杂交瘤细胞、单克隆抗体和P4HB蛋白检测试剂制造技术

本发明专利技术公开了一种杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCCNO:C2022108。本发明专利技术的杂交瘤细胞能够分泌与P4HB蛋白特异性结合的单克隆抗体，且单克隆抗体的效价高、纯度高、与P4HB蛋白亲和力高、特异性好，能够有效对P4HB蛋白进行定性和/或定量检测，进而通过对P4HB蛋白进行定性和/或定量检测实现癌症恶质病的诊断或预后，简化癌症恶质病的诊断和检测流程，降低癌症恶质病的评估费用。低癌症恶质病的评估费用。低癌症恶质病的评估费用。

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞、单克隆抗体和P4HB蛋白检测试剂


[0001]本申请涉及免疫检测
，具体而言，涉及一种杂交瘤细胞、单克隆 抗体和P4HB蛋白检测试剂。

技术介绍

[0002]恶病质(恶液质)，也称为癌症恶病质或癌症厌食症恶病质，是一种消耗 性综合征。它是由于慢性疾病，如癌症，以及没有摄入足够的营养(营养不良) 而产生的肌肉、脂肪含量丢失的情况。癌症相关的恶病质通常不发生在患癌早 期，一般在癌症晚期和肿瘤出现转移时发生。癌症恶病质影响着大约50％
‑
80％ 的癌症患者，且约有20％的癌症患者死于恶病质。恶病质降低了患者对化疗、 放疗和手术的承重能力及治疗效应，也直接影响患者生存质量和预后。
[0003]临床上以体重下降5％或体重指数BMI＜20kg/m2或已经出现骨骼肌量减少 者体重下降2％作为恶病质的诊断标准，因此，现有恶病质的诊断、监测的过程 较为复杂，且评估费用较高。
[0004]研究指出，P4HB介导骨骼肌萎缩从而导致恶病质发生，抑制P4HB可以阻 断恶病质的恶化，增加癌症恶病小鼠的存活率。已有表观基因组关联分析报道， P4HB基因与人身体质量指数(Body mass index,BMI)有很强的相关性 (1.7
×
10
‑
16
)。相关功能学研究揭示出P4HB蛋白能够加速糖基化终产物诱导的 平滑肌细胞凋亡。因此，P4HB可以作为癌症恶病质的诊断或预后标志物。
[0005]然而，目前缺乏有效的P4HB蛋白检测试剂用于癌症恶病质的诊断或预后。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，提供有效的P4HB蛋白检测试剂，本申请的第一目的 在于提供一种杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCC NO:C2022108，其 能够分泌特异性结合P4HB蛋白单克隆抗体，以用于检测P4HB蛋白，进而用于 癌症恶病质的诊断或预后。
[0007]本申请的第二目的在于提供一种单克隆抗体，单克隆抗体由上述杂交瘤细 胞分泌。
[0008]在其中一个实施例中，单克隆抗体为IgG抗体。
[0009]本申请的第三目的在于提供一种单克隆抗体在制备P4HB蛋白检测试剂中 的应用。
[0010]在其中一个实施例中，P4HB蛋白检测试剂用于执行以下至少一种检测方法： 酶联免疫吸附试验法、免疫荧光法、免疫胶体金法、免疫化学发光法、免疫比 浊法、免疫印迹法以及斑点印迹法。
[0011]本申请的第四目的在于提供一种P4HB蛋白检测试剂，包括保藏编号为 CCTCC NO:C2022108的杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体。
[0012]在其中一个实施例中，单克隆抗体用于执行以下至少一种检测方法：酶联 免疫吸
附试验法、免疫荧光法、免疫组织化学法、免疫胶体金法、免疫化学发 光法、免疫比浊法、免疫印迹法以及斑点印迹法。
[0013]在其中一个实施例中，试剂盒还包括单克隆抗体执行上述至少一种检测方 法使用的其他检测试剂。
[0014]在其中一个实施例中，检测试剂还包括用于检测单克隆抗体的标记抗体。
[0015]在其中一个实施例中，标记抗体为抗IgG抗体。
[0016]在其中一个实施例中，标记抗体连接有标记物，标记物选自发色团、地高 辛标记探针、电子致密物质、胶体金及产生可检测信号的酶中的至少一种。
[0017]在其中一个实施例中，标记物包括辣根过氧化物酶。
[0018]本申请的第五目的在于提供一种非疾病诊断目的的P4HB蛋白检测方法， 包括：采用权利要求上述的试剂检测P4HB蛋白。
[0019]本申请的第六目的在于提供上述的试剂在制备恶病质检测试剂盒中的用途。
[0020]本申请的第七目的在于提供一种恶病质检测试剂盒，包括上述的试剂。
[0021]在其中一个实施例中，试剂盒还包括抗体阳性对照试剂、阴性对照试剂、 稀释用缓冲液、脱蜡试剂、水化试剂、抗原修复试剂、封闭试剂、显色试剂、 复染试剂以及封片试剂中的至少一种。
[0022]本申请的第八目的在于提供一种上述杂交瘤细胞的制备方法，包括：以人 P4HB蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞 以及小鼠饲养细胞混合进行细胞融合，其后筛选出能够分泌P4HB抗原单克隆 抗体的阳性融合细胞，即为杂交瘤细胞。
[0023]本申请的杂交瘤细胞能够分泌与P4HB蛋白特异性结合的单克隆抗体，且 单克隆抗体的效价高、纯度高、与P4HB蛋白亲和力高、特异性好，能够特异 性地对P4HB蛋白进行定性和/或定量检测，进而通过对P4HB蛋白进行定性和/ 或定量检测实现癌症恶质病的诊断或预后，简化癌症恶质病的诊断和检测流程， 降低癌症恶质病的评估费用。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本申请具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将 对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见 地，下面描述中的附图是本申请的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来 讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0025]图1为本申请实施例1中采用ELISA法筛选抗人P4HB蛋白特异性杂交瘤 细胞的实验结果示意图；
[0026]图2为本申请实施例1中采用ELISA法检测单克隆抗体3B1D9效价的实验 结果示意图；
[0027]图3为本申请实施例3中单克隆抗体3B1D9的亚型鉴定结果示意图；
[0028]图4为本申请实施例3中单克隆抗体3B1D9的纯度检测结果示意图；
[0029]图5为本申请实施例3中单克隆抗体3B1D9的特异性检测结果示意图；
[0030]图6为本申请实施例3中单克隆抗体与人P4HB蛋白间结合传感图；
[0031]图7为本申请实施例3中单克隆抗体与人P4HB蛋白间Steady State Affinity 拟
合图；
[0032]图8为本申请实施例4中试剂盒检测恶病质患者中5例食管癌患者的肿瘤 组织中P4HB蛋白的结果图；
[0033]图9为本申请实施例4中试剂盒检测恶病质患者中3例胰腺癌患者的肿瘤 组织中P4HB蛋白的结果图；
[0034]图10为本申请实施例4中试剂盒检测恶病质患者中1例胃癌患者的肿瘤组 织中P4HB蛋白的结果图；
[0035]图11为本申请实施例4中试剂盒检测健康人胰腺癌组织中P4HB蛋白的结 果图；
[0036]图12为本申请实施例4中试剂盒检测健康人结肠癌组织中P4HB蛋白的结 果图；
[0037]图13为本申请实施例4中恶病质患者和健康人P4HB蛋白表达情况的差异 分析示意图。
具体实施方式
[0038]现将详细地提供本申请实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。 提供每一实例作为解释而非限制本申请。实际上，对本领域技术人员而言，显 而易见的是，可以对本申请进行多种修改和变化而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO:C2022108。2.单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞分泌。3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为IgG抗体。4.权利要求2或3所述的单克隆抗体在制备P4HB蛋白检测试剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述P4HB蛋白检测试剂用于执行以下至少一种检测方法：酶联免疫吸附试验法、免疫荧光法、免疫胶体金法、免疫化学发光法、免疫比浊法、免疫印迹法以及斑点印迹法。6.一种P4HB蛋白检测试剂，其特征在于，包括保藏编号为CCTCC NO:C2022108的杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体。7.根据权利要求6所述的试剂，其特征在于，所述试剂盒用于执行以下至少一种检测方法：酶联免疫吸附试验法、免疫荧光法、免疫组织化学法、免疫胶体金法、免疫化学发光法、免疫比浊法、免疫印迹法以及斑点印迹法。8.根据权利要求7所述的试剂，其特征在于，所述试剂盒还包括执行上述至少一种检测方法使用的除所述单克隆抗体外的其他检测试剂。9.根据权利要求8所述的试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括用于检测所述单克隆抗体的标记抗体。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建和，刘兵，韩文超，马亮，董俊军，邓联武，
申请(专利权)人：广州六顺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：