少60％以上同源性序列的肽均能实现本申请所期望的抑制肿瘤生长的效果。示例性地，所述肽具有与CCL19至少60％以上的同源性，如60％、70％、80％、90％、95％等。
[0022]所述肿瘤细胞为自发性癌细胞，优选为肺癌细胞。
[0023]所述肽在由所述肿瘤细胞聚集的肿瘤部位内表达。即在一种实施方式中，通过将所述细胞以瘤内给药的方式接种在肿瘤部位中，以实现所述肽在肿瘤部位内表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗肿瘤活性的细胞，其特征在于，所述细胞与肿瘤细胞同系，并经表达载体所转导以表达CCL19或表达具有与CCL19相似生物活性结构和/或生物学功能且具有至少60％以上同源性序列的肽。2.根据权利要求1所述细胞，其特征在于，所述肿瘤细胞为自发性癌细胞。3.根据权利要求2所述细胞，其特征在于，所述自发性癌细胞为肺癌细胞。4.根据权利要求1所述细胞，其特征在于，所述细胞为免疫细胞和/或APC细胞。5.根据权利要求4所述细胞，其特征在于，所述细胞为树突状细胞。6.根据权利要求1所述细胞，其特征在于，CCL19或所述肽在由所述肿瘤细胞聚集的肿瘤部位内表达。7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗捷，
申请(专利权)人：福建基源生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：