细胞保存液在制备免疫抑制剂中的用途制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种细胞保存液在制备免疫抑制剂中的用途。本发明专利技术提供细胞保存液在制备免疫抑制剂中的用途，采用特定方法获得的细胞保存液，将其应用于含有间充质干细胞的制剂(如注射用液)中，能够赋予注射用液一定的免疫抑制功能，与MSCs细胞结合提高治疗效果，并能提高MSCs的长时间运输能力以及活率。及活率。及活率。

【技术实现步骤摘要】
细胞保存液在制备免疫抑制剂中的用途


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种细胞保存液在制备免疫抑制剂中的用途。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(MSCs)是一种源自中胚层的多能干细胞，具有多种功能，其中研究最多的是其免疫调节的能力，应用上已有用于治疗克罗恩病和GVHD等，发挥作用的机理除了细胞与细胞之间的作用外，更重要的是细胞的旁分泌作用，经过MSC细胞培养的培养上清对于免疫细胞具有增殖抑制的作用，但不会影响免疫细胞的活性。
[0003]生理盐水是最常用的细胞重悬液，是细胞运输过程中的保存液体最常用的液体，本身属于临床用品，优势在于实验室制备好细胞重悬后不需要再次处理，可直接用于临床。生理盐水在短期运输可以使用，其保证细胞的活性时间约10h，但在长期运输过程中细胞活性会随时间逐渐下滑，无法进行长途运输，尤其是在制备成高浓度针剂的情况下。
[0004]目前亟需开发一种能够用于MSC制剂长期运输的保存液。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提供细胞保存液在制备免疫抑制剂中的用途，采用特定方法获得的细胞保存液，将其应用于含有间充质干细胞的制剂(如注射用液)中，能够赋予注射用液一定的免疫抑制功能，与MSCs细胞结合提高治疗效果，并能提高MSCs的长时间运输能力以及活率。
[0006]通过3D化形成细胞球后在生理盐水中以一定的条件下进行培养，细胞球在该条件下会分泌大量有利于细胞存活的分泌因子，在培养一定的时间后去除细胞，只保留细胞的分泌产物，在MSCs细胞的细胞运输过程中使用该培养上清，有利于细胞在运输过程中的保护。可延长保存时间，提高细胞活率。同时提升MSCs细胞的免疫抑制功能。
[0007]为此，本专利技术第一方面提供细胞保存液在制备免疫抑制剂中的用途。根据本专利技术的实施方案，所述细胞保存液通过以下方法制备：
[0008](1)制备3D细胞球；
[0009](2)对所述3D细胞球进行重悬，并进行孵化，以便获得细胞球悬液；
[0010](3)去除所述细胞球悬液中的细胞组分，以便获得细胞保存液，
[0011]其中，所述孵化的温度为0℃
‑
37℃，孵化时间为2h
‑
170h。
[0012]细胞保护液是一种专门配制的用于细胞保存的液体，细胞在保存其中的活性能够相对较长时间的保护。使得细胞可以在0℃
‑
20℃区间内在较长的时间内维持细胞的活性。但重悬液本身成分上往往由非临床药品组成，长途运输后在使用前往往需要重新去除重悬液后再使用，一方面增加了使用负担，也增加了使用成本，常规细胞保存液的浓度往往为1～2*10^6cells/mL密度，无法用于高浓度针剂。
[0013]通过3D化形成细胞球后在生理盐水中以一定的条件下进行培养，细胞球在该条件
下会分泌大量有利于细胞存活和免疫抑制的分泌因子，在培养一定的时间后去除细胞，只保留细胞的分泌产物，在常规的细胞运输过程中使用该培养上清，有利于细胞在运输过程中的保护，同时具备一定的免疫抑制能力。可延长保存时间，提高细胞活率。使用该保存液的细胞活率仍能在72h内保持80％以上的活率，并具备免疫抑制功能，适用于长时间的运输。有利于细胞的临床使用和提高治疗效果。
[0014]根据本专利技术的实施方案，所述3D细胞球中含有的细胞选自间充质细胞。
[0015]根据本专利技术的实施方案，所述3D细胞球中含有的细胞选自所成纤维母细胞、脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞中的至少之一。
[0016]根据本专利技术的实施方案，所述3D细胞球的形成方法包括自成球和载体成球。
[0017]根据本专利技术的实施方案，在步骤(2)中，对所述3D细胞球进行重悬时所用的重悬液选自氯化钠注射液、复方氯化钠注射液、乳酸钠林格注射液、葡萄糖注射液中的至少之一。
[0018]使用的细胞悬液本身为临床级注射液，安全性可靠，不添加外源性的保护物质，降低了长途运输的使用难度，使得细胞在长途运输后可直接使用。间充质干细胞运输过程使用的保护液在短时间内可有效保存，但在长时间的运输条件下细胞活率会迅速降低，增加了使用难度，通过使用本技术方案悬液，间充质干细胞在本技术方案悬液中可有效延长细胞数量及细胞活率，增加了使用方便性，间充质干细胞在本技术方案制备的悬液中可延长在常温下细胞的活率，同时悬液中含有较高含量的抑炎因子的含量可以提高间充质干细胞在使用中对炎症发生疾病的疗效。
[0019]根据本专利技术的实施方案，制备3D细胞球的方法包括：
[0020]1)取出冻存的细胞进行复溶和重悬；
[0021]2)将重悬后的所述细胞在含有4
‑
8％FBS的DMEM培养基中培养；
[0022]3)对培养后的所述细胞进行胰酶消化，获得消化后的细胞；
[0023]4)将所述消化后的细胞进行重悬，获得细胞重悬液；
[0024]5)将所述细胞重悬液接种至培养皿中，进行培养，以便获得3D细胞球。
[0025]根据本专利技术的实施方案，所述3D细胞球中含有的细胞选自间充质细胞。
[0026]根据本专利技术的实施方案，所述3D细胞球中含有的细胞选自所成纤维母细胞、脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞中的至少之一。
[0027]根据本专利技术的实施方案，步骤4)中，利用生理盐水对所述消化后的细胞进行重悬。
[0028]根据本专利技术的实施方案，所述免疫抑制剂中含有间充质干细胞。
[0029]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0030]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0031]图1显示了本专利技术一个实施方案的细胞球悬液制备流程图；
[0032]图2中A显示了本专利技术实施例1中药物处理MSC后对免疫细胞的增殖抑制能力的影响；B图显示了本专利技术实施例1中药物处理的悬液对免疫细胞进行预处理后细胞的活率；
[0033]图3展示了MSCs对免疫细胞的增殖抑制；
[0034]图4显示了MSCs 2D培养上清以及3D球培养上清中TNF
‑
β、VEGF、透明质酸、ANG
‑
1的含量；
[0035]图5显示了培养上清对免疫细胞的增殖抑制作用；
[0036]图6展示了不同培养方案中PGE
‑
2的分泌量；
[0037]图7展示了培养上清对免疫细胞的增殖抑制能力；
[0038]图8显示了不同细胞数成球后细胞形态大小；
[0039]图9展示了传代细胞成球状态和复苏细胞成球状态；
[0040]图10展示了A组24小时成球状态10X(A图)；B组48h细胞成球状态20X(B图)；C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.细胞保存液在制备免疫抑制剂中的用途，其特征在于，所述细胞保存液通过以下方法制备：(1)制备3D细胞球；(2)对所述3D细胞球进行重悬，并进行孵化，以便获得细胞球悬液；(3)去除所述细胞球悬液中的细胞组分，以便获得细胞保存液，其中，所述孵化的温度为0℃
‑
37℃，孵化时间为2h
‑
170h。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述3D细胞球中含有的细胞选自间充质细胞；任选地，所述3D细胞球中含有的细胞选自所成纤维母细胞、脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞中的至少之一。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述3D细胞球的形成方法包括自成球和载体成球。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，在步骤(2)中，对所述3D细胞球进行重悬时所用的重悬液选自氯化钠注射液、复方氯化钠注射液、乳酸钠林格注...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱智彬，魏明军，雷思佳，陈依琳，肖小玲，洪柳妮，朱理圳，叶妙妙，雷大庆，陈塨仪，
申请(专利权)人：深圳市三启生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：